中國(guó)動(dòng)物狂犬病流行病學(xué)研究.pdf

1、狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒（rabies virus，RABV）引起的所有溫血?jiǎng)游锒家赘械囊环N高致死性傳染病，一旦發(fā)病100％死亡。我國(guó)作為狂犬病高發(fā)國(guó)家，每年狂犬病發(fā)病和死亡的人數(shù)居于世界第二位，僅次于印度。盡管我國(guó)在狂犬病防控方面采取了一定的措施，但是近年來(lái)新報(bào)告狂犬病的縣市數(shù)量大幅增加，民眾對(duì)狂犬病的緊張情緒急劇上升，甚至談犬色變，造成了嚴(yán)重的社會(huì)恐慌。由于我國(guó)在狂犬病研究方面基礎(chǔ)薄弱，對(duì)動(dòng)物狂犬病從未進(jìn)行過(guò)連續(xù)的、系統(tǒng)

2、的流行病學(xué)調(diào)查等原因，直接導(dǎo)致了缺乏完整的動(dòng)物狂犬病流行病學(xué)資料，不清楚狂犬病在我國(guó)的流行病學(xué)本底，使該疫病的防制工作帶有很大的盲目性。
　　自2004年起，筆者所在實(shí)驗(yàn)室在我國(guó)17個(gè)省市自治區(qū)開(kāi)展了連續(xù)性、系統(tǒng)性的大規(guī)模動(dòng)物狂犬病監(jiān)測(cè)工作，筆者自2010年起參與此項(xiàng)研究。
　　1.我國(guó)動(dòng)物狂犬病流行病學(xué)監(jiān)測(cè)。
　　根據(jù)監(jiān)測(cè)性質(zhì)的不同將采集的樣品分為兩類:(1)隨機(jī)采集犬腦組織和唾液拭子樣品:采集自發(fā)生狂犬病疫情后安全

3、撲殺的疫區(qū)犬、屠宰犬以及農(nóng)村外表健康犬的腦組織或唾液拭子樣品，其中腦組織9454份，唾液拭子10044份。(2)臨床疑似狂犬病動(dòng)物腦組織樣品:主要是疑似狂犬病發(fā)病動(dòng)物腦組織共計(jì)130份，動(dòng)物種類包括犬、牛、羊、豬、駱駝、貉、野生狐貍等。本研究使用熒光抗體實(shí)驗(yàn)(FAT)、反轉(zhuǎn)錄套式PCR方法(RT-nPCR)和一步法熒光定量PCR方法，對(duì)各地采集和送檢的19628份動(dòng)物腦組織和唾液拭子樣品進(jìn)行狂犬病病毒的檢測(cè)。
　　2004～201

4、4年臨床出現(xiàn)疑似狂犬病癥狀的動(dòng)物腦組織樣品130份，其中RABV陽(yáng)性樣品100份，陽(yáng)性率為76.92％(CI68.7～83.9％)。動(dòng)物感染譜分析結(jié)果表明，發(fā)病犬仍是我國(guó)大部分地區(qū)狂犬病的主要傳播來(lái)源，而新疆和內(nèi)蒙古等邊境地區(qū)，野生狐貍是狂犬病的重要傳播來(lái)源，暴露的動(dòng)物主要為牛、羊和駱駝等家畜。在狂犬病高發(fā)和重點(diǎn)省份，隨機(jī)采集犬腦組織樣品9454份，其中狂犬病病毒陽(yáng)性樣品31份，RABV攜帶率為0.33％(CI0.2～0.5％)。各省動(dòng)

5、物狂犬病陽(yáng)性率與近年來(lái)人狂犬病死亡數(shù)呈正相關(guān)。比較兩種監(jiān)測(cè)方法，發(fā)現(xiàn)與隨機(jī)采樣相比，監(jiān)測(cè)臨床出現(xiàn)疑似狂犬病癥狀動(dòng)物，不僅能夠獲得更多有效的背景信息，更易溯源，而且能夠大幅度降低檢測(cè)成本，提高監(jiān)測(cè)效率。有文獻(xiàn)表明部分人狂犬病疫情是被攜帶RABV的外表健康犬舔舐、咬傷所致，我國(guó)動(dòng)物狂犬病監(jiān)測(cè)方案中一直將犬唾液拭子列為監(jiān)測(cè)項(xiàng)目，為評(píng)估監(jiān)測(cè)犬唾液拭子樣品的有效性，本研究采集并檢測(cè)農(nóng)村外表健康犬唾液拭子樣品10044份，其中陽(yáng)性樣品21份，陽(yáng)性率

6、為0.21％(CI0.1～0.3％)。唾液排毒具有間歇性，犬群體的唾液RABV檢測(cè)結(jié)果不能真實(shí)反映該群體狂犬病毒感染情況，以犬唾液拭子陽(yáng)性率反映犬群中RABV攜帶狀態(tài)并不科學(xué)。
　　2.狂犬病病毒流行毒株系統(tǒng)進(jìn)化分析
　　本研究利用RT-PCR方法對(duì)實(shí)驗(yàn)室分離的毒株進(jìn)行N和G基因序列測(cè)定，對(duì)我國(guó)RABV流行毒株與周邊國(guó)家毒株的N基因系統(tǒng)發(fā)生分析，對(duì)不同進(jìn)化群G蛋白重要氨基酸位點(diǎn)進(jìn)行比較，分析近年來(lái)我國(guó)RABV毒株進(jìn)化特征。<

7、br>　　對(duì)本研究分離53株毒株和我國(guó)已發(fā)表毒株的進(jìn)行N基因系統(tǒng)發(fā)生分析，將我國(guó)流行毒株分為4個(gè)進(jìn)化群，即亞洲1群、亞洲2群、北極相關(guān)群和世界群。亞洲1群分布最廣，在我國(guó)中部和東南部的22個(gè)省份流行;亞洲2群在我國(guó)東南12個(gè)省市流行;北極相關(guān)群主要在內(nèi)蒙古傳播流行;世界群毒株在我國(guó)散在分布，其分支世界群草原型毒株主要在新疆和內(nèi)蒙流行。4個(gè)進(jìn)化群毒株在地理分布上有一定重疊。將本研究獲得的45條RABV街毒株G基因進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)生分析，將毒株分

8、為4個(gè)進(jìn)化群，各群的劃分與基于N基因序列的劃分基本一致。比較G蛋白氨基酸序列發(fā)現(xiàn)，亞洲1群和亞洲2群的代表株均在Ⅵ抗原位點(diǎn)發(fā)生R→H的替換，所有毒株在決定病毒毒力的重要基因位點(diǎn)（G蛋白抗原位點(diǎn)Ⅲ的333位）未見(jiàn)改變。除亞洲1群代表株在與p75NTR受體的結(jié)合位點(diǎn)處(318～352aa)發(fā)生Ⅴ→Ⅰ(332aa)的替換，其他群毒株在與組織嗜性有關(guān)的區(qū)域未見(jiàn)氨基酸替換。RABV流行株在環(huán)境壓力選擇下保持穩(wěn)定，不同進(jìn)化群特異性氨基酸替換可能是R

9、ABV區(qū)域性進(jìn)化的結(jié)果。
　　3.論文創(chuàng)新點(diǎn):
　　(1)在我國(guó)開(kāi)展大規(guī)模動(dòng)物狂犬病流行病學(xué)監(jiān)測(cè)，監(jiān)測(cè)地域涵蓋之廣、采集樣品種類、數(shù)量之多，尚屬首次。明確了我國(guó)動(dòng)物狂犬病流行病學(xué)本底，掌握了各地區(qū)狂犬病流行特點(diǎn)。
　　(2)首次發(fā)現(xiàn)以往在俄羅斯、蒙古、哈薩克斯坦等國(guó)野生狐貍和狼中流行的世界群草原型RABV，已經(jīng)在我國(guó)新疆和內(nèi)蒙地區(qū)傳播流行，且在新疆和內(nèi)蒙古形成了各自獨(dú)立的傳播圈。
　　(3)首次發(fā)現(xiàn)以往在貉群中傳