抗菌肽cecropinb對雞生長發(fā)育及免疫功能的影響

1、<p>　　抗菌肽CecropinB對雞生長發(fā)育及免疫功能的影響</p><p>　　作者：王秀青， 朱明星 張愛君， 丁淑琴， 楊風琴</p><p>　　【摘要】 目的 探討基因工程重組抗菌肽Cecropin B對雞生長發(fā)育及免疫功能的影響。方法 250羽健康雛雞隨機分成5組，每組50羽，設鹽酸環(huán)丙沙星藥物對照組，抗菌肽Cecropin B 低、中、高劑量組(分別為2 、4

2、 、6 mL·L-1)及正常對照組，均以混飲水的方式飼喂，檢測各組雞體重;各組分別隨機抽取5羽雞，稱重后經(jīng)靜脈放血將雞處死，將每只雞的胸腺、脾臟和法氏囊完整地取下稱重，計算脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)，取雞腹腔巨噬細胞檢測吞噬指數(shù)和吞噬率。結(jié)果 抗菌肽低、中、高劑量組雞的平均日增重與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P&lt;0.05或P&lt;0.01)，抗菌肽中、高劑量組雞的平均日增重較藥物對照組比較差異有

3、統(tǒng)計學意義(P&lt;0.05或P&lt;0.01);在21、28日齡時中、高劑量組雞的胸腺、脾臟和法氏囊指數(shù)提高(P&lt;0.05或P&lt;0.01)，而35日齡以后各組間各免疫器官指數(shù)差異均無統(tǒng)計學意義;高、中、低劑量組雞腹腔巨噬細胞的吞噬率與吞噬指數(shù)均高于藥物對照組和空白對照組(P&lt;0.05)。結(jié)論 基因工程抗菌肽CecropinB可以增加雛雞</p><p&g

4、t;　　【關鍵詞】 抗菌肽;健康蛋雛雞;免疫器官;鹽酸環(huán)丙沙星</p><p>　　“無毒、無殘留、無耐藥性”是新一代抗菌制劑的發(fā)展趨勢和要求。具有高效抗菌活性、且有利于人體健康的抗菌肽成為近年該領域的研究熱點之一。研究發(fā)現(xiàn)[1]抗菌肽不僅可直接殺滅侵入體內(nèi)的病原微生物，還在宿主固有免疫應答的不同階段表現(xiàn)出多種有益的作用。本文擬在證實基因工程抗菌肽CecropinB體外抑菌作用的基礎上[2]，研究其對雞體重、腹

5、腔巨噬細胞的吞噬功能以及免疫器官增重的影響，為Cecropin B的應用提供實驗依據(jù)。</p><p><b>　　1 材料與方法</b></p><p>　　1.1 實驗動物 1日齡來杭蛋雛雞，由江蘇省家禽所提供;試驗在江蘇省農(nóng)業(yè)科學院獸醫(yī)研究所進行;雛雞飼喂所用的全價料，購于南京市青龍山養(yǎng)殖廠。前期雛雞以淺盤喂料、飲水器飲水;后期均自由采食與飲水。光照時間1～3日

6、齡為23 h，從4日齡起，每天減少2 h，直至8 h光照為止;雞舍溫度1～3日齡為30～33 ℃，4～7日齡為28～30℃，以后每周降低2 ℃，降至18～20 ℃為止，以后雞舍內(nèi)溫度保持在18～20 ℃。其預防接種均按常規(guī)免疫程序進行[3]。</p><p>　　1.2 實驗分組及藥物 試驗從7日齡起，至49日齡結(jié)束，實驗期共計6周。選擇體重基本一致的雛雞250只，隨機分成5組，即低、中、高抗菌肽Cecropin

7、B劑量組，藥物對照組，空白對照組，每組50只。低、中、高抗菌肽組(用量分別為2 、4 、6 mL·L-1)，從第2周齡開始抗菌肽飲水，飲1周停喂1周，直到49日齡。該批次基因工程抗菌肽CecropinB(凍干粉)的表達量大約為0.05 mg·mL-1，MIC為0.54 μM[2]。藥物對照組采用2%鹽酸環(huán)丙沙星可溶性粉，石家莊瑞田生化有限公司產(chǎn)品，2.5 g·L-1混飲。實驗組和對照組每只雞均分別在7、14

8、、21、28、35、42、49日齡稱體重，計算各組每周的平均體重。</p><p>　　1.3 實驗方法 (1)在7、14、21、28、35、42、49日齡，各組分別隨機抽取5羽雞，稱重，取其平均值并記錄實驗數(shù)據(jù)。(2)在21、28、35、42、49日齡，各組分別隨機抽取5羽雞，稱重后經(jīng)靜脈放血將雞處死，將每只雞的胸腺、脾臟和法氏囊完整地取下稱重，按照下述公式計算每只雞的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)[4]。胸腺

9、指數(shù)=胸腺重量(mg)/雞體重(g)，脾臟指數(shù)=脾臟重量(mg)/雞體重(g)，法氏囊指數(shù)=法氏囊重量(mg)/雞體重(g)。(3)每組各取49日齡雞5只，檢測前1d每只雞腹腔注射質(zhì)量分數(shù)為0.5%的淀粉生理鹽水溶液1.0 mL，檢測時每只雞腹腔注射體積分數(shù)為5%的雞紅細胞懸液1.0 mL;30 min后頸靜脈放血致死雞，拔掉腹部羽毛，從腹部正中剪開腹壁皮膚，經(jīng)腹膜注射生理鹽水3.0 mL，輕揉腹部，然后吸出腹腔洗液1.0 mL，平均滴

10、于2片載玻片上，37 ℃孵育30min，PBS漂洗，晾干，丙酮-甲醛(1∶1)固定，姬姆薩染色，每片油鏡下計數(shù)200個巨噬細胞，按下列公式計算巨噬細胞的吞噬率和吞噬指數(shù)[5]。吞噬率=已吞噬紅細胞的巨噬細胞數(shù)/200個巨噬細胞×10</p><p>　　1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件建立數(shù)據(jù)庫，各指標數(shù)值以(±s)表示，各指標比較采用F檢驗，以P&lt;0.05為差

11、異具有統(tǒng)計學意義。</p><p><b>　　2 結(jié)果</b></p><p>　　2.1 抗菌肽CecropinB對雞體重的影響 見表1。</p><p>　　抗菌肽低、中、高劑量組雞的平均日增重與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P&lt;0.01或P&lt;0.05)，抗菌肽中、高劑量組雞的平均日增重較藥物對照組比較差異有

12、統(tǒng)計學意義(P&lt;0.01或P&lt;0.05)，說明抗菌肽CecropinB低、中、高劑量組均對雛雞有明顯的促生長作用。其它組別之間差異無統(tǒng)計學意義。表1 抗菌肽CecropinB對雞體重的影響</p><p>　　2.2 各組間雞脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)比較 見表2～4。表2 不同日齡雞脾臟指數(shù)分析結(jié)果表3 不同日齡雞法氏囊指數(shù)分析結(jié)果表4 不同日齡雞胸腺指數(shù)分析結(jié)果(n=5)從表2

13、～4中可以看出，在21、28日齡時中、高劑量抗菌肽飼喂組的法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學意義(P&lt;0.05或P&lt;0.01);與抗生素對照組差異有統(tǒng)計學意義(P&lt;0.05);其它日齡及組別之間差異無統(tǒng)計學意義。</p><p>　　2.3 Cecropin B對雞腹腔巨噬細胞吞噬率和吞噬指數(shù)的影響 見表5。</p><p>

14、;　　Cecropin B高、中、低劑量組的吞噬率與吞噬指數(shù)均高于藥物對照組和空白對照組(P&lt;0.05)。表5 抗菌肽CecropinB 49日齡對雞腹腔巨噬細胞吞噬率和吞噬指數(shù)的影響</p><p><b>　　3 討論</b></p><p>　　大量耐藥菌株的出現(xiàn)，使得研制新型抗生素的替代品成了迫在眉睫的事情，筆者利用畢赤酵母表達體系表達了活性比較

15、強的抗菌肽CecropinB，并對其抗菌作用進行了初步研究[2]。本研究進一步表明CecropinB對雛雞有促生長作用，可顯著增加雛雞的日增重。飼用抗生素的促生長效果已無可非議，抗菌肽與抗生素極為相似的促生長作用，為CecropinB替代抗生素類添加劑提供了實驗依據(jù)，馬衛(wèi)明[6]等的研究發(fā)現(xiàn)豬小腸抗菌肽可增加雛雞小腸絨毛長度，使腸絨毛變圓變粗，表面凹溝增多，從而增加小腸的吸收面積，可能是豬小腸抗菌肽促進雛雞生長發(fā)育的結(jié)構基礎。但是其真正

16、的影響原因還有待于進一步的研究和探討。</p><p>　　免疫增強劑一般可使免疫器官增重，而免疫抑制劑可使之減重。免疫藥理學試驗常以藥物對免疫器官的增重作為衡量其免疫功能強弱的指標之一[7]。免疫器官指數(shù)可反映機體免疫器官的重量變化，且能將個體差異的影響降低到最低限度。本試驗結(jié)果表明，高劑量飼喂重組基因工程抗菌肽CecropinB，在21、28日齡時中、高劑量組雞的胸腺、脾臟和法氏囊指數(shù)提高(P&lt;

17、0.05)，而35日齡以后各組間各免疫器官指數(shù)差異均無統(tǒng)計學意義。分析原因可能由于35日齡之后雛雞進入了快速生長期，其體重增長速度加快，而脾臟、法氏囊和胸腺的發(fā)育已經(jīng)到了成熟期，所以其免疫器官指數(shù)差異無統(tǒng)計學意義;同時也提示重組抗菌肽CecropinB對35日齡之前雞免疫器官的發(fā)育會產(chǎn)生影響。</p><p>　　本實驗證實CecropinB能增強雛雞腹腔巨噬細胞的吞噬能力，以高劑量組效果最佳。巨噬細胞被稱為多功

18、能細胞，其強大的吞噬，以及抗原提呈、免疫調(diào)節(jié)等功能，在非特異性和特異性免疫中均發(fā)揮重要作用，因此，CecropinB增強雛雞巨噬細胞吞噬功能的作用，提示CecropinB的體內(nèi)抑菌作用除了直接效應外，可能還與增強機體免疫功能有關。</p><p><b>　　【參考文獻】</b></p><p>　　1] Boman HG.Peptides antibiotics a

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