蜜蜂丙糖磷酸異構(gòu)酶基因的克隆分析及原核表達(dá)與純化研究.pdf

1、蜜蜂是重要的經(jīng)濟(jì)昆蟲，也是昆蟲大量試驗(yàn)的模式材料。丙糖磷酸異構(gòu)酶(Triosephosphate isomerase TPI or TIM，EC5.3.1.1)是生物中廣泛存在的一種糖酵解酶，存在于多種組織中，催化二羥丙酮磷酸與3-磷酸甘油醛之間的可逆反應(yīng)，且在糖酵解、脂肪酸合成、糖原異生和戊糖磷酸途徑中發(fā)揮著重要作用。為在分子水平上探明TPI的生物學(xué)功能，本文從意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)的肌肉組織中

2、提取總RNA，設(shè)計(jì)特異引物，采用RT-PCR的方法克隆了蜜蜂第16號(hào)染色體上的丙糖磷酸異構(gòu)酶(AMTPI)基因的cDNA序列。運(yùn)用生物信息學(xué)的方法對(duì)蜜蜂丙糖磷酸異構(gòu)酶基因及其編碼蛋白序列進(jìn)行了初步分析，得到了基因和蛋白質(zhì)組學(xué)研究中一些有價(jià)值的參數(shù)。AMTPI具有多種二級(jí)結(jié)構(gòu)形式，是典型的(α/β)8結(jié)構(gòu)，在SWISS-MODEL服務(wù)器三維建模后，運(yùn)用ViewerLite5.0進(jìn)行序列編輯，獲得了AMTPI的三級(jí)結(jié)構(gòu)模型。將測(cè)序結(jié)果(Ge

3、nBank登錄號(hào)EU76098)與GenBank中的其他物種進(jìn)行同源性分析。多重比對(duì)顯示AMTPI有多個(gè)保守結(jié)構(gòu)，物種間的整體相似度較高，與家蠶、德國(guó)小鐮、黃粉蟲、麗蠅蛹集金小蜂、水稻等物種的基因相似性達(dá)69％以上，蛋白相似性達(dá)59％以上，用MEGA4軟件按MinimumEvolution方案進(jìn)行分子系統(tǒng)演化分析，獲得了TPI氨基酸序列的分子進(jìn)化樹，這為研究意大利蜜蜂的系統(tǒng)發(fā)生、遺傳變異以及家系、亞家系的親緣關(guān)系提供理論依據(jù)。將目的基因