紫菜生物肥的抗逆機(jī)制初探【開(kāi)題報(bào)告+文獻(xiàn)綜述+畢業(yè)設(shè)計(jì)】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文系列</b></p><p><b>　　開(kāi)題報(bào)告</b></p><p><b>　　生物技術(shù)</b></p><p>　　紫菜生物肥的抗逆機(jī)制初探</p><p>　　一、選題的背景與意義：</p><p>

2、　　紫菜（Porphyra）是紅藻門紅毛菜目紅毛菜科紫菜屬的統(tǒng)稱，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)有134種左右。具有經(jīng)濟(jì)價(jià)值且可作為人工養(yǎng)殖的種類主要有：甘紫菜（P．tenera）、壇紫菜（P．haitanensis）和條斑紫菜（P．yezoensis）。當(dāng)今我國(guó)是世界第一紫菜養(yǎng)殖大國(guó)，也是第一紫菜出口貿(mào)易國(guó)。條斑紫菜是我國(guó)目前常見(jiàn)的主要栽培紫菜品種之一，江蘇沿海所產(chǎn)條斑紫菜占我國(guó)總產(chǎn)量的95%。紫菜含有豐富的營(yíng)養(yǎng)成分，如蛋白質(zhì)、多糖、脂類、維生素和礦物質(zhì)等

3、，通常，每100克干紫菜中含25%-50 %的蛋白質(zhì)、20%-40%的碳水化合物（大部分為膳食纖維）、1%-3%的脂肪、7.8%-26.9%的灰分（礦物質(zhì)）以及大量的維生素等。其中，紫菜多糖和蛋白（藻紅蛋白）因其高含量和獨(dú)特的生物學(xué)功能，受到廣泛的關(guān)注，是紫菜開(kāi)發(fā)利用中的研究熱點(diǎn)。</p><p>　　海藻是海洋中分布最廣的生物，從微小的單細(xì)胞生物到長(zhǎng)達(dá)數(shù)十米的巨藻，種類繁多，有綠藻門、褐藻門、藍(lán)藻門、紅藻門等，

4、這些藻體中含有豐富的海藻多糖、蛋白質(zhì)、脂肪、維生素、礦物質(zhì)以及具有特殊功效的生理活性物質(zhì)，海藻酸是一種重要的抗逆物質(zhì)，它在生物體內(nèi)既可以作為結(jié)構(gòu)成分，又可以用于提供能量，而且它是許多生物的抗逆代謝物。海藻肥是由天然海藻經(jīng)生物和化學(xué)方法降解的一種生物有機(jī)肥料。在黃瓜、番茄、小麥、大豆、花生、葡萄等農(nóng)作物、果樹(shù)及蔬菜上所做的試驗(yàn)表明，使用海藻肥可提高種子發(fā)芽率,促進(jìn)根系發(fā)育和主莖的粗大,刺激根莖對(duì)土壤養(yǎng)分的吸收。對(duì)農(nóng)作物的成熟、產(chǎn)量和質(zhì)量的

5、提高、水果的保鮮以及抵抗病蟲(chóng)害方面均具有極大的作用,可使其產(chǎn)量增加10%-20%,保存時(shí)間也明顯延長(zhǎng)，能夠促進(jìn)農(nóng)作物吸收和生長(zhǎng)，增強(qiáng)農(nóng)作物抗逆能力。海藻肥是繼有機(jī)肥料、生物肥料后生產(chǎn)無(wú)公害、綠色、有機(jī)食品的又一理想原料,被專家認(rèn)為是第4代更新?lián)Q代的肥料。</p><p>　　我國(guó)海藻資源豐富,有100多種經(jīng)濟(jì)野生海藻,利用它們作新型無(wú)污染肥料, 適合綠色食品的生產(chǎn),有利于提高農(nóng)產(chǎn)品在國(guó)際市場(chǎng)上的競(jìng)爭(zhēng)力。國(guó)外運(yùn)用海

6、藻肥對(duì)土豆、玉米、小麥、花生、甜菜、黃瓜、番茄、葡萄等一系列作物、水果作過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn),均表現(xiàn)出很好的效果。海藻肥對(duì)農(nóng)作物提早成熟、提高產(chǎn)量和改善品質(zhì)、抵抗病蟲(chóng)害以及在水果保鮮等方面均有明顯作用,可使作物增產(chǎn)10%-30%,果蔬保存時(shí)間也明顯延長(zhǎng)。目前以天然有機(jī)原料制作的肥料在歐美、日本等國(guó)家和我國(guó)臺(tái)灣地區(qū)已廣泛使用,并在逐步替代和減少化肥的使用。高品質(zhì)的商品化有機(jī)肥和天然植物營(yíng)養(yǎng)劑、調(diào)節(jié)劑已成為新型農(nóng)業(yè)生產(chǎn)資料的一部分。海藻作為再生資源,

7、 以其獨(dú)特的營(yíng)養(yǎng)組分和顯著的生物活性受到世界的關(guān)注, 在國(guó)際上以海藻精為核心原料的配方產(chǎn)品種類繁多,市場(chǎng)活躍。海藻肥可增加農(nóng)作物產(chǎn)量和提高農(nóng)作物的品質(zhì)，促進(jìn)根系生長(zhǎng)，促進(jìn)植物對(duì)土壤中養(yǎng)分的吸收，增強(qiáng)農(nóng)作物的免疫力，減少真菌、病毒以及線蟲(chóng)對(duì)農(nóng)作物的損害，是一種值得加大力度推廣應(yīng)用的肥料。</p><p>　　二、研究的基本內(nèi)容與擬解決的主要問(wèn)題：</p><p><b>　　基本內(nèi)

8、容：</b></p><p><b>　　1. 番茄的種植</b></p><p>　　浸泡種子,待其發(fā)芽后種植到恒溫培養(yǎng)箱中,總共種植4盆番茄，每盆種植20株，分橫向5株縱向4排種植,其中三盆為實(shí)驗(yàn)組,另外一盆為對(duì)照組。</p><p>　　2. 降解液對(duì)番茄葉面噴灑</p><p>　　設(shè)計(jì)不同的實(shí)驗(yàn)

9、條件和時(shí)間,用篩選出來(lái)的降解液對(duì)實(shí)驗(yàn)組進(jìn)行4個(gè)不同時(shí)間段的等量噴灑,對(duì)照組噴灑等量水作為空白對(duì)照。</p><p>　　3. 采集葉片保存</p><p>　　到4葉期時(shí),每組采集等量番茄葉作上標(biāo)簽于-70℃下保存。</p><p>　　4. 測(cè)定葉片抗逆指標(biāo)</p><p>　　測(cè)定番茄葉的氣孔開(kāi)合度、過(guò)氧化氫含量、苯丙氨酸含量，得出降

10、解液對(duì)番茄抗逆影響的結(jié)果。</p><p><b>　　擬解決的主要問(wèn)題：</b></p><p>　　尋找一個(gè)合適的生物肥降解產(chǎn)物濃度,對(duì)番茄葉作用，進(jìn)行一些抗逆指標(biāo)的測(cè)定,通過(guò)與對(duì)照組的比較，得出紫菜肥的抗逆機(jī)制。</p><p>　　三、研究的方法與技術(shù)路線：</p><p><b>　　研究方法：<

11、;/b></p><p>　　用一個(gè)篩選出來(lái)的降解物濃度對(duì)番茄葉進(jìn)行不同的時(shí)間段的噴灑；</p><p>　　一段時(shí)間后采集葉片測(cè)定氣孔開(kāi)合度、過(guò)氧化氫含量、苯丙氨酸含量等抗逆指標(biāo)，與對(duì)照組進(jìn)行比較；</p><p>　　分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，得出紫菜肥對(duì)番茄抗逆機(jī)制影響的結(jié)果。</p><p><b>　　技術(shù)路線：</b&g

12、t;</p><p>　　1）設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)分組，種植番茄；</p><p>　　2）四葉期時(shí)對(duì)葉片用篩選出的濃度進(jìn)行噴灑，對(duì)照組噴灑水作空白對(duì)照；</p><p>　　3）采集葉片測(cè)定氣孔開(kāi)合度、過(guò)氧化氫含量、苯丙氨酸含量等抗逆指標(biāo)，與對(duì)照組進(jìn)行比較指標(biāo)。</p><p>　　四、研究的總體安排與進(jìn)度：</p><p>　

13、　2010年12月：查閱文獻(xiàn)資料，準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料。完成番茄的種植，采集番茄葉，并用紫菜降解物的一個(gè)濃度對(duì)其進(jìn)行不同時(shí)間段的噴灑。</p><p>　　2011年 1月：采集番茄葉于-70℃下保存，測(cè)定一些指標(biāo)含量。完成外文文獻(xiàn)的翻譯及實(shí)驗(yàn)。</p><p>　　2011年2月-2011年4月：完成畢業(yè)論文。</p><p>　　2011年5月：準(zhǔn)備畢業(yè)論文答辯。<

14、;/p><p><b>　　五、主要參考文獻(xiàn)：</b></p><p>　　[1]秦青,張文舉,張濤.海藻有機(jī)肥的研究進(jìn)展[J].中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2001，17(1)：46～49．</p><p>　　[2]袁華芳,周剛.雷力海藻肥在大棚番茄上的應(yīng)用試驗(yàn)[J].上海蔬菜,2010(3):62.</p><p>　　[3]王冠宙

15、,宋國(guó)通.“明月”海藻肥在黃瓜生產(chǎn)的應(yīng)用效果試驗(yàn)[J].蔬菜,2001, (10):24-25.</p><p>　　[4]馬蓮菊,卜寧,馬純艷,等.褐藻膠寡糖對(duì)豌豆種子萌發(fā)和幼苗的某些生理特性的影響[J].植物生理學(xué)通訊,2007,43(6):1097-1100.</p><p>　　[5]張付云, 趙小明,白雪芳,等.殼寡糖誘導(dǎo)植物抗病性研究進(jìn)展[J].中國(guó)生物防治,2008,24(2

16、):174 -178.</p><p>　　[6]肖志強(qiáng).美奇天然海藻肥在大豆上應(yīng)用效果[J].現(xiàn)代化農(nóng)業(yè),2010,(5):14.</p><p>　　[7]陸若輝.海藻肥的應(yīng)用方法和效果[J].農(nóng)業(yè)新技術(shù):肥料與農(nóng)藥,2004,(3):36-37.</p><p>　　[8]岳宏忠,侯棟,劉明軍,等.海藻肥對(duì)黃瓜種子萌發(fā)鹽脅迫傷害的緩解作用[J].中國(guó)蔬菜，20

17、05，(6):24-25.</p><p>　　[9]陶龍紅,王友好,房傳勝.新型海藻葉面肥在作物上的應(yīng)用效果[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2006,34(15):3755-3756　</p><p>　　[10]劉子會(huì),郭秀林,王 剛,等.干旱脅迫與ABA的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[J].植物學(xué)通報(bào),2004,21(2):228-234.</p><p>　　[11]Jeannin I,

18、et al.Bto Mar 1989,34:469～473.</p><p>　　[12]李國(guó)庭.海藻生物肥的研制[J].河北工業(yè)科技，2009，26(5):370～372.</p><p>　　[13]姜學(xué)玲,王 榮,孫 亮,等.“愛(ài)吉富”海藻肥在甜櫻桃上的應(yīng)用[J].煙臺(tái)果樹(shù),2009,1:25.</p><p>　　[14]隋戰(zhàn)鷹.海藻肥料的應(yīng)用前景[J].生

19、物學(xué)通報(bào)，2006,41(11):19～20.</p><p>　　[15]苗雨晨,宋純鵬,董發(fā)才.ABA誘導(dǎo)蠶豆氣孔保衛(wèi)細(xì)胞H2O2的產(chǎn)生[J].植物生理學(xué)報(bào),2000,26(1):53-58.</p><p>　　[16]江靜,韓栓,宋純鵬.SB20219調(diào)節(jié)蠶豆保衛(wèi)細(xì)胞中SA誘導(dǎo)H2O2產(chǎn)生[J].植物學(xué)通報(bào),2007,24(4):444-451.</p><p&

20、gt;　　[17]張驍,張霖,安國(guó)勇等.共聚焦顯微技術(shù)研究ABA誘導(dǎo)蠶豆氣孔保衛(wèi)細(xì)胞H2O2的產(chǎn)生[J].實(shí)驗(yàn)生物學(xué)報(bào),2001,34(1):71-73.</p><p>　　[18]張韶杰,韓璽柱,佘小平.殼梭孢素促進(jìn)蠶豆氣孔開(kāi)放與保衛(wèi)細(xì)胞H2O2的關(guān)系[J].陜西師范大學(xué)學(xué)報(bào),2009, 37(2):78-80.</p><p>　　[19]陳佰鴻,李新生,曹孜義等.一種用透明膠帶粘取

21、葉片表皮觀察氣孔的方法[J].植物生理學(xué)通訊,2004,40(2):215-218.</p><p>　　[20]孫錦,于慶文. 5 種海藻肥在黃瓜上的施用效果比較試驗(yàn)[J].甘肅農(nóng)業(yè)科技,2005(2):44-46.</p><p>　　[21]孫錦,韓麗君,于慶文.海藻肥對(duì)番茄抗旱性的影響[J].北方園藝,2005(3):64～66.</p><p>　　[22

22、]陳靈芝,孫錦. 海藻肥在辣椒上的應(yīng)用效果[J].辣椒雜志,2005(2):22～23.</p><p>　　[23]趙秀芬,李俊良.海藻肥在蔬菜生產(chǎn)上的應(yīng)用研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2009,37(6):2610,2616.</p><p>　　[24]韓麗君,范曉,房國(guó)明.海藻提取物對(duì)蔬菜種子萌芽的影響[J].海洋科學(xué),2000,24（11）:8～10.</p><

23、p>　　[25]Nelson W R,J Van Staden.J Plant Physiol,1984a,115:433～437.</p><p>　　[26]Nelson W R,J Van Staden. Hortscience,1984b,19:81～82.</p><p><b>　　畢業(yè)論文文獻(xiàn)綜述</b></p><p>&

24、lt;b>　　生物技術(shù)</b></p><p>　　海藻肥的應(yīng)用研究進(jìn)展</p><p>　　摘要:海藻肥是以天然海藻為原料開(kāi)發(fā)的一種新肥種,對(duì)蔬菜作物具有多種功效,目前已廣泛應(yīng)用在各種蔬菜作物上。本文介紹了天然有機(jī)海藻肥的功效及其應(yīng)用前景。</p><p>　　關(guān)鍵詞:海藻肥；功效；發(fā)展前景</p><p><b&g

25、t;　　引言</b></p><p>　　海藻是海洋中分布最廣的生物，從微小的單細(xì)胞生物到長(zhǎng)達(dá)數(shù)十米的巨藻，種類繁多，有綠藻門、褐藻門、藍(lán)藻門、紅藻門等，這些藻體中含有豐富的海藻多糖、蛋白質(zhì)、脂肪、維生素、礦物質(zhì)以及具有特殊功效的生理活性物質(zhì)，海藻酸是一種重要的抗逆物質(zhì)，它在生物體內(nèi)既可以作為結(jié)構(gòu)成分，又可以用于提供能量，而且它是許多生物的抗逆代謝物[1]。海藻肥是由天然海藻經(jīng)生物和化學(xué)方法降解的一種

26、生物有機(jī)肥料。在黃瓜、番茄、小麥、大豆、花生、葡萄等農(nóng)作物、果樹(shù)及蔬菜上所做的試驗(yàn)表明，使用海藻肥可提高種子發(fā)芽率,促進(jìn)根系發(fā)育和主莖的粗大,刺激根莖對(duì)土壤養(yǎng)分的吸收。對(duì)農(nóng)作物的成熟、產(chǎn)量和質(zhì)量的提高、水果的保鮮以及抵抗病蟲(chóng)害方面均具有極大的作用,可使其產(chǎn)量增加10%-20%,保存時(shí)間也明顯延長(zhǎng)，能夠促進(jìn)農(nóng)作物吸收和生長(zhǎng)，增強(qiáng)農(nóng)作物抗逆能力。海藻肥是繼有機(jī)肥料、生物肥料后生產(chǎn)無(wú)公害、綠色、有機(jī)食品的又一理想原料,被專家認(rèn)為是第4代更新?lián)Q

27、代的肥料。</p><p><b>　　1 海藻肥的功效</b></p><p>　　海藻肥是以天然海藻為原料, 經(jīng)特殊生理生化工藝手段, 提取海藻中的精華物質(zhì), 生產(chǎn)出含海藻酸的可溶性肥料,包括海藻精濃縮液、海藻精粉劑等。它具有多種功效，能對(duì)蔬菜等農(nóng)作物產(chǎn)生積極的影響。海藻肥作為一種新型、多重功效的有機(jī)肥料，經(jīng)過(guò)近幾年的推廣，在各種作物上都已經(jīng)得到了廣泛的應(yīng)用。&

28、lt;/p><p>　　1.1 植株生長(zhǎng)發(fā)育的影響</p><p>　　海藻肥中的天然植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑如生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素和赤霉素等,具有很高的生物活性；各種激素的比例與天然植物中各激素比例相近[2]。中國(guó)科學(xué)院海洋研究所韓麗君等研究人員通過(guò)白菜種子室內(nèi)試驗(yàn)和農(nóng)田試驗(yàn),證實(shí)了用海藻提取物浸泡種子,其萌發(fā)率明顯提高?，F(xiàn)已證實(shí)對(duì)種子萌發(fā)起促進(jìn)作用的是海藻中的植物生長(zhǎng)素吲哚乙酸(IAA),其生物學(xué)原理

29、是促進(jìn)作物根的生成,花、果實(shí)的發(fā)育及器官的生長(zhǎng),促進(jìn)組織分化,促使細(xì)胞生長(zhǎng)和延伸。吲哚乙酸廣泛存在于海藻中[3]。海藻肥中的有效組分經(jīng)過(guò)特殊處理后, 呈極易被植物吸收的活性狀態(tài), 在施用后2-3h即進(jìn)入植物體內(nèi),呈現(xiàn)很快的吸收傳導(dǎo)速度。王強(qiáng)[4]等對(duì)海藻肥與番茄生長(zhǎng)盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明,噴施海藻肥可以促進(jìn)番茄植株的生長(zhǎng),提高葉片葉綠素的含量,增強(qiáng)光合速率。</p><p>　　1.2 天然的土壤調(diào)理劑𙦙

30、7;</p><p>　　海藻對(duì)土壤的改良效果非常明顯,具有土壤空調(diào)的作用。在土壤中,海藻酸與金屬元素結(jié)合,形成一種分子量倍增的交聯(lián)高分子,這種高分子鹽一旦與水分子結(jié)合,便能牢牢地把持住水分子。海藻肥是天然生物肥料,可使植物與土壤形成和諧的生態(tài)系統(tǒng),因?yàn)樗刑烊换衔锶绾Ｔ逅徕c,是一種天然土壤調(diào)節(jié)劑,能促進(jìn)土壤團(tuán)粒結(jié)構(gòu)的形成,改善土壤內(nèi)部孔隙空間,協(xié)調(diào)土壤中固、液、氣三者的比例, 恢復(fù)土壤由于化學(xué)污染而失去的天

31、然膠質(zhì)平衡,從而激發(fā)土壤生物的活動(dòng), 增加速效養(yǎng)分的釋放,促進(jìn)作物根系生長(zhǎng),提高作物的抗逆性[3]。海藻肥內(nèi)含有的酶類可促進(jìn)土壤中有效微生物的繁殖，在植物-微生物代謝物循環(huán)中起著催化劑的作用,增強(qiáng)了土壤的生物效力。這些對(duì)于改良土壤結(jié)構(gòu)、增加土壤肥力,減輕農(nóng)藥、化肥對(duì)土壤的污染都是十分有利的。</p><p><b>　　1.3 抗逆性</b></p><p>　　海藻

32、所含有的天然植物荷爾蒙能對(duì)植株產(chǎn)生巨大的影響, 從而使植株可以控制和減輕抗逆反應(yīng)對(duì)其造成的損害, 如用海藻肥處理的番茄能抵抗-3℃的低溫而對(duì)照已經(jīng)死亡；海藻肥有減輕鹽害的效果；缺鉀脅迫下, 海藻肥處理能顯著促進(jìn)小麥生長(zhǎng),提高產(chǎn)量[5]。海藻肥中的海藻酸可以降低水的表面張力, 在植物表面形成保護(hù)膜, 增大了接觸面積,使水溶性物質(zhì)容易透過(guò)莖葉表面的細(xì)胞進(jìn)入植物體內(nèi), 植物快速地吸收海藻肥中的營(yíng)養(yǎng)成分。劉明軍[6]等報(bào)道了海藻肥在黃瓜上的抗旱

33、效應(yīng)研究，測(cè)定了9個(gè)海藻肥配方處理后的黃瓜幼苗在干旱脅迫條件下的6個(gè)生理指標(biāo)及抗旱系數(shù)，對(duì)其中與抗旱系數(shù)顯著相關(guān)的葉片相對(duì)含水量（RWC）、相對(duì)電導(dǎo)率、自由水/束縛水比值等4個(gè)指標(biāo)求其隸數(shù)函數(shù)加權(quán)平均值，結(jié)果與黃瓜幼苗的抗旱性極顯著正相關(guān)（r=0.8471）。</p><p>　　1.4 海藻肥對(duì)作物的增產(chǎn)效果</p><p>　　海藻肥是利用海藻經(jīng)過(guò)高技術(shù)加工制成的新型綠色肥料,其主要功

34、效是促進(jìn)植物形成較大的根系,以增進(jìn)根對(duì)土壤養(yǎng)分和水分的利用；增大莖部的篩管細(xì)胞, 加速光合產(chǎn)物從葉片運(yùn)送到其他部位, 增強(qiáng)植物抗逆、抗病蟲(chóng)、抗倒伏的能力, 從而達(dá)到增產(chǎn)增效的目的。浙江省農(nóng)業(yè)廳的研究人員在油菜、春大豆、西瓜上驗(yàn)證了海藻肥的增產(chǎn)效果，噴海藻肥,油菜增產(chǎn)9.28%,春大豆增產(chǎn)14.7%,西瓜增產(chǎn)6.68%。呂汰[7]等對(duì)對(duì)海藻肥在黃瓜、番茄、辣椒、馬鈴薯和油麥菜上的增產(chǎn)效果的研究結(jié)果表明, 施用海藻肥可不同程度地提高作物的產(chǎn)

35、量,在試驗(yàn)設(shè)計(jì)用量下,各作物較對(duì)照的最高增產(chǎn)率,黃瓜為31.9%,番茄為26.8%,辣椒為10.0%,馬鈴薯為16.8%,油麥菜為114.3%。國(guó)外也已對(duì)馬鈴薯、玉米、小麥、黃瓜、番茄等一系列作物做過(guò)對(duì)比試驗(yàn)，結(jié)果表明，海藻肥可使作物增產(chǎn)10％～30％；國(guó)內(nèi)一些蔬菜研究所也用海藻肥對(duì)黃瓜、番茄、辣椒等進(jìn)行試驗(yàn),也具有不同程度的增產(chǎn)效果，其中黃瓜可增產(chǎn)18.8％，辣椒增產(chǎn)30％[8]。</p><p>　　2 海

36、藻肥的應(yīng)用前景</p><p>　　我國(guó)海藻資源豐富,有100多種經(jīng)濟(jì)野生海藻,利用它們作新型無(wú)污染肥料, 適合綠色食品的生產(chǎn),有利于提高農(nóng)產(chǎn)品在國(guó)際市場(chǎng)上的競(jìng)爭(zhēng)力。國(guó)外運(yùn)用海藻肥對(duì)土豆、玉米、小麥、花生、甜菜、黃瓜、番茄、葡萄等一系列作物、水果作過(guò)對(duì)比實(shí)驗(yàn),均表現(xiàn)出很好的效果。海藻肥對(duì)農(nóng)作物提早成熟、提高產(chǎn)量和改善品質(zhì)、抵抗病蟲(chóng)害以及在水果保鮮等方面均有明顯作用,可使作物增產(chǎn)10%- 30%, 果蔬保存時(shí)間也明

37、顯延長(zhǎng)[9,10]。目前以天然有機(jī)原料制作的肥料在歐美、日本等國(guó)家和我國(guó)臺(tái)灣地區(qū)已廣泛使用,并在逐步替代和減少化肥的使用。高品質(zhì)的商品化有機(jī)肥和天然植物營(yíng)養(yǎng)劑、調(diào)節(jié)劑已成為新型農(nóng)業(yè)生產(chǎn)資料的一部分。海藻作為再生資源, 以其獨(dú)特的營(yíng)養(yǎng)組分和顯著的生物活性受到世界的關(guān)注, 在國(guó)際上以海藻精為核心原料的配方產(chǎn)品種類繁多,市場(chǎng)活躍。海藻肥可增加農(nóng)作物產(chǎn)量和提高農(nóng)作物的品質(zhì)，促進(jìn)根系生長(zhǎng)，促進(jìn)植物對(duì)土壤中養(yǎng)分的吸收，增強(qiáng)農(nóng)作物的免疫力，減少真菌、

38、病毒以及線蟲(chóng)對(duì)農(nóng)作物的損害，是一種值得加大力度推廣應(yīng)用的肥料。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)：</b></p><p>　　[1] 陸若輝.海藻肥的應(yīng)用方法和效果[J].農(nóng)業(yè)新技術(shù),2004,3：36-37.</p><p>　　[2] 孫德海.海藻肥效與機(jī)理[J].大化科技, 1997,(4):15-18.</p>&l

39、t;p>　　[3] 陳景明.海藻肥在作物生產(chǎn)上的應(yīng)用[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2005,33(9):1730-1731.</p><p>　　[4] 王強(qiáng),石偉勇.海藻肥對(duì)番茄生長(zhǎng)的影響及其機(jī)理研究[J].浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2003，2：67-70.</p><p>　　[5] 周二峰,宋秀紅等.天然有機(jī)海藻肥的功效及應(yīng)用前景[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007， 35(9):2671-2775.

40、</p><p>　　[6] 劉明軍，侯棟等.海藻肥在黃瓜上的抗旱效應(yīng)研究[J].甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2003,4：450-454.</p><p>　　[7] 呂汰,虎東岳等.海藻肥在蔬菜作物上的增產(chǎn)效果研究[J].甘肅農(nóng)業(yè)科技,2003,10:38-40.</p><p>　　[8] 陳靈芝孫錦. 新型綠色肥料-海藻肥[J]. 藥肥科技,2005,3:42.<

41、;/p><p>　　[9] 韓麗君，范曉.海藻提取物對(duì)蔬菜種子萌發(fā)的影響[J].海洋科學(xué),2002,24(11):8-11.</p><p>　　[10] 福迪著，羅迪安譯.藻類學(xué)[M].上海:上?？萍汲霭嫔?1980.234-245.</p><p><b>　　本科畢業(yè)設(shè)計(jì)</b></p><p><b>　　

42、（20_ _屆）</b></p><p>　　紫菜生物肥的抗逆機(jī)制初探</p><p><b>　　目錄</b></p><p><b>　　摘要9</b></p><p><b>　　1引言12</b></p><p>　　1.1海藻肥

43、的應(yīng)用功效12</p><p>　　1.2海藻肥的使用前景13</p><p>　　1.3海藻肥的研究進(jìn)展13</p><p><b>　　2材料與儀器14</b></p><p>　　2.1 實(shí)驗(yàn)材料14</p><p>　　2.2 實(shí)驗(yàn)儀器14</p><p&g

44、t;<b>　　3實(shí)驗(yàn)方法14</b></p><p>　　3.1紫菜降解液Ⅰ③蛋白質(zhì)測(cè)定14</p><p>　　3.2 紫菜降解液Ⅰ③多糖含量測(cè)定14</p><p>　　3.3 番茄的培養(yǎng)和葉面噴灑處理14</p><p>　　3.4 降解液Ⅰ③稀釋50倍處理對(duì)番茄葉氣孔開(kāi)合度影響15</p>

45、<p>　　3.5 降解液Ⅰ③稀釋50倍處理對(duì)番茄葉過(guò)氧化氫含量影響15</p><p>　　3.6 降解液Ⅰ③處理后番茄苯丙氨酸酶含量變化15</p><p>　　3.7 統(tǒng)計(jì)分析15</p><p><b>　　4結(jié)果15</b></p><p>　　4.1 紫菜降解液Ⅰ③蛋白質(zhì)含量15<

46、;/p><p>　　4.2 紫菜降解液Ⅰ③多糖含量16</p><p>　　4.3 紫菜降解液Ⅰ③處理不同時(shí)間對(duì)番茄氣孔開(kāi)閉的影響17</p><p>　　4.3 紫菜降解液Ⅰ③處理番茄后過(guò)氧化氫含量的變化18</p><p>　　4.4 紫菜降解液Ⅰ③不同時(shí)間段噴灑番茄葉后苯丙氨酸酶的變化19</p><p>&

47、lt;b>　　5結(jié)論與討論20</b></p><p>　　致謝錯(cuò)誤!未定義書簽。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)21</b></p><p>　　摘要：目的：根據(jù)瓊脂降解菌降解紫菜粉獲得生物肥最佳降解條件下的產(chǎn)物，用篩選出的Ⅰ③降解液對(duì)番茄葉作不同處理，獲得番茄的一些抗逆指標(biāo)。方法：測(cè)定Ⅰ③降解液的蛋白質(zhì)含量和多

48、糖含量；用篩選出的Ⅰ③降解液對(duì)番茄進(jìn)行不同時(shí)間的噴灑，通過(guò)提取噴灑后的番茄葉苯丙氨酸酶，測(cè)定吸光值指標(biāo)，得出降解液處理番茄葉能夠引起其PAL活性的變化；用Ⅰ③降解液處理番茄葉下表皮，測(cè)定其氣孔開(kāi)合度、過(guò)氧化氫含量的變化。結(jié)果：Ⅰ③降解液的蛋白質(zhì)含量為3.4882mg/mL，多糖含量為4.89mg/mL；經(jīng)降解液處理誘導(dǎo)后PAL的活性明顯提高，而且在測(cè)定期內(nèi)所有用降解液處理誘導(dǎo)的PAL活性都要高于噴灑水的對(duì)照組，降解液誘導(dǎo)的處理在第1天、

49、第3天、第5天呈現(xiàn)高峰；處理葉片下表皮30min，氣孔的開(kāi)度減小最明顯，氣孔的開(kāi)度是對(duì)照的42.09%，比對(duì)照開(kāi)度減小近乎57.91%，處理30min對(duì)氣孔的開(kāi)度影響最大；稀釋50倍Ⅰ③降解液處理番茄后能夠迫使其產(chǎn)生過(guò)氧化氫。結(jié)論：經(jīng)Ⅰ③降解液對(duì)番茄葉作不同處理后，對(duì)番茄氣孔開(kāi)合度的大小、過(guò)氧化氫含量、苯丙氨酸酶含量都有影響，說(shuō)明降解液植物的防御機(jī)制有一定的作用，能使番茄產(chǎn)生抗逆防御。</p><p>　　關(guān)鍵詞

50、：番茄；紫菜；Ⅰ③降解液；抗逆</p><p>　　Abstract：Purpose: By using the screened degradation porphyra powder fertilizer, we tried to elucidate its resistance inducing activities to tomato. Method: Determined the protein and

51、 polysaccharide content in degradation solutionⅠ ③; Sprayed the tomato leaves with screened Ⅰ③ which was diluted for different times, and the activity of phenylalanine ammonia-lyase (PAL), the changes of H2O2, and the st

52、omatal adaptation were detected. Results: Ⅰ③ solution contained 3.4882mg/mL protein, 4.89mg/mL sac</p><p>　　Keywords：Tomato; Leaves; Ⅰ③degradation solution; Resistance</p><p><b>　　1引言</

53、b></p><p>　　1.1海藻肥的應(yīng)用功效</p><p>　　海藻肥是運(yùn)用天然的海藻為原料，采取特殊生理生化工藝方法，從海藻中提取精華物質(zhì)，生產(chǎn)出一種含海藻酸的可溶性肥料，包括海藻精粉劑、海藻精濃縮液等。它具有多種功效，能對(duì)蔬菜等農(nóng)作物產(chǎn)生積極的影響。海藻肥中的植物天然生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑如生長(zhǎng)素、赤霉素和細(xì)胞分裂素等，具有很強(qiáng)的生物活性；這些激素的比例與天然植物中的各種激素比例都十分

54、相近[1]。海藻肥中的有效成分經(jīng)特殊處理以后，呈現(xiàn)極易被植物所吸收、消化的活性狀態(tài)，在施用2-3h后就可以進(jìn)入到植物體內(nèi),并且呈現(xiàn)較快的吸收傳導(dǎo)速率[2]。王強(qiáng)[3]等對(duì)海藻肥與番茄生長(zhǎng)盆栽試驗(yàn)結(jié)果表明，噴施海藻肥可以促進(jìn)番茄植株的生長(zhǎng)，提高葉片葉綠素的含量，增強(qiáng)光合速率。海藻肥是一種天然的生物新型肥料，可以使植物和土壤形成和諧的生態(tài)系統(tǒng),主要是因?yàn)樗锩婧刑烊换衔锶绾Ｔ逅徕c，它是天然的土壤調(diào)節(jié)劑，具有促進(jìn)土壤團(tuán)粒結(jié)構(gòu)形成的功能，能

55、夠改善土壤內(nèi)部的孔隙結(jié)構(gòu)，協(xié)調(diào)土壤中固、液、氣三者之間的比例, 恢復(fù)土壤的天然膠質(zhì)平衡，然后激發(fā)土壤生物活動(dòng)，加快對(duì)速效養(yǎng)分的釋放，促進(jìn)植物根系的生長(zhǎng)，以此來(lái)提高植物的抗逆性[4]。海藻中含有的天然植物激素能夠?qū)χ仓戤a(chǎn)生較大的影響，從而使植株能</p><p>　　1.2海藻肥的使用前景</p><p>　　海藻是海洋里分布面最廣的一種生物，種類繁多，有褐藻門、藍(lán)藻門、紅藻門、綠藻門等，在

56、這些藻體中含有大量的海藻多糖、蛋白質(zhì)、維生素、礦物質(zhì)以及具有特殊功能的生理活性物質(zhì)，海藻酸是一種重要的抗逆物質(zhì)，在生物體內(nèi)不僅可以作為結(jié)構(gòu)成分，還可以提供能量，并且它是很多生物的抗逆代謝物[9]。海藻肥是以天然海藻經(jīng)生物和化學(xué)方法降解的一種生物有機(jī)肥料[10]。在黃瓜、番茄、小麥、大豆、花生、葡萄等農(nóng)作物、果樹(shù)及蔬菜上所做的試驗(yàn)表明，使用海藻肥可提高種子發(fā)芽率,促進(jìn)根系發(fā)育和主莖的粗大,刺激根莖對(duì)土壤養(yǎng)分的吸收。對(duì)農(nóng)作物的成熟、產(chǎn)量和質(zhì)

57、量的提高、水果的保鮮以及抵抗病蟲(chóng)害方面均具有極大的作用，可使其產(chǎn)量增加10%-20%，保存時(shí)間也明顯延長(zhǎng)，能夠促進(jìn)農(nóng)作物吸收和生長(zhǎng)，增強(qiáng)農(nóng)作物抗逆能力。海藻肥是繼有機(jī)肥料、生物肥料后生產(chǎn)無(wú)公害、綠色、有機(jī)食品的又一新型理想原料，現(xiàn)代很多專家認(rèn)為它是第4代新肥料[11]。我國(guó)海藻資源豐厚,有100多種經(jīng)濟(jì)野生海藻，把他們加以利用作為新型無(wú)污染肥料，對(duì)綠色食品的生產(chǎn)有很大幫助，能夠提高農(nóng)產(chǎn)品在國(guó)際市場(chǎng)上的地位。在國(guó)外運(yùn)用海藻肥對(duì)玉米、小麥、

58、土豆、甜菜、黃瓜、番茄等一系列農(nóng)作物和</p><p>　　1.3海藻肥的研究進(jìn)展</p><p>　　中國(guó)擁有豐富的海藻資源，但在國(guó)內(nèi)海藻肥的研制僅僅起始于上世紀(jì)90年代后期，起步比較晚，但目前發(fā)展速度很快。目前，中國(guó)農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)登記的海藻肥生產(chǎn)企業(yè)主要有中國(guó)海洋大學(xué)生物工程開(kāi)發(fā)有限公司、北京雷力綠色連鎖公司和青島膠南明月海藻集團(tuán)等29家公司。如中國(guó)海洋大學(xué)生物工程開(kāi)發(fā)有限公司，其生產(chǎn)工藝

59、、產(chǎn)品效果均達(dá)到了國(guó)際先進(jìn)水平，主要產(chǎn)品暢銷歐美、東南亞等二十幾個(gè)國(guó)家及地區(qū)。海藻肥是一種使用海洋巨藻類生產(chǎn)加工或者是再配上一定數(shù)量的氮磷鉀以及微量元素加工出來(lái)的一種肥料[14]。目前有多種形態(tài)但是目前市場(chǎng)上主要是以：液體跟粉末為主，還有很少一部分是顆粒狀態(tài)。海洋巨藻含有很多種物質(zhì)，海藻及海藻植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑(以下簡(jiǎn)稱SWC)中已被研究的主要活性物質(zhì)有以下幾種：細(xì)胞激動(dòng)素、植物生長(zhǎng)素、脫落酸、乙烯。中科院海洋所韓麗君領(lǐng)導(dǎo)的項(xiàng)目組在國(guó)際上使

60、用“二級(jí)混合制備技術(shù)”研制成功，首次表明了我國(guó)具有海藻肥的自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)，打破了從1950年一直以來(lái)外國(guó)對(duì)海藻肥的生產(chǎn)壟斷歷史。這種方法不僅保留了海藻中所含的生物活性物質(zhì)，并且還大大濃縮了海藻中的微量元素和植物生長(zhǎng)的必需元素，與國(guó)際上同類海藻肥生產(chǎn)相比成本更低，增產(chǎn)效果更加</p><p><b>　　2材料與儀器</b></p><p><b>　　2.1

61、實(shí)驗(yàn)材料</b></p><p>　　番茄；Tris-KCl緩沖液（pH7.2）；苯酚（5%）；濃硫酸；葡萄糖；過(guò)氧化氫（30%）；過(guò)氧化氫酶；紫菜肥降解液；硼酸緩沖液（0.1mol/l,PH8.8, 1mmol/lEDTA,巰基乙醇2mmol/l）；HCl（6 mol/l）；苯丙氨酸（0.02 mol/l）。</p><p><b>　　2.2 實(shí)驗(yàn)儀器</b

62、></p><p>　　離心機(jī)；W201D恒溫水浴鍋(上海申順生物科技有限公司)；高壓蒸汽滅菌鍋；電子式可調(diào)電爐(南通金石實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；Multikem MK3酶標(biāo)儀(ThermoLabsystem公司)；電子天平；恒溫培養(yǎng)箱；振蕩儀；電子顯微鏡。</p><p><b>　　3實(shí)驗(yàn)方法</b></p><p>　　3.1紫菜降解液

63、Ⅰ③蛋白質(zhì)測(cè)定</p><p>　　按照Bio-Rad DC Protein ASSAY試劑盒操作說(shuō)明方法檢測(cè)，BCA作為蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)行梯度稀釋,測(cè)定吸光值進(jìn)行計(jì)算。</p><p>　　3.2 紫菜降解液Ⅰ③多糖含量測(cè)定</p><p>　　5%苯酚試劑的配制:稱取5g苯酚,加適量去離子水溶解,移至100mL容量瓶中,加水至刻度,搖勻,置冰箱內(nèi)備用。將葡萄糖標(biāo)

64、準(zhǔn)品配成濃度為100.8μg·mL-1的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,準(zhǔn)確移取0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL、0.7mL、0.8mL于試管管中,分別加水至1.0mL,然后再分別加入5%苯酚1.5mL、濃硫酸6.0mL,搖勻,靜置25min ,在波長(zhǎng)490nm 處測(cè)定吸光度,以1.0mL蒸餾水作空白,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并擬合得到回歸方程。從篩選出來(lái)Ⅰ③降解液中取出1mL于試管中，按上述方法進(jìn)行反應(yīng)，測(cè)定吸光值

65、。</p><p>　　3.3 番茄的培養(yǎng)和葉面噴灑處理</p><p>　　番茄（Lycopersicon esculentum Miller）種子清洗消毒后浸種24h,25℃催芽2～3d ,然后播種于較肥沃的營(yíng)養(yǎng)土中，在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。幼苗生長(zhǎng)期間每天澆水1次,光暗周期為14h/10h ,溫度為18～25 ℃,光照強(qiáng)度為300μmolm-2s-1 ,相對(duì)濕度為80%。幼苗培養(yǎng)3～4周

66、后，番茄6-7葉株齡，株高15-18cm時(shí)備用，每盆6株。</p><p>　　取上述培養(yǎng)四葉期時(shí)的番茄4盆，分成2組，編號(hào)A、B，其中A噴灑篩選出來(lái)稀釋50倍的降解液Ⅰ③于每片真葉的植物葉面，B用水噴灑做相同處理作為空白對(duì)照，連續(xù)噴灑7天，每天固定時(shí)間噴灑1次，每次噴灑完之后立即從各盆中隨機(jī)剪取1g左右的生長(zhǎng)良好的番茄葉，分別作上標(biāo)簽后于-70℃下超低溫冰箱中保存，用于苯丙氨酸酶含量的測(cè)定。</p>

67、<p>　　3.4 降解液Ⅰ③稀釋50倍處理對(duì)番茄葉氣孔開(kāi)合度影響</p><p>　　在取樣前將番茄苗在光照強(qiáng)度為300μmolm-2s-1 下培養(yǎng)3小時(shí)，然后取頂端第2-3對(duì)完全展開(kāi)葉，蒸餾水洗凈后，用膠帶紙粘取下表皮，洗去葉肉細(xì)胞，切成5mm的表皮條。將新制備的表皮條于Tris-KCl緩沖液（pH7.2）中在上述光照強(qiáng)度下培養(yǎng)1小時(shí)致使氣孔完全打開(kāi)。從緩沖液中取出3-5個(gè)表皮條置于5ml稀釋5

68、0倍的降解液Ⅰ③中，不同時(shí)間點(diǎn)0min、15min、30min、45min、60min下培養(yǎng)，另一組在相同時(shí)間段下以緩沖液作為對(duì)照組，取樣在10 x 40倍顯微鏡下測(cè)定氣空開(kāi)合度。每個(gè)處理重復(fù)3次，每次取10個(gè)氣孔進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果取其平均值。</p><p>　　3.5 降解液Ⅰ③稀釋50倍處理對(duì)番茄葉過(guò)氧化氫含量影響</p><p>　　剪取生長(zhǎng)狀態(tài)好的葉片，用蒸餾水洗凈，撕取下表皮撕取下

69、表皮，用毛筆輕輕刷去葉肉細(xì)胞，切成0.5cm x 1cm的表皮條，在Tris緩沖液(10mmol/L-Tris，50mmol/L-KCl，pH 7.2)中培養(yǎng)。每次實(shí)驗(yàn)取預(yù)處理過(guò)的表皮條10個(gè)，分別放置于5ml的緩沖液（含100μl降解液Ⅰ③）和20U/mL過(guò)氧化氫酶(含100μl降解液Ⅰ③)以及不含降解液和過(guò)氧化氫酶的5mLTris緩沖液的培養(yǎng)皿中。處理5分鐘后，從培養(yǎng)皿吸取200μl用到紫外板上,用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值(波長(zhǎng)為240nm

70、)。同時(shí)以緩沖溶液作為對(duì)照，以標(biāo)準(zhǔn)H2O2濃度梯度溶液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，獲得H202濃度與吸光值的回歸曲線。每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。</p><p>　　3.6 降解液Ⅰ③處理后番茄苯丙氨酸酶含量變化</p><p>　　將噴灑稀釋50倍Ⅰ③降解液和水各時(shí)間段的1.0g番茄葉片置于預(yù)冷的研缽中，加入5ml硼酸提取緩沖液（0.1mol/l,PH8.8,1mmol/lEDTA,巰基乙醇2mmol/l）在

71、冰浴中研磨成漿。于4℃，以10000rpm離心15min，上清液測(cè)定酶活性。將0.2ml酶液加入1ml 0.02mmol/L的苯丙氨酸和2.0ml 0.1mol/L硼酸緩沖液，1ml蒸餾水混勻后置30℃水浴反應(yīng)60min，加入0.2ml 6mol/L HCl終止反應(yīng)。分光光度計(jì)290nm處測(cè)定OD值。PAL活力以每克葉片鮮重每小時(shí)1個(gè)OD290nm值的變化為酶活單位。</p><p><b>　　3.7

72、 統(tǒng)計(jì)分析</b></p><p>　　以上實(shí)驗(yàn)均重復(fù)做2-3次，所有數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。組間比較用t檢驗(yàn)，以P<0.05為顯著差異(*表示),以P<0.01為極顯著差異(**表示)。</p><p><b>　　4結(jié)果</b></p><p>　　4.1 紫菜降解液Ⅰ③蛋白質(zhì)含量<

73、/p><p>　　按照Bio-Rad DC Protein ASSAY試劑盒操作說(shuō)明方法檢測(cè)，BCA作為蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)行梯度稀釋，起始濃度為4mg/ml制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1），回歸方程為:y(mg/mL)=0.0974X+0.0686；R2=0.9973,式中:y為吸光度；x為蛋白質(zhì)濃度,mg·mL-1。450nm下檢測(cè)OD值為0.4070，經(jīng)計(jì)算紫菜降解液Ⅰ③蛋白質(zhì)含量為3.4882mg/mL。</

74、p><p>　　圖1 蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線</p><p>　　4.2 紫菜降解液Ⅰ③多糖含量</p><p>　　多糖是一類重要的生物大分子,它由多個(gè)單糖分子縮合、失水而成,是一類分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜且龐大的糖類物質(zhì)。多糖是自然界含量最為豐富的生物聚合物,幾乎存在于所有生物體中。近年來(lái),具有生物活性功能多糖的研究引起了國(guó)內(nèi)外學(xué)者極大的興趣。研究發(fā)現(xiàn),多糖及糖復(fù)合物由于參與了細(xì)胞中各

75、種生命現(xiàn)象的調(diào)節(jié)。目前關(guān)于天然產(chǎn)物中多糖含量的測(cè)定有很多種方法，本試驗(yàn)采用苯酚-硫酸法對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品和降解液進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液工作曲線見(jiàn)圖2,回歸方程為:y(mg/mL)=0.5359X+0.0897；R2=0.9919,式中:y 為吸光度；x為葡萄糖濃度,mg·mL-1。結(jié)果表明,降解液Ⅰ③的吸光值為2.7103，多糖含量為4.89mg/mL。</p><p>　　圖2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線</p

76、><p>　　4.3 紫菜降解液Ⅰ③處理不同時(shí)間對(duì)番茄氣孔開(kāi)閉的影響</p><p>　　氣孔是植物與外界進(jìn)行氣體交換的孔道和控制蒸騰的結(jié)構(gòu)。通過(guò)它的開(kāi)閉，調(diào)控著植物的氣體交換率和水分蒸騰率，對(duì)植物的生活起著極為重要的作用。氣孔可以根據(jù)適當(dāng)?shù)膬?nèi)外環(huán)境條件開(kāi)閉。植物在逆境條件下（包括低溫、干旱、鹽堿等)以及中午強(qiáng)光照的條件下氣孔關(guān)閉，以減少蒸騰作用、呼吸作用，減少植物體內(nèi)水分的散失。這對(duì)于植物在

77、逆境中保護(hù)自己有著重要意義。用稀釋50倍Ⅰ③降解液處理番茄下表皮不同時(shí)間,測(cè)量氣孔的開(kāi)度,結(jié)果表明(圖3,4)降解液處理不同時(shí)間,氣孔的開(kāi)度不同,降解液處理15min,氣孔開(kāi)度比對(duì)照小,開(kāi)度是對(duì)照的49.97%；處理30min,氣孔的開(kāi)度減小最明顯，氣孔的開(kāi)度是對(duì)照的42.09%，比對(duì)照開(kāi)度減小近乎57.91%；處理45mim時(shí)，氣孔的開(kāi)度已開(kāi)始增加，是對(duì)照的49.70；處理60min時(shí)，氣孔的開(kāi)度是對(duì)照的58.90%。由此可見(jiàn)處理30

78、min，對(duì)氣孔的開(kāi)度影響最大。</p><p>　　圖3 稀釋50倍降解液Ⅰ③處理不同時(shí)間對(duì)番茄氣孔開(kāi)合度影響（**表示p<0.01）</p><p>　　圖4 不同時(shí)間處理的葉片氣孔的開(kāi)合度（A.空白；B.15min；C.30min；D.45min；E.60min）</p><p>　　4.3 紫菜降解液Ⅰ③處理番茄后過(guò)氧化氫含量的變化</p>

79、<p>　　活性氧又成為反應(yīng)性氧，是一類具有高反應(yīng)性的自由基的總稱，包括H2O2 、O2-、OH·等，植物體內(nèi)活性氧在短時(shí)間內(nèi)快速、大量釋放的現(xiàn)象稱為活性氧的爆發(fā)（Oxidative Burst）?；钚匝醯谋l(fā)是外源性激發(fā)因子與植物細(xì)胞相互作用早期階段的一個(gè)主要現(xiàn)象。許多研究已經(jīng)證明活性氧的爆發(fā)能夠引起植物的過(guò)敏性壞死反應(yīng)，誘導(dǎo)植保素的合成和細(xì)胞壁的強(qiáng)化以及誘導(dǎo)抗病相關(guān)基因的表達(dá)等防御機(jī)制，因此，活性氧在植物的防御

80、反應(yīng)中起著重要的作用。本試驗(yàn)以標(biāo)準(zhǔn)H2O2濃度梯度溶液制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖5），得出回歸方程為:y(mol/L)=0.2069X-0.0359；R=0.9956,式中:y 為吸光度；x為過(guò)氧化氫濃度, mol/L。同時(shí)設(shè)置三個(gè)不同條件：5ml的緩沖液（含100μl降解液Ⅰ③）和20U/mL過(guò)氧化氫酶(含100μl降解液Ⅰ③)以及不含降解液和過(guò)氧化氫酶的5mLTris緩沖液，測(cè)定吸光值后如圖5所示。從圖5中比較CK組合A組發(fā)現(xiàn)：用100μl降

81、解液Ⅰ③處理番茄葉下表皮對(duì)其過(guò)氧化氫的影響極其顯著（P<0.01）。這在一定程度上可以表明, 紫菜降解液Ⅰ③作用于植物后，能促進(jìn)植物產(chǎn)生一定量的過(guò)氧化氫。</p><p>　　圖5 過(guò)氧化氫標(biāo)準(zhǔn)曲線</p><p>　　圖6 通過(guò)紫外光吸收檢測(cè)表皮條H2O2濃度的變化(**表示p<0.01)</p><p>　　注：CK表示對(duì)照組(5ml Tris緩沖液

82、) A表示5ml的緩沖液（含100μl降解液Ⅰ③）</p><p>　　B表示5ml的緩沖液（含100μl降解液Ⅰ③）和20U/mL過(guò)氧化氫酶(含100μl降解液Ⅰ③)</p><p>　　4.4 紫菜降解液Ⅰ③不同時(shí)間段噴灑番茄葉后苯丙氨酸酶的變化</p><p>　　紫菜降解液Ⅰ③50倍噴灑處理誘導(dǎo)后番茄葉片中的苯丙氨酸解氨酶PAL的活性變化測(cè)定結(jié)果（圖7）

83、表明，經(jīng)降解液Ⅰ③50倍處理誘導(dǎo)后PAL活性迅速上升，且在測(cè)定期內(nèi)降解液處理誘導(dǎo)的PAL活性都明顯高于噴灑水的對(duì)照組，降解液誘導(dǎo)的處理在第1天、第3天、第5天呈現(xiàn)高峰。從第7天開(kāi)始，各處理的PAL活性開(kāi)始呈現(xiàn)下降趨勢(shì)。</p><p>　　圖7 稀釋50倍Ⅰ③降解液處理不同天數(shù)后PAL活性變化(*表示p<0.05,**表示p<0.01)</p><p><b>　　5

84、結(jié)論與討論</b></p><p>　　試驗(yàn)結(jié)果表明，紫菜降解液Ⅰ③的蛋白質(zhì)含量為3.4882mg/mL，多糖含量為4.89mg/mL。紫菜降解液Ⅰ③對(duì)番茄葉下表皮的處理后，其氣孔開(kāi)度在30min時(shí)候減小，過(guò)氧化氫的含量會(huì)增加，噴灑的番茄葉的苯丙氨酸酶也明顯高于噴灑水的對(duì)照組，降解液Ⅰ③處理番茄后，番茄的抗逆指標(biāo)都會(huì)明顯得到提升，說(shuō)明對(duì)番茄的防御機(jī)制有一定的效果。</p><p&g

85、t;　　1）氣孔是控制葉片內(nèi)外水分和二氧化碳擴(kuò)散交換的門戶，葉氣孔的開(kāi)閉調(diào)節(jié)著蒸騰和光合過(guò)程[16]。關(guān)于H2O2 在氣孔運(yùn)動(dòng)中的調(diào)控作用已有不少報(bào)道。McAinsh等[17]首先報(bào)道外源的H2O2可誘導(dǎo)蠶豆(Vicia faba)保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度上升和氣孔關(guān)閉。本試驗(yàn)在不同時(shí)間段下處理番茄葉下表皮，試驗(yàn)結(jié)果表明紫菜降解液Ⅰ③30min處理下，其氣孔開(kāi)合度閉合最明顯。</p><p>　　2）過(guò)氧化氫酶(C

86、AT)、超氧化物歧化酶(SOD)是植物體內(nèi)的保護(hù)酶系，SOD與CAT的活性上升，則說(shuō)明植物的抗逆性有了增強(qiáng)，這方面已有多個(gè)文獻(xiàn)報(bào)道?；钚匝醯谋l(fā)在以前也有報(bào)道[18]。過(guò)氧化氫酶是植物保護(hù)酶系統(tǒng)中的一種重要酶，在清除活性氧和保護(hù)細(xì)胞膜的完整性方面起著重要作用。不少研究證明H2O2、NO和Ca2+充當(dāng)?shù)诙攀拐{(diào)控外源ABA誘導(dǎo)的植物氣孔的運(yùn)動(dòng)，ABA受體接受ABA信號(hào)后經(jīng)激酶將信號(hào)分別通過(guò)H2O2、NO和Ca2+信號(hào)組分的變化并向下游傳遞

87、,同時(shí)H2O2和NO又可誘使胞內(nèi)Ca2+進(jìn)一步上升,最后誘導(dǎo)氣孔關(guān)閉[19,20],這跟上述對(duì)氣孔處理的結(jié)果相一致。試驗(yàn)結(jié)果表明，用紫菜降解液Ⅰ③處理番茄葉下表皮能夠引起過(guò)氧化氫的產(chǎn)生，提高抗逆機(jī)制。</p><p>　　3）PAL酶是苯丙烷代謝途徑中的限速酶和關(guān)鍵酶，對(duì)酚類物質(zhì)的積累起著決定性的重要作用。苯丙氨酸解氨酶是指去體內(nèi)非常重要的一類防御酶類。PAL活性升高會(huì)顯著促進(jìn)木質(zhì)素的積累以及酚類物質(zhì)與植保素的合

88、成，木質(zhì)素可以增加細(xì)胞壁的厚度，形成一道病原菌入侵的機(jī)械屏障，從而來(lái)以此來(lái)提高植物的抗病能力[21,22]。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，紫菜降解液Ⅰ③處理后番茄植株P(guān)AL活性都要高于對(duì)照組，說(shuō)明了紫菜降解液Ⅰ③能夠誘導(dǎo)番茄增強(qiáng)防御機(jī)制提高。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 袁華芳,周剛.雷力海藻肥在大棚番茄上的應(yīng)用試驗(yàn)[J].上海蔬菜,

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