飛蝗羧酸酯酶基因的克隆和原核表達(dá).pdf

1、飛蝗Locusta migratoria，隸屬于昆蟲綱直翅目Orthoptera、蝗總科Acridoidea，是一種世界性的農(nóng)業(yè)害蟲，在我國(guó)分布廣泛，為害嚴(yán)重。羧酸酯酶能結(jié)合進(jìn)入昆蟲體內(nèi)的有機(jī)磷殺蟲劑，并將殺蟲劑在發(fā)揮作用之前阻隔或降解，致殺蟲劑失去應(yīng)有的殺傷作用，從而使昆蟲免受殺蟲劑的毒性作用。本文從基因水平和蛋白水平對(duì)飛蝗羧酸酯酶基因CarE4、CarE9和CarE25進(jìn)行了研究，探討了該三個(gè)基因的序列特征和蛋白表達(dá)特性。
　

2、　本文在飛蝗表達(dá)序列標(biāo)簽(ESTs)數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索羧酸酯酶基因的保守區(qū)，經(jīng)序列拼接整理后得到CarE4的全長(zhǎng)序列。據(jù)此設(shè)計(jì)上下游引物擴(kuò)增CarE4全長(zhǎng)序列，分析了該基因的分子特性、蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)和二級(jí)結(jié)構(gòu)特征。
　　在獲得CarE4全長(zhǎng)序列的基礎(chǔ)上，本文采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)該基因進(jìn)行了不同發(fā)育階段和組織部位表達(dá)特性研究。結(jié)果表明，CarE4在飛蝗各齡期的表達(dá)量基本呈先下降后上升的趨勢(shì)，在胃盲囊中特異表達(dá)且表達(dá)量較其它組織部位

3、為高。
　　本文對(duì)羧酸酯酶基因CarE4、CarE9和CarE25進(jìn)行了原核表達(dá)，構(gòu)建了三種重組表達(dá)載體:pCold TF-CarE4、pGEX-6p-1-CarE9和pET32M-CarE25，探索出這三個(gè)基因的最佳誘導(dǎo)表達(dá)條件。在此基礎(chǔ)上，采用多種方法進(jìn)行了蛋白純化，總結(jié)出這三種蛋白的最佳純化方法并得到了目的蛋白的純品。本文還制備了CarE9蛋白的抗體，利用Western Blot方法檢測(cè)了CarE9蛋白在飛蝗不同組織部位的表