聚電解質(zhì)微囊化重組亞油酸異構(gòu)酶的制備及活性的研究.pdf

1、共軛亞油酸(Conjugated Linoleic Acid，CLA)是一種具有諸多生理功能的天然脂肪酸，現(xiàn)已被用于食品、保健品、飼料工業(yè)等領(lǐng)域，有著較為廣闊的應(yīng)用前景。而亞油酸異構(gòu)酶(Linoleic Acid Isomerase，LAI)作為共軛亞油酸生物轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵酶有著極為重要的研究意義。
　　目前，微生物發(fā)酵生產(chǎn)CLA可以獲得單一異構(gòu)體、生產(chǎn)條件較溫和、活性異構(gòu)體高含量，但是在生產(chǎn)過程中微生物發(fā)酵也存在不少問題，如底物抑制

2、菌體生長、微生物培養(yǎng)易污染等。生物酶法生產(chǎn)CLA可以解決底物對菌體生長的抑制等問題，且生產(chǎn)條件溫和、生產(chǎn)設(shè)備簡單、對環(huán)境無污染。所以，獲得高活性、高純度、高穩(wěn)定性的LAI是實(shí)現(xiàn)CLA量產(chǎn)的必經(jīng)之路。
　　本研究從基因工程菌JM109-LAI-pQE30中誘導(dǎo)表達(dá)重組LAI，經(jīng)親和層析得到純化的重組LAI;為了提高重組LAI的穩(wěn)定性，隨后采用聚電解質(zhì)層層自組裝技術(shù)對LAI進(jìn)行微囊化，并對微囊化LAI進(jìn)行酶學(xué)性質(zhì)的研究。結(jié)論如下:

3、r>　　(1)基因工程菌JM109-LAI-pQE30誘導(dǎo)表達(dá)重組LAI的最佳條件:誘導(dǎo)時機(jī)為培養(yǎng)菌體7h時進(jìn)行誘導(dǎo)，誘導(dǎo)培養(yǎng)時間為10h，誘導(dǎo)劑濃度為0.15mM，誘導(dǎo)培養(yǎng)溫度為30℃。最佳誘導(dǎo)表達(dá)條件下所得LAI粗酶液酶活力為(3.85±0.075)×103U/mL。通過SDS-PAGE電泳檢測可得，LAI的相對分子量為64.7kD。
　　(2)經(jīng)Ni-NTA樹脂純化，純化后LAI比活力為2.16×103U/mg、酶活力回收率

4、為87％、純化倍數(shù)23.3倍。經(jīng)SDS-PAGE電泳檢測可見較為單一的條帶，純化成功。
　　(3)利用聚電解質(zhì)層層自組裝技術(shù)對LAI進(jìn)行微囊化，所得結(jié)論如下:(a)在光學(xué)顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡下均可見，模板及制備的微囊化LAI呈球狀;(b)制備模板的CaCl2∶NaCO3∶LAI的最佳比例為1∶1∶2;(c)采用4個PAH/PSS雙層膜制備的LAI微膠囊比活力最高可達(dá)(2.12±0.085)×103U/mg;(d)微囊化LAI最