亞油酸異構(gòu)酶基因的克隆及表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、共軛亞油酸[conjugated linoleic0 acid,CLA)是必需脂肪酸亞油酸的衍生物,具有抗腫瘤、降低膽固醇、抗氧化、增強(qiáng)免疫等功能,而亞油酸本身并不具備這些功能。已有實(shí)驗(yàn)證明,亞油酸異構(gòu)酶(linoleic acid isinerase,LAI)可將亞油酸轉(zhuǎn)化為共軛亞油酸。亞油酸異構(gòu)酶及其基因的獲得對(duì)于工業(yè)化生產(chǎn)CLA具有重要的意義。
   本實(shí)驗(yàn)以發(fā)酵菌劑為原料,從中分離出一株菌落形態(tài)上與嗜酸乳桿菌相似的菌株,

2、經(jīng)16Sr DNA鑒定后確定為嗜酸乳桿菌NCFM,根據(jù)Genbank中公布的亞油酸異構(gòu)酶基因序列設(shè)計(jì)特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增,將PCR產(chǎn)物克隆到pMD19-T質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌,經(jīng)菌落PCR、酶切分析和DNA測(cè)序鑒定克隆成功后,亞克隆到表達(dá)質(zhì)粒pMG36e中,構(gòu)建表達(dá)載體pMG36e-LAI,轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5α中,經(jīng)菌落PCR和酶切分析初步證明轉(zhuǎn)化成功后進(jìn)行表達(dá)分析。
   將pMG36e-LAI-HD5α菌株進(jìn)行細(xì)胞破碎,提

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