亞油酸異構(gòu)酶基因的克隆及表達(dá).pdf_第1頁
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文檔簡介

1、共軛亞油酸[conjugated linoleic0 acid，CLA)是必需脂肪酸亞油酸的衍生物，具有抗腫瘤、降低膽固醇、抗氧化、增強(qiáng)免疫等功能，而亞油酸本身并不具備這些功能。已有實(shí)驗(yàn)證明，亞油酸異構(gòu)酶(linoleic acid isinerase，LAI)可將亞油酸轉(zhuǎn)化為共軛亞油酸。亞油酸異構(gòu)酶及其基因的獲得對于工業(yè)化生產(chǎn)CLA具有重要的意義。
　　 本實(shí)驗(yàn)以發(fā)酵菌劑為原料，從中分離出一株菌落形態(tài)上與嗜酸乳桿菌相似的菌株，

2、經(jīng)16Sr DNA鑒定后確定為嗜酸乳桿菌NCFM，根據(jù)Genbank中公布的亞油酸異構(gòu)酶基因序列設(shè)計特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，將PCR產(chǎn)物克隆到pMD19-T質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌，經(jīng)菌落PCR、酶切分析和DNA測序鑒定克隆成功后，亞克隆到表達(dá)質(zhì)粒pMG36e中，構(gòu)建表達(dá)載體pMG36e-LAI，轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5α中，經(jīng)菌落PCR和酶切分析初步證明轉(zhuǎn)化成功后進(jìn)行表達(dá)分析。
　　 將pMG36e-LAI-HD5α菌株進(jìn)行細(xì)胞破碎，提

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