草莓NBS-LRR家族基因的克隆和表達分析與白粉病抗性相關分子標記的研究.pdf

1、草莓白粉病是由Sphaerotheca macularis病原體引起的真菌性病害，是世界各地草莓生產上的主要病害，嚴重影響草莓的品質和產量。充分挖掘抗病基因資源，選育出優(yōu)質抗病新品種是防治白粉病發(fā)生的根本途徑，這是當今草莓育種的一個重要課題。通過跟蹤觀察雜交后代群體的田間表型，評價篩選出高抗和高感草莓單株，構建了F2分析作圖群體。利用微衛(wèi)星分子標記（SSR）對親本Darselect與Sweet Charlie的雜種F1代和F2代雜交群體

2、進行了初步研究。運用同源克隆結合RACE技術從久香草莓的莖尖cDNA中分離得到一個抗病相關TIR-NBS-LRR類基因FaNBS1（GenBank登錄號：HQ845018），解析了該基因及其編碼蛋白的組織結構和同源特征，并采用半定量RT-PCR技術分析了該基因在不同組織中的表達差異。
　　 結果如下：
　　 1）利用改良的CTAB法優(yōu)化了草莓基因組DNA的提取方法。
　　 2）建立和優(yōu)化了聚丙烯酰胺凝膠電泳的快速

3、銀染方法。
　　 3）利用146對SSR引物，在親本和F1間篩選出19對在親本中存在差異且在F1中共顯的引物，對150個F2 群體及雙親樣本進行了SSR-PCR擴增，共獲得7個與草莓白粉病抗性相關的SSR標記，分別為： FSS6、FSS40、FSS50、FSS60、FSS65、FSS121、FSS128。對這7對標記進行遺傳分析，應用生物軟件Mapmaker3.0和WinQTLCart2.5進行連鎖分析并作圖。初步構建了包含7個

4、SSR標記位點，兩個連鎖群的遺傳連鎖圖譜，平均遺傳圖距8.85cM。
　　 4）FaNBS1基因在基因組上長為2434 bp, 由3個外顯子組成的轉錄本包含長1893bp的讀碼框。所編碼蛋白含630個氨基酸殘基，在15-146是保守的TIR結構域，191-492是NB-ARC結構域。FaNBS1與大豆TIR-NBS-LRR抗性蛋白ADF78118的全序列一致性為50.20%，在NB-ARC保守結構域的一致性為52.06%。半定量