人參CLASSⅢ幾丁質(zhì)酶基因克隆、序列分析及原核表達(dá).pdf

1、本文以人參為材料，首次從中克隆了ClassⅢ幾丁質(zhì)酶基因，并進(jìn)行了序列分析，研究了該基因在大腸桿菌中的表達(dá)情況，其主要結(jié)果如下： 1.通過(guò)RT-PCR與反向PCR方法，從人參中克隆到一個(gè)ClassⅢ幾丁質(zhì)酶基因，并進(jìn)行測(cè)序，全長(zhǎng)為1432bp，其中包含完整的開(kāi)放閱讀框即從第272位的起始密碼子到第1169位的終止密碼子，推測(cè)編碼蛋白的氨基酸序列含298個(gè)氨基酸殘基，無(wú)內(nèi)含子，并在GenBank上注冊(cè)(DQ532359)；

2、 2.人參ClassⅢ幾丁質(zhì)酶基因與其它植物ClassⅢ幾丁質(zhì)酶基因在核苷酸和氨基酸水平上有很高同源性；通過(guò)對(duì)人參ClassⅢ幾丁質(zhì)酶基因的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)分析得出，人參ClassⅢ幾丁質(zhì)酶和其它植物的ClassⅢ幾丁質(zhì)酶具有共同的起源；ClassⅠ、ClassⅡ和ClassⅣ幾丁質(zhì)酶來(lái)源于同一祖先，而ClassⅢ與ClassⅤ幾丁質(zhì)酶來(lái)源于同一祖先。3.人參ClassⅢ幾丁質(zhì)酶基因編碼一酸性幾丁質(zhì)酶，等電點(diǎn)pI為4.55，預(yù)測(cè)分子量為31.

3、4KD；人參ClassⅢ幾丁質(zhì)酶氨基酸序列含有兩個(gè)功能區(qū)域即N-端信號(hào)肽區(qū)和糖基水解酶18家族催化區(qū)；人參ClassⅢ幾丁質(zhì)酶蛋白的催化區(qū)內(nèi)，144-152為幾丁質(zhì)酶18家族的活性位點(diǎn)，序列為L(zhǎng)DGVDFDIE，活性中心為E(Glu)；人參ClassⅢ幾丁質(zhì)酶蛋白的成熟位點(diǎn)在第25-26的Ala-Gly之間； 4.用同源建模法模擬出人參ClassⅢ幾丁質(zhì)酶的空間結(jié)構(gòu)模型； 5.將人參ClassⅢ幾丁質(zhì)酶基因亞克隆到大腸桿