植物乳桿菌ZS2058生物轉(zhuǎn)化法制備共軛亞油酸的研究.pdf

1、共軛亞油酸(Conjugated Linoleic Acid，CLA)是亞油酸(Linoleic Acid，LA)衍生的共軛雙烯酸的多種位置與幾何異構(gòu)體的總稱(chēng)。它具有很多營(yíng)養(yǎng)和保健功能，如抗癌、抗動(dòng)脈粥樣硬化和延緩機(jī)體免疫力衰退、減肥等。在共軛亞油酸的各種立體異構(gòu)體中c9，t11-18：2被認(rèn)為最具生物活性。乳酸菌生物轉(zhuǎn)化共軛亞油酸是當(dāng)前生物法轉(zhuǎn)化共軛亞油酸研究的熱點(diǎn)，為共軛亞油酸的合成提供了另一種有效的途徑。 本文主要通過(guò)比較

2、不同反應(yīng)體系中植物乳桿菌ZS2058生物轉(zhuǎn)化CLA的轉(zhuǎn)化率，確定最適合的反應(yīng)體系為靜息態(tài)細(xì)胞在磷酸鹽緩沖溶液中生物轉(zhuǎn)化CLA。通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)確定了最適合的反應(yīng)條件為：底物濃度為3mg/mL，細(xì)胞濃度為4×10<'10>cfu/mL，反應(yīng)溫度：37℃，pH6.0，轉(zhuǎn)化時(shí)間24h。在此反應(yīng)條件下，CLA轉(zhuǎn)化率為31.76％。通過(guò)GC法和GC-MS法檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)反應(yīng)過(guò)程中主要產(chǎn)生兩個(gè)產(chǎn)物：CLA和羥基脂肪酸HY。產(chǎn)物CLA中c9，t11-CLA占

3、96.60％，t10，c12-CLA占2.40％，還有少量其他異構(gòu)體，說(shuō)明亞油酸異構(gòu)酶有高度的專(zhuān)一性。 根據(jù)植物乳桿菌ZS2058生物轉(zhuǎn)化CLA的反應(yīng)進(jìn)程曲線以及轉(zhuǎn)化機(jī)理探索實(shí)驗(yàn)可知，c9，t11-CLA是生物轉(zhuǎn)化過(guò)程的反應(yīng)中間體，其可能的反應(yīng)機(jī)理是：第一步，LA在亞油酸異構(gòu)酶的作用下異構(gòu)化為CLA：第二步，c9，t11-CLA在水合酶的作用下進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為羥基脂肪酸HY。 本文采用超聲波破碎細(xì)胞獲取亞油酸異構(gòu)酶粗酶，最佳

4、的破碎條件為：破碎功率320W，破碎工作時(shí)間為7.5min，菌懸液濃度11.25g/50mL，提取pH7.0，添加0.2mol/LNaCl溶液。并研究了亞油酸異構(gòu)酶酶反應(yīng)的最適條件為：pH7.5，溫度37℃，LA濃度0.8mg/mL，酶液體積3mL以磷酸鈉一檸檬酸緩沖溶液為反應(yīng)介質(zhì)，Ca<'2+>，螯合劑1，10-菲噦啉和EGTA對(duì)LI粗酶沒(méi)有明顯的影響。酶液在4℃，pH7.5的磷酸鈉一檸檬酸緩沖溶液中有較好的穩(wěn)定性，酶液中添加20％甘