植物乳桿菌共軛亞油酸異構(gòu)酶基因的研究.pdf

1、共軛亞油酸(Conjugatedlinoleicacid，CLA)是亞油酸(Linoleicacid，LA)分子的十多種位置與幾何異構(gòu)體的通稱。在各種共軛亞油酸異構(gòu)體中，c9，t11-18：2和t10，c12-18：2這兩種天然不飽和脂肪酸異構(gòu)體具有抗癌、抗動脈粥樣硬化、減肥、促進(jìn)生長、緩和免疫反應(yīng)副作用等多種生物活性，因而在醫(yī)藥、食品、保健品、化妝品等領(lǐng)域有著廣闊的應(yīng)用前景。一些微生物可以產(chǎn)生共軛亞油酸異構(gòu)酶(Conjugatedli

2、noleicacidisomerase，EC5.2.1.5)，該酶能專一性地催化亞油酸轉(zhuǎn)化為活性共軛亞油酸異構(gòu)體的反應(yīng)，因此近幾年來倍受關(guān)注，利用生物合成法生產(chǎn)共軛亞油酸已成為該領(lǐng)域未來的發(fā)展趨勢。 本文首先在前人對共軛亞油酸異構(gòu)酶進(jìn)行研究的基礎(chǔ)上，利用生物信息學(xué)方法對已知的共軛亞油酸異構(gòu)酶序列進(jìn)行了初步分析，根據(jù)已公布的植物乳桿菌基因組序列，預(yù)測了植物乳桿菌共軛亞油酸異構(gòu)酶的基因序列。 其后，根據(jù)預(yù)測的植物乳桿菌中

3、亞油酸異構(gòu)酶基因序列以及載體pET28b(+)的圖譜設(shè)計出一對引物，對植物乳桿菌ASl.555基因組進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到一條1710bp左右的目的條帶，構(gòu)建了pET28b(+)/亞油酸異構(gòu)酶重組質(zhì)粒，并將重組質(zhì)粒導(dǎo)入表達(dá)載體大腸桿菌BL21(DE3)pLYS中，以誘導(dǎo)劑IPTG對含有重組質(zhì)粒的BL21(DE3)pLYS進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，得到一條分子量為60KD的特異性條帶。本文構(gòu)建的可以外源表達(dá)亞油酸異構(gòu)酶的大腸桿菌工程菌株，為以后的研究打