嗜酸乳桿菌靜息細(xì)胞轉(zhuǎn)化菜籽油生成共軛亞油酸的研究.pdf

1、學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得直昌太堂或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名(手寫癸豇簽字日期砂13年f月午日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解直

2、昌太堂有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)直墾太堂可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編本學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所和中國(guó)學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社將本學(xué)位論文收錄到《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》和《中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》中全文發(fā)表，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。(保密的學(xué)

3、位論文在解密后適用本授權(quán)書)靴敝儲(chǔ)讎汗寫塘毳簽字日期：糾多年(月葉日新瑚：餓礎(chǔ)簽字日期：20f多年6月鉀日摘要介質(zhì)濃度、pH、溫度、時(shí)間、細(xì)胞濃度6個(gè)因素進(jìn)行研究，確定了最適轉(zhuǎn)化液介質(zhì)是01mol／L檸檬酸檸檬酸鈉緩沖液，得到了最適pH、溫度、轉(zhuǎn)化時(shí)間和細(xì)胞濃度參數(shù)。同時(shí)，研究了不同金屬離子對(duì)進(jìn)亞油酸異構(gòu)酶活性的影響，lmmol／LCa2和Cu2對(duì)亞油酸異構(gòu)酶活性有微弱促進(jìn)作用，分別比對(duì)照組提高了O35％和062％。2mmol／LZn2

4、和cd對(duì)亞油酸異構(gòu)酶活性有較大促進(jìn)作用，分別比對(duì)照組提高了240％和175％。在該基礎(chǔ)上，利用Box—Benhnken中心組合設(shè)計(jì)和響應(yīng)面法對(duì)轉(zhuǎn)化時(shí)間、pH、溫度、細(xì)胞濃度進(jìn)行了工藝優(yōu)化分析，確定了最優(yōu)轉(zhuǎn)化時(shí)間25h，pH65，溫度36℃，細(xì)胞濃度40mg／ml。在此優(yōu)化條件下，CLA的產(chǎn)量可以達(dá)到23012士7521xg／ml。本項(xiàng)目研究了細(xì)胞不同透性化處理方法對(duì)CLA產(chǎn)量的影響，結(jié)果顯示，當(dāng)生物素的最適添加量為4mg／30ml時(shí)，C

5、LA產(chǎn)量達(dá)25625士32199／ml。生物素是嗜酸乳桿菌最適透性化處理方法，生物素不僅是一種良好的抗氧化劑，同時(shí)又可以增加細(xì)胞通透性，且簡(jiǎn)單易操作。研究了將透性化的嗜酸乳桿菌細(xì)胞采用離心吸附法固定，以便該細(xì)胞態(tài)亞油酸異構(gòu)酶能多批次地用于CLA的合成，結(jié)果證實(shí)，該固定化細(xì)胞酶可連續(xù)轉(zhuǎn)化lO批次，產(chǎn)量保持在11599／ml以上。離心吸附固定化技術(shù)解決了包埋固定化方法存在物質(zhì)交換的障礙和操作繁瑣的難題，同時(shí)克服了吸附固定化方法吸附量小，細(xì)胞