抗菌肽cecropinb對(duì)雞生長(zhǎng)發(fā)育及免疫功能的影響

1、<p>　　抗菌肽CecropinB對(duì)雞生長(zhǎng)發(fā)育及免疫功能的影響</p><p>　　作者：王秀青， 朱明星 張愛君， 丁淑琴， 楊風(fēng)琴</p><p>　　【摘要】 目的 探討基因工程重組抗菌肽Cecropin B對(duì)雞生長(zhǎng)發(fā)育及免疫功能的影響。方法 250羽健康雛雞隨機(jī)分成5組，每組50羽，設(shè)鹽酸環(huán)丙沙星藥物對(duì)照組，抗菌肽Cecropin B 低、中、高劑量組(分別為2 、4

2、 、6 mL·L-1)及正常對(duì)照組，均以混飲水的方式飼喂，檢測(cè)各組雞體重;各組分別隨機(jī)抽取5羽雞，稱重后經(jīng)靜脈放血將雞處死，將每只雞的胸腺、脾臟和法氏囊完整地取下稱重，計(jì)算脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)，取雞腹腔巨噬細(xì)胞檢測(cè)吞噬指數(shù)和吞噬率。結(jié)果 抗菌肽低、中、高劑量組雞的平均日增重與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P&lt;0.05或P&lt;0.01)，抗菌肽中、高劑量組雞的平均日增重較藥物對(duì)照組比較差異有

3、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P&lt;0.05或P&lt;0.01);在21、28日齡時(shí)中、高劑量組雞的胸腺、脾臟和法氏囊指數(shù)提高(P&lt;0.05或P&lt;0.01)，而35日齡以后各組間各免疫器官指數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;高、中、低劑量組雞腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬率與吞噬指數(shù)均高于藥物對(duì)照組和空白對(duì)照組(P&lt;0.05)。結(jié)論 基因工程抗菌肽CecropinB可以增加雛雞</p><p&g

4、t;　　【關(guān)鍵詞】 抗菌肽;健康蛋雛雞;免疫器官;鹽酸環(huán)丙沙星</p><p>　　“無毒、無殘留、無耐藥性”是新一代抗菌制劑的發(fā)展趨勢(shì)和要求。具有高效抗菌活性、且有利于人體健康的抗菌肽成為近年該領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。研究發(fā)現(xiàn)[1]抗菌肽不僅可直接殺滅侵入體內(nèi)的病原微生物，還在宿主固有免疫應(yīng)答的不同階段表現(xiàn)出多種有益的作用。本文擬在證實(shí)基因工程抗菌肽CecropinB體外抑菌作用的基礎(chǔ)上[2]，研究其對(duì)雞體重、腹

5、腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能以及免疫器官增重的影響，為Cecropin B的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。</p><p><b>　　1 材料與方法</b></p><p>　　1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 1日齡來杭蛋雛雞，由江蘇省家禽所提供;試驗(yàn)在江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院獸醫(yī)研究所進(jìn)行;雛雞飼喂所用的全價(jià)料，購于南京市青龍山養(yǎng)殖廠。前期雛雞以淺盤喂料、飲水器飲水;后期均自由采食與飲水。光照時(shí)間1～3日

6、齡為23 h，從4日齡起，每天減少2 h，直至8 h光照為止;雞舍溫度1～3日齡為30～33 ℃，4～7日齡為28～30℃，以后每周降低2 ℃，降至18～20 ℃為止，以后雞舍內(nèi)溫度保持在18～20 ℃。其預(yù)防接種均按常規(guī)免疫程序進(jìn)行[3]。</p><p>　　1.2 實(shí)驗(yàn)分組及藥物 試驗(yàn)從7日齡起，至49日齡結(jié)束，實(shí)驗(yàn)期共計(jì)6周。選擇體重基本一致的雛雞250只，隨機(jī)分成5組，即低、中、高抗菌肽Cecropin

7、B劑量組，藥物對(duì)照組，空白對(duì)照組，每組50只。低、中、高抗菌肽組(用量分別為2 、4 、6 mL·L-1)，從第2周齡開始抗菌肽飲水，飲1周停喂1周，直到49日齡。該批次基因工程抗菌肽CecropinB(凍干粉)的表達(dá)量大約為0.05 mg·mL-1，MIC為0.54 μM[2]。藥物對(duì)照組采用2%鹽酸環(huán)丙沙星可溶性粉，石家莊瑞田生化有限公司產(chǎn)品，2.5 g·L-1混飲。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組每只雞均分別在7、14

8、、21、28、35、42、49日齡稱體重，計(jì)算各組每周的平均體重。</p><p>　　1.3 實(shí)驗(yàn)方法 (1)在7、14、21、28、35、42、49日齡，各組分別隨機(jī)抽取5羽雞，稱重，取其平均值并記錄實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。(2)在21、28、35、42、49日齡，各組分別隨機(jī)抽取5羽雞，稱重后經(jīng)靜脈放血將雞處死，將每只雞的胸腺、脾臟和法氏囊完整地取下稱重，按照下述公式計(jì)算每只雞的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)[4]。胸腺

9、指數(shù)=胸腺重量(mg)/雞體重(g)，脾臟指數(shù)=脾臟重量(mg)/雞體重(g)，法氏囊指數(shù)=法氏囊重量(mg)/雞體重(g)。(3)每組各取49日齡雞5只，檢測(cè)前1d每只雞腹腔注射質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的淀粉生理鹽水溶液1.0 mL，檢測(cè)時(shí)每只雞腹腔注射體積分?jǐn)?shù)為5%的雞紅細(xì)胞懸液1.0 mL;30 min后頸靜脈放血致死雞，拔掉腹部羽毛，從腹部正中剪開腹壁皮膚，經(jīng)腹膜注射生理鹽水3.0 mL，輕揉腹部，然后吸出腹腔洗液1.0 mL，平均滴

10、于2片載玻片上，37 ℃孵育30min，PBS漂洗，晾干，丙酮-甲醛(1∶1)固定，姬姆薩染色，每片油鏡下計(jì)數(shù)200個(gè)巨噬細(xì)胞，按下列公式計(jì)算巨噬細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù)[5]。吞噬率=已吞噬紅細(xì)胞的巨噬細(xì)胞數(shù)/200個(gè)巨噬細(xì)胞×10</p><p>　　1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 10.0統(tǒng)計(jì)軟件建立數(shù)據(jù)庫，各指標(biāo)數(shù)值以(±s)表示，各指標(biāo)比較采用F檢驗(yàn)，以P&lt;0.05為差

11、異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。</p><p><b>　　2 結(jié)果</b></p><p>　　2.1 抗菌肽CecropinB對(duì)雞體重的影響 見表1。</p><p>　　抗菌肽低、中、高劑量組雞的平均日增重與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P&lt;0.01或P&lt;0.05)，抗菌肽中、高劑量組雞的平均日增重較藥物對(duì)照組比較差異有

12、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P&lt;0.01或P&lt;0.05)，說明抗菌肽CecropinB低、中、高劑量組均對(duì)雛雞有明顯的促生長(zhǎng)作用。其它組別之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表1 抗菌肽CecropinB對(duì)雞體重的影響</p><p>　　2.2 各組間雞脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)比較 見表2～4。表2 不同日齡雞脾臟指數(shù)分析結(jié)果表3 不同日齡雞法氏囊指數(shù)分析結(jié)果表4 不同日齡雞胸腺指數(shù)分析結(jié)果(n=5)從表2

13、～4中可以看出，在21、28日齡時(shí)中、高劑量抗菌肽飼喂組的法氏囊指數(shù)、胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)與空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P&lt;0.05或P&lt;0.01);與抗生素對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P&lt;0.05);其它日齡及組別之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。</p><p>　　2.3 Cecropin B對(duì)雞腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率和吞噬指數(shù)的影響 見表5。</p><p>

14、;　　Cecropin B高、中、低劑量組的吞噬率與吞噬指數(shù)均高于藥物對(duì)照組和空白對(duì)照組(P&lt;0.05)。表5 抗菌肽CecropinB 49日齡對(duì)雞腹腔巨噬細(xì)胞吞噬率和吞噬指數(shù)的影響</p><p><b>　　3 討論</b></p><p>　　大量耐藥菌株的出現(xiàn)，使得研制新型抗生素的替代品成了迫在眉睫的事情，筆者利用畢赤酵母表達(dá)體系表達(dá)了活性比較

15、強(qiáng)的抗菌肽CecropinB，并對(duì)其抗菌作用進(jìn)行了初步研究[2]。本研究進(jìn)一步表明CecropinB對(duì)雛雞有促生長(zhǎng)作用，可顯著增加雛雞的日增重。飼用抗生素的促生長(zhǎng)效果已無可非議，抗菌肽與抗生素極為相似的促生長(zhǎng)作用，為CecropinB替代抗生素類添加劑提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)，馬衛(wèi)明[6]等的研究發(fā)現(xiàn)豬小腸抗菌肽可增加雛雞小腸絨毛長(zhǎng)度，使腸絨毛變圓變粗，表面凹溝增多，從而增加小腸的吸收面積，可能是豬小腸抗菌肽促進(jìn)雛雞生長(zhǎng)發(fā)育的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。但是其真正

16、的影響原因還有待于進(jìn)一步的研究和探討。</p><p>　　免疫增強(qiáng)劑一般可使免疫器官增重，而免疫抑制劑可使之減重。免疫藥理學(xué)試驗(yàn)常以藥物對(duì)免疫器官的增重作為衡量其免疫功能強(qiáng)弱的指標(biāo)之一[7]。免疫器官指數(shù)可反映機(jī)體免疫器官的重量變化，且能將個(gè)體差異的影響降低到最低限度。本試驗(yàn)結(jié)果表明，高劑量飼喂重組基因工程抗菌肽CecropinB，在21、28日齡時(shí)中、高劑量組雞的胸腺、脾臟和法氏囊指數(shù)提高(P&lt;

17、0.05)，而35日齡以后各組間各免疫器官指數(shù)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。分析原因可能由于35日齡之后雛雞進(jìn)入了快速生長(zhǎng)期，其體重增長(zhǎng)速度加快，而脾臟、法氏囊和胸腺的發(fā)育已經(jīng)到了成熟期，所以其免疫器官指數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;同時(shí)也提示重組抗菌肽CecropinB對(duì)35日齡之前雞免疫器官的發(fā)育會(huì)產(chǎn)生影響。</p><p>　　本實(shí)驗(yàn)證實(shí)CecropinB能增強(qiáng)雛雞腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬能力，以高劑量組效果最佳。巨噬細(xì)胞被稱為多功

18、能細(xì)胞，其強(qiáng)大的吞噬，以及抗原提呈、免疫調(diào)節(jié)等功能，在非特異性和特異性免疫中均發(fā)揮重要作用，因此，CecropinB增強(qiáng)雛雞巨噬細(xì)胞吞噬功能的作用，提示CecropinB的體內(nèi)抑菌作用除了直接效應(yīng)外，可能還與增強(qiáng)機(jī)體免疫功能有關(guān)。</p><p><b>　　【參考文獻(xiàn)】</b></p><p>　　1] Boman HG.Peptides antibiotics a

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