亞油酸異構(gòu)酶PAI的表達優(yōu)化及其固定化研究.pdf

1、共軛亞油酸（Conjugated linoleic acid，CLA）是具有共軛雙鍵的十八碳二烯酸化合物的統(tǒng)稱，具有抗癌，抗衰老，抗動脈粥樣硬化，調(diào)節(jié)機體脂質(zhì)代謝，增強機體綜合免疫力等重要作用，在食品和醫(yī)療領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。本文主要通過來源于痤瘡丙酸桿菌（Propionibacterium acnes）的亞油酸異構(gòu)酶（Propionibacterium acnes Linoleate Isomerase，PAI）基因的原核表達系統(tǒng)

2、構(gòu)建；重組菌發(fā)酵條件優(yōu)化以及對PAI的固定化，研究PAI生物催化亞油酸合成trans-10,cis-12CLA的功能，為開發(fā)研究生物催化合成CLA提供參考。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴PAI基因的原核表達系統(tǒng)構(gòu)建:依據(jù)NCBI公布的痤瘡丙酸桿菌亞油酸異構(gòu)酶基因（序列號AX062088）經(jīng)密碼子優(yōu)化后合成PAI基因，構(gòu)建重組質(zhì)粒pET24a-pai。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細胞E. coli BL21(DE3)中，構(gòu)建了BL21(DE

3、3)-pET24a-pai重組菌株，通過微生物發(fā)酵實現(xiàn)目的基因的異源表達，成功構(gòu)建了PAI基因的原核表達系統(tǒng)。⑵重組菌發(fā)酵條件優(yōu)化：通過自誘導(dǎo)發(fā)酵培養(yǎng)基（ZYM-5052）發(fā)酵提高了PAI表達量及酶催化活性，自誘導(dǎo)發(fā)酵PAI催化合成trans-10,cis-12CLA的轉(zhuǎn)化率是IPTG誘導(dǎo)發(fā)酵的2.15倍。響應(yīng)面優(yōu)化設(shè)計實驗結(jié)果顯示溫度、甘油、阿拉伯糖是影響PAI表達的主因素，按照優(yōu)化后最佳條件進行自誘導(dǎo)發(fā)酵，PAI的催化合成CLA的轉(zhuǎn)