赤霞珠葡萄葉片中以白藜蘆醇為底物的代謝酶的研究.pdf

1、白藜蘆醇(Rcsrevatrol，Res)做為一種天然的多酚物質(zhì)，在植物抗病、人類保健與抗病等方面有極其重要的作用。隨著自藜蘆醇生物活性的深入認(rèn)識(shí)和實(shí)驗(yàn)技術(shù)的不斷更新，人們?cè)谄咸训榷喾N植物中發(fā)現(xiàn)了白藜蘆醇衍生物及其類似物，這些衍生物和類似物被認(rèn)為是白藜蘆醇的代謝產(chǎn)物。在植物逆境生理、植物病理和植物育種等研究領(lǐng)域被廣泛關(guān)注。但是由于白藜蘆醇代謝在苯丙氨酸代謝途徑中至今還是一個(gè)空白，因而與其衍生物和類似物的關(guān)系至今仍不夠清晰。 本文

2、在此背景下，以赤霞珠葡萄扦插苗葉片為試材，建立了白藜蘆醇及其衍生物的高效液相色譜檢測(cè)方法和提取方法，研究了紫外誘導(dǎo)后葡萄葉片中白藜蘆醇及其部分重要衍生物的積累規(guī)律：確定了兩種代謝白藜蘆醇的酶分別是多酚氧化酶(PPO)和過(guò)氧化物酶(POD)；對(duì)白藜蘆醇代謝酶的代謝機(jī)制進(jìn)行了初步探討和研究。主要研究結(jié)果如下： (1)紫外誘導(dǎo)、避光處理后，白藜蘆醇、白藜蘆醇糖苷、ε-viniferin，δ-viniferin、紫檀芪五種芪化物均大量積

3、累，自藜蘆醇在72h內(nèi)出現(xiàn)兩次合成高峰。除白藜蘆醇糖苷以外，ε-viniferin，δ-viniferin、紫檀芪三種芪化物的合成高峰滯后于白藜蘆醇，出現(xiàn)在白藜蘆醇的第二個(gè)合成高峰； (2)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PPO代謝白藜蘆醇的主要產(chǎn)物為ε-viniferin，而POD代謝白藜蘆醇的產(chǎn)物為δ-viniferin。在兩種酶的粗酶反應(yīng)體系中還存在白藜蘆醇代謝的中間產(chǎn)物或其他產(chǎn)物。因此，本實(shí)驗(yàn)證明，白藜蘆醇至少存在兩種以上的代謝途徑；

4、(3)通過(guò)離子交換柱(Q-SepharoseFF)層析和疏水親和柱(Butyl-SepharoseFF)層析得到的酶蛋白，電泳結(jié)果表明：純化后酶液中一種代謝白藜蘆醇的PPO，分子量約為41.5kD，該酶不存在多亞基現(xiàn)象，其代謝產(chǎn)物為ε-viniferin; (4)雖然紫外誘導(dǎo)后葡萄葉片中δ-viniferin大量積累，但是電泳結(jié)果顯示，沒(méi)有新的POD同功酶合成。通過(guò)H2O2抑制實(shí)驗(yàn)，驗(yàn)證了POD在白藜蘆醇代謝中的作用;同時(shí)表明紫