養(yǎng)殖魚蝦中亞硝酸鹽的檢測【畢業(yè)論文】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　?。?0 屆）</b></p><p>　　養(yǎng)殖魚蝦中亞硝酸鹽的檢測</p><p>　　所在學院 </p><p>　　專業(yè)班級 農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境

2、 </p><p>　　學生姓名 學號 </p><p>　　指導教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p>　　[摘要]近年來，廣泛采用的含氮農(nóng)藥、化學氮肥及含氮工業(yè)廢水、

3、廢渣對環(huán)境土壤和水造成污染,使蔬菜、水產(chǎn)品等食品中亞硝酸鹽含量不斷增加。國內(nèi)外已報道的測定亞硝酸根的方法很多，有光譜分析法：可見分光光度法、紫外光度法；色譜分析法：高效液相色譜法、離子色譜法；電化學分析法等。</p><p>　　本文使用食品安全國家標準食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的檢測（GB 5009.33—2010）中的分光光度法，對養(yǎng)殖水產(chǎn)品樣品中的亞硝酸鹽進行檢測、分析。用VIS-723N可見分光光度計檢測54

4、3nm、538nm兩波長處樣品的吸光值，檢測樣品中亞硝酸鹽的含量，進行結(jié)果比較、分析。亞硝酸鹽在543nm、538nm兩處的方法檢出限分別為0.0066mg/kg、0.0063mg/kg。樣品加標回收率在90.26～107.01%之間，兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值與算術(shù)平均值的比值的百分比為0.59～1.00%，均小于10%。精密度和重現(xiàn)性均能滿足試驗要求。</p><p>　　[關(guān)鍵詞] 養(yǎng)殖；魚蝦；亞硝酸鹽；檢

5、測</p><p>　　[Abstract] In recent years, the widespread use of nitrogen-containing pesticides, chemical fertilizers and nitrogen industrial wastewater, waste on the environment caused by pollution of soil and

6、water, so vegetables and aquatic products increased nitrite content of food. Domestic and international determination of nitrite has been reported many ways, a spectral analysis method: visible spectrophotometry, UV spec

7、trophotometry; chromatography: HPLC, ion chromatography; electrochemical method.</p><p>　　This article uses spectrophotometry in national food safety standards of food detection of nitrite and nitrate (GB 50

8、09.33-2010), to detect nitrite in aquatic products and to analyze the test results. Use the VIS - 723N visible spectrophotometer to detect nitrite in aquatic products in 543nm, 538nm two wavelength absorbance, calculate

9、the nitrite content in samples. The results were compared and analyzed. Nitrite in the 543nm, 538nm the detection limits were 0.0066mg/kg, 0.0063mg/kg. The recover</p><p>　　[Keywords] cultivation; farmed fis

10、h; nitrite; Determination</p><p><b>　　前言</b></p><p>　　在自然界和生活中，亞硝酸鹽分布很廣，廣泛存在人類環(huán)境中，在食物中，如糧食、蔬菜、肉類和魚類中都含有一定量的亞硝酸鹽，比如蔬菜中約有4毫克/千克，肉類約有3毫克/千克，蛋類約有5毫克/千克，豆粉中的平均含量可以達到10毫克/千克。其它食物如各種酒類、蘑菇、調(diào)

11、味品、加工薰制食品、腌菜中也含有亞硝酸鹽，亞硝酸鹽還存在于土壤、水以及煙草的煙霧中。[2]</p><p>　　20世紀80年代以來，隨著中國經(jīng)濟的快速增長及人民生活水平的大幅度提高，食品結(jié)構(gòu)發(fā)生了重大變化，食品安全成為21世紀人們最關(guān)注的問題之一。[1]2007年4月，長春發(fā)生集體亞硝酸鹽中毒事件，致25人住院；2010年11月11日，海螺溝中毒事件續(xù)：檢測出亞硝酸鹽超標500多倍； 2011年2月23日晚，北

12、京家樂福5名員工亞硝酸鹽中毒事件系誤食；2011年3月8日，安徽亳州亞硝酸鹽中毒事件。一系列的亞硝酸鹽中毒事件的發(fā)生，讓我們了解到亞硝酸鹽對我們生活環(huán)境，人類健康的影響越來越嚴重，我國每年均有多起亞硝酸鹽中毒事件發(fā)生。</p><p><b>　　2 亞硝酸鹽的介紹</b></p><p>　　亞硝酸鹽為一種白色或微黃色結(jié)晶，有的為顆粒狀淺灰色粉末，無臭味、微咸澀，易

13、潮解，易溶于水。[7] 在生活中常見的煙硝酸鹽有亞硝酸鈉和亞硝酸鉀，被稱為工業(yè)用鹽。亞硝酸鹽性狀與食鹽極為相似，是一種劇毒化學品，同時也是一種允許使用的食品添加劑，作為食品添加劑，[4]其目的在于保持或賦予食品以良好的色澤，抑制微生物的增殖，同時對提高腌肉的風味也有一定的作用。近年來，人們發(fā)現(xiàn)煙硝酸鹽能和不同種類的氨基化合物反應，產(chǎn)生致癌的N-亞硝基化合物。 [5]</p><p>　　2.1亞硝酸鹽的來源<

14、;/p><p>　　亞硝酸鹽和硝酸鹽廣泛存在于土壤、水域及植物中，綠色蔬菜中的甜菜、萵苣、菠菜、芹菜及蘿卜等硝酸鹽含量較高,硝酸鹽可以在某些細菌的還原作用下可變成亞硝酸鹽。目前廣泛采用的含氮農(nóng)藥、化學氮肥及含氮工業(yè)廢水、廢渣對環(huán)境土壤和水造成污染，蔬菜中亞硝酸鹽含量不斷增加,土壤是水體、植物性食品亞硝酸鹽的主要來源。 [4]</p><p>　　2.2亞硝酸鹽對人類健康的影響</p>

15、;<p>　　亞硝酸鹽廣泛應用于食品保鮮、藥物領(lǐng)域，同時存在于污染的水、蔬菜內(nèi)。隨著農(nóng)業(yè)氮肥大量應用和工業(yè)廢水排放，地表水和地下水亞硝酸鹽污染越來越嚴重。人體內(nèi)亞硝酸鹽主要來自飲水和食品中的硝酸鹽在體內(nèi)的轉(zhuǎn)化，或直接從飲水和食物中攝取，在人體內(nèi)的亞硝酸鹽也可由NO轉(zhuǎn)化形成。 [8]亞硝酸鹽可在人和動物體內(nèi)與攝入的次級胺等含氮物結(jié)合，轉(zhuǎn)化形成公認的強致癌物———亞硝胺，從而誘發(fā)消化系統(tǒng)癌變。 [9]</p>&

16、lt;p>　　2.2.1亞硝酸鹽進入人體的主要途徑</p><p>　　人體中亞硝酸鹽的來源主要有兩種，一種是體外來源，體外來源主要來人類食用的食物和飲用水，由于飲食習慣和地域的差異，不同地區(qū)的人攝入量也有不同。另一種是內(nèi)源性來源，一般情況下人體外攝入的亞硝酸鹽的攝入量是很低的，主要由進入人體內(nèi)的硝酸鹽經(jīng)細菌還原而成。以下主要介紹亞硝酸鹽的幾種體外的來源。</p><p>　　2.2

17、.1.1 飲用水</p><p>　　們飲用的井水、河水或者自來水，大多含有微量的硝酸鹽。硝酸鹽對人體并無害處，所以飲用無妨。但如果飲用水被細菌污染，在某些細菌作用下，硝酸鹽能轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽。剛被打上來的深井水，亞硝酸鹽的含量只有0.01mg/L，在室溫下存放三四天后，亞硝酸鹽的含量會上升至0.914mg/L左右，即使將原來不含亞硝酸鹽的水存放4天后，亞硝酸鹽的含量也會上升到0.11mg/L。由于含有雜質(zhì)較多，河

18、水存放后變質(zhì)更快。若將亞硝酸鹽含量僅為0.5mg/L的河水存放4天，亞硝酸鹽的含量竟高達1.757mg/L。另外,用不潔凈的器具盛放的隔夜水、蒸鍋水或暖瓶底剩水均會含有較多的硝酸鹽或亞硝酸鹽,人飲用可引起中毒。我國某些地區(qū)的苦井水含有較多的硝酸鹽和亞硝酸鹽,如用這種水煮粥,或在不潔凈的容器內(nèi)存放過久,由于細菌的作用,可增加粥內(nèi)的亞硝酸含量。煮熟的粥4小時后亞硝酸鹽含量開始增高,存放一日后達184mg/kg。有人認為，存放時間較長的水燒開

19、或粥煮熟后就能殺死細菌，食用也就無害了，但事實上并非如此，因為細菌雖然死了，亞硝酸鹽依然存在，它的潛在危害并未消除。[2】 </p><p>　　2.2.1.2蔬菜、某些養(yǎng)殖水產(chǎn)品等食物</p><p>　　蔬菜是一種易于富積硝酸鹽的植物性食品，相當一部分蔬菜如芹菜、菠菜、蘿卜、白菜等均含有大量的硝酸鹽，人類攝取的硝酸鹽80％以上來自蔬菜,雖然硝酸鹽對人體的直接毒害性不大，但它很容易被還原

20、成為亞硝酸鹽。另外在大白菜、蘿卜等在腌制或浸泡的過程中，所含的硝酸鹽也會逐漸變?yōu)閬喯跛猁}，且隨時間的延長而慢慢增多。</p><p>　　在亞硝酸鹽含量超標的水體中養(yǎng)殖的水產(chǎn)品，均會含有亞硝酸鹽，人們食用此類的水產(chǎn)品，也會將有毒的亞硝酸鹽帶入體內(nèi)。</p><p>　　在人體內(nèi)的亞硝酸鹽導致人患高鐵血紅蛋白癥，更為嚴重的是，亞硝酸鹽還可在人和動物體內(nèi)與攝入的次級胺等含氮物結(jié)合，轉(zhuǎn)化形成公認

21、的強致癌物———亞硝胺，從而誘發(fā)消化系統(tǒng)癌變。</p><p>　　2.2.1.3食品添加劑等其他途徑</p><p>　　亞硝酸鹽作為食品著色劑和防腐劑，允許用于肉及肉制品的生產(chǎn)加工中，被廣泛用于火腿、香腸、咸肉、肉類罐頭等制品中，添加亞硝酸鹽可以抑制肉毒芽孢桿菌，并使肉制品呈現(xiàn)鮮紅色，但是亞硝酸鹽的添加使肉制品中亞硝酸鹽殘留。當人們食用色澤特鮮的肉制品時，亞硝酸鹽也就隨之進入人體內(nèi)。海

22、鹽中也含有少量硝酸鹽和亞硝酸鹽，魚類含有一些胺類物質(zhì)，魚死后就會有很多的胺從蛋白質(zhì)中分解出來，用海鹽腌制咸魚，腌制過程中亞硝酸鹽跟仲胺起反應，生成亞硝胺。人們食用了用海鹽腌制的咸魚時，亞硝胺就會進入人體。</p><p>　　2.2.2亞硝酸鹽中毒機制</p><p>　　亞硝酸鹽是怎樣對人體等生物產(chǎn)生危害呢？</p><p>　　人體血液中運輸氧的物質(zhì)——血紅蛋白

23、是由環(huán)蛋白與亞鐵血紅素結(jié)合成的，是亞鐵離子用5個配位軌道和卟啉環(huán)蛋白質(zhì)結(jié)合而成的混配配合物。亞硝酸鹽在生物體內(nèi)可以破壞金屬配合物的正常狀態(tài)而引起病變。亞硝酸鹽具有氧化性，當亞硝酸鹽進入人體后，能與血紅蛋白中的亞鐵離子發(fā)生氧化還原反應，使低鐵血紅蛋白氧化為高鐵血紅蛋白，從而導致高鐵血紅蛋白喪失攜氧的功能，失去了與氧結(jié)合的的能力。正常人體內(nèi)存在高鐵血紅蛋白還原酶，這種酶可將高鐵血紅蛋白還原為亞鐵血紅蛋白。當進入人體亞硝酸鹽的量不超過高鐵血紅

24、蛋白還原酶的還原能力時，高鐵血紅蛋白還原酶可以將高鐵血紅蛋白還原為亞鐵血紅蛋白，因此導致機體發(fā)生病變；當人體血液內(nèi)的亞硝酸鹽的量超過高鐵血紅蛋白還原酶的還原能力時，使血液中高鐵血紅蛋白的量增加，大量增加的高鐵血紅蛋白使血液失去攜氧功能，造成組織缺氧，使人體表現(xiàn)出亞硝酸鹽中毒的各種癥狀。[9]</p><p>　　2.2.3亞硝酸鹽中毒癥狀 </p><p>　　亞硝酸鹽中毒量為0.2～0

25、.3g，致死量為3g。若誤食純亞硝亞硝酸鹽一般10～15分鐘發(fā)病。[10]中毒的主要表現(xiàn)：一、頭痛、頭暈、無力、胸悶、氣短、心悸、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉及口唇、舌尖、指尖青紫等。 二、全身皮膚及粘膜呈現(xiàn)不同程度青紫色(高鐵血紅蛋白血癥引起的紫紺)。三、嚴重者出現(xiàn)煩躁不安、精神萎靡、反應遲鈍、意識喪失、驚厥、昏迷、呼吸衰竭甚至死亡。[8]</p><p>　　2.2.4預防亞硝酸鹽食物中毒措施</p>

26、<p>　　亞硝酸鹽中毒是指由于食用硝酸鹽或亞硝酸鹽含量較高的腌制肉制品、泡菜及變質(zhì)的蔬菜引起中毒，或者誤將工業(yè)用亞硝酸鈉作為食鹽食用而引起，也可見飲用含有硝酸鹽或亞硝酸鹽苦井水、蒸鍋水后，引起的中毒。</p><p>　　2.2.4.1嚴禁食用腐敗食物。</p><p>　　食物中一般都含有微量硝酸鹽，如存放過久或保管不當，一旦開始腐壞,細菌大量繁殖，可把硝酸鹽轉(zhuǎn)化為亞硝酸鹽

27、，亞硝酸鹽的含量就有明顯的增高，已腐壞變質(zhì)的食物均應不許食用。</p><p>　　2.2.4.2要食用新鮮蔬菜，不吃或少吃腌制的酸菜。</p><p>　　不宜長時間大量吃酸菜，少吃或不吃腌臘制品、酸菜。不吃腌制時間在24小時之內(nèi)的咸菜。咸菜和泡菜也可產(chǎn)生亞硝酸鹽，但產(chǎn)生的高峰出現(xiàn)在腌泡第七天，若隔半個月后食用，則其中的亞硝酸鹽會大大減少。要食用新鮮蔬菜，蔬菜在冰箱不可存放過久，最好現(xiàn)買

28、現(xiàn)吃，對有異味的變質(zhì)蔬菜堅決不吃。[8]</p><p>　　2.2.4.3嚴禁飲用苦井水等含有大量亞硝酸鹽的水</p><p>　　在爐灶上燒了一整夜或放置了1-2天的不冷不熱的溫吞水,自動熱水器中隔夜重煮的開水,經(jīng)過反復煮沸的殘留開水,盛在保溫瓶中已非當天的水,蒸過饅頭、飯、肉等食物的蒸鍋水,有苦味的井水。苦水地區(qū)應進行水質(zhì)處理，必須食用“苦井”水時，應避免用長時間保溫的苦井水來烹煮飯

29、菜。</p><p>　　2.2.4.4多吃一些含維生素C和維生素E豐富的蔬菜、水果以及大蒜、茶葉、食醋等食物。</p><p>　　蔬菜、水果、大蒜、綠茶、胡蘿卜、西紅柿等食物含有豐富的維生素C,多食用可抑制亞硝胺形成，所以多吃新鮮蔬菜、水果對防癌是有好處的。還有研究認為，麥芽、杏仁、胡桃含有較多維生素E，對阻斷致癌物也有好處。</p><p>　　2.2.4.5

30、加強硝酸鹽和亞硝酸鹽的保管，防止誤食。</p><p>　　亞硝酸鹽常用于生產(chǎn)各種染料，也當做防凍劑使用，在實驗室中常用作氧化還原試劑，人們通常稱做“工業(yè)用鹽”。 亞硝酸鹽的外觀和食鹽、堿面、白糖和發(fā)酵粉等很像,亞硝酸鹽和食鹽都有咸味，因此烹調(diào)時誤將亞硝酸鈉當作食鹽使用造成中毒的事件時有發(fā)生。</p><p>　　亞硝酸鹽與我們經(jīng)常用的食用鹽截然不同，應嚴格區(qū)分，問題往往發(fā)生在將兩者混淆上

31、。廣大群眾，特別是廚師和餐廳、食堂管理人員，應具備預防亞硝酸鹽中毒的常識，胡椒和辣椒等調(diào)味品與鹽分開包裝，防止誤食亞硝酸鹽。在使用食鹽前如有懷疑宜用下述的簡易方法加以鑒別：最簡便的一種方法是水驗法，因為亞硝酸鈉溶解時吸收的熱量比食鹽大,而且吸熱速度快。因此，用少量的試樣（大約5克），加入冷水（約250克）中，用手攪拌，水溫急速下降的則是亞硝酸鈉。另一種常用的方法是酸堿度鑒別法：在清水試樣溶液中用PH試紙測溶液的PH,食用鹽PH是中性，亞

32、硝酸鹽的PH堿性。此外，還有高錳酸鉀實驗法及碘化鉀實驗法。</p><p>　　2.2.4.6增強法制觀念，杜絕在食品中摻入含亞硝酸鹽的物質(zhì)。</p><p>　　商家為了防腐和增加色澤，在食品里增添一些防腐劑等，如在咸肉、火腿、香腸、魚、肉制成的成品中添加亞硝酸鹽。肉、魚類制品在加工中，必須使用亞硝酸鹽時，應按規(guī)定在國家允許的范圍和劑量內(nèi)使用。允許的范圍內(nèi)，一般情況下不會影響人體健康，但

33、是如果添加超量或食用過多，對健康不利。一方面肉制品生產(chǎn)者要嚴格管理、控制亞硝酸鹽使用量，另一方面食品監(jiān)督機構(gòu)還提醒廣大消費者，不食色澤異常的肉制品。另外在購買熟肉制品時應盡量購買大型企業(yè)、老字號企業(yè)及通過質(zhì)量體系認證的包裝產(chǎn)品。千萬不要在路邊小販處購買散裝肉制品,千萬不要購買色澤太鮮艷的熟肉制品,以免誤食亞硝酸鹽。</p><p>　　2.3亞硝酸鹽對水水產(chǎn)養(yǎng)殖的影響</p><p>　　

34、水產(chǎn)養(yǎng)殖中亞硝酸鹽超標已是一個世界性的難題，是危害水產(chǎn)健康養(yǎng)殖的關(guān)鍵因素之一。亞硝酸鹽是氮元素的不穩(wěn)態(tài)，是誘發(fā)水產(chǎn)動物暴發(fā)性疾病重要因素。亞硝酸鹽在養(yǎng)殖水體中輕則易引起魚類患病(如敗血癥),重則直接引起魚類中毒死亡(類似泛池)。因為亞硝酸鹽的長期蓄積，使魚、蝦、蟹等養(yǎng)殖動物抗病力降低，亞硝酸鹽進入魚類血液后,可以使魚類血液的攜氧能力下降,促使魚類機體供氧不足,體質(zhì)下降, 招致各種病原菌的侵襲，增加魚類患病機率,并且與正常情況相比,魚類不

35、耐低氧,稍遇天氣變化,就會引起魚類大批死亡。養(yǎng)殖水質(zhì)亞硝酸鹽含量應控制在0.2mg/L以下，根據(jù)各種魚、蝦、蟹的養(yǎng)殖情況，為確保其安全，一般將水中的亞硝酸鹽控制在0.1mg/L以下。但實際養(yǎng)殖中，蝦蟹池亞硝酸鹽濃度常常超過0.3mg/L，引起蝦蟹大量死亡，造成巨大的經(jīng)濟損失。[10]</p><p>　　2.3.1水產(chǎn)養(yǎng)殖中亞硝酸鹽產(chǎn)生的原因</p><p>　　養(yǎng)殖水體中的含氮有機物，如

36、殘余餌料、糞便及動植物殘體等，先通過生物礦化為氨態(tài)氮，氨態(tài)氮在硝化作用下轉(zhuǎn)化為硝酸鹽氮，這是一個耗氧、耗堿度的過程，亞硝態(tài)氮是其中不穩(wěn)定的中間形式，對養(yǎng)殖生物具有很強的毒性。溶氧充足時，經(jīng)硝化作用可轉(zhuǎn)化為無毒的硝態(tài)氮，在缺氧條件下則經(jīng)反硝化作用，又可能轉(zhuǎn)化為毒性更強的氨氮。硝化作用需要耗費大量溶氧，每氧化1克氨氮大約需要4.2克氧。池塘水體，特別是底層水體中氧氣不足，硝化過程受阻，水中亞硝酸鹽含量升高。 [10]引起亞硝酸鹽超標的主要原

37、因有：</p><p>　　2.3.1.1不合理投飼</p><p>　　在飼養(yǎng)的過程中，投喂飼料的質(zhì)量和方法對產(chǎn)生亞硝酸鹽的影響很大。 馴化養(yǎng)魚時，投喂含有蛋白較高的飼料，有些蛋白是魚類無法利用的，這些蛋白被排泄到水中；投喂方法不當，造成魚類吃得過飽，有些飼料來不及消化就排泄到水中；還有些殘餌、飼料直接落入水中，這些在水中的飼料殘餌等會被分解產(chǎn)生大量的氨和有毒物質(zhì)，再經(jīng)過亞硝化細菌和光合

38、細菌的作用很快轉(zhuǎn)化為亞硝酸，亞硝酸與一些金屬離子結(jié)合后形成亞硝酸鹽。</p><p>　　2.3.1.2不合理施肥</p><p>　　在不少養(yǎng)殖地區(qū)，仍然是采用投飼和施肥相結(jié)合的方法養(yǎng)魚，使用的是有機肥和碳酸氫氨等肥料，長期大量使用N肥，這些肥料在水體中會產(chǎn)生大量錢態(tài)氮，氨態(tài)氮在亞硝化細菌的作用下被氧化為亞硝酸氮，進而被硝化細菌氧化為硝酸氮。</p><p>　　

39、2.3.1.3池底淤泥</p><p>　　由于池底養(yǎng)殖密度過大，長時間不清除池底淤泥，加上投喂飼料量也大，很容易造成水底缺氧，通過各種微生物的作用，使含氮有機物分解，產(chǎn)生氨態(tài)氮、亞硝態(tài)氮、硝態(tài)氮等物質(zhì)。[11] [12]</p><p>　　2.3.2亞硝酸鹽對養(yǎng)殖水產(chǎn)危害機理</p><p>　　當水中的亞硝酸鹽濃度積累到0.1毫克/升后，亞硝酸鹽將對水體中養(yǎng)殖

40、的魚、蝦、蟹產(chǎn)生危害，其作用機理主要是：亞硝酸鹽通過水產(chǎn)動物的鰓和體表滲透和吸收，進入血液，與血液中的攜氧蛋白結(jié)合，而使之失去攜帶氧氣的功能，從而表現(xiàn)為缺氧癥狀。 [16]</p><p>　　2.3.3養(yǎng)殖動物的亞硝酸鹽中毒癥狀</p><p>　　亞硝酸鹽濃度增高到一定程度，魚類就會出現(xiàn)厭食的現(xiàn)象。養(yǎng)殖水體中亞硝酸鹽的含量(以氮計)達到0.1一0.5mg/L時，魚類就會產(chǎn)生中毒癥狀:攝

41、食降低，鰓呈紫紅色，呼吸困難，游動緩慢，躁動不安；含量高于0.5mg/L時，中毒癥狀明顯加重，某些器官功能會出現(xiàn)衰竭，嚴重時導致死亡。[14]在亞硝酸鹽含量高的養(yǎng)殖水體中，即使水體中的溶解氧高，水產(chǎn)動物也表現(xiàn)出缺氧、昏迷狀態(tài)，體力衰退，鰓部受損變黑，出現(xiàn)“游塘”、“浮頭”、“偷死”、“冒底”等現(xiàn)象。除此以外，水產(chǎn)動物長時間生活在亞硝酸鹽偏高的水體中，其活力差，攝食量降低，自身免疫力下降，容易感染病原而暴發(fā)疾病。[16]</p>

42、;<p>　　2.3.4降解、防治亞硝酸鹽的方法[11] [18] [19]</p><p>　　水體中亞硝酸鹽的含量過高一直是養(yǎng)殖過程中主要的危害之一，亞硝酸鹽含量過高，會導致水體理化因子和生物系統(tǒng)失去平衡，病害增加，給養(yǎng)殖戶帶來比較慘重的損失，嚴重抑制了水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)量的增長和水產(chǎn)貿(mào)易的發(fā)展。當前還沒有能降解亞硝酸鹽的特效藥，在水產(chǎn)養(yǎng)殖實踐中，一般選擇以下幾種措施緩解和降低亞硝酸鹽的危害。</

43、p><p>　　2.3.4.1物理化學防治</p><p>　　水體中亞硝酸鹽濃度偏高這一問題，目前還沒有能夠降解亞硝酸鹽的特效藥物，在水產(chǎn)養(yǎng)殖實踐中，積累了一些物理和化學方法，如物理吸附法、還原法、氧化法、肥水法、間接控制法等。</p><p>　　物理吸附法，物理吸附法是使用具有高吸附能力的物質(zhì)，如沸石粉、硅膠、活性炭、海泡石等吸附劑，將亞硝酸根吸附在其結(jié)構(gòu)中。這種

44、方法在生產(chǎn)中廣泛使用，許多底改產(chǎn)品均含有吸附劑成分。該法優(yōu)點是作用時間短、成本低，缺點是用量大。</p><p>　　還原法，該方法利用亞硝酸根離子中的氮為中間價態(tài)，具有被還原的特性，將亞硝酸根離子轉(zhuǎn)變?yōu)槎拘暂^小甚至無毒的物質(zhì)。此方法維持時間短，水體亞硝酸鹽容易反彈。</p><p>　　氧化法，亞硝酸根離子中的氮為中間價態(tài)，具有被氧化的特性。當介質(zhì)中的亞硝酸根遇氧化劑時則會改變氮的價態(tài)，

45、發(fā)生得失電子的變化而被氧化。亞硝酸鹽被氧化成無毒或毒性較小的物質(zhì)。此方法的特點是亞硝酸鹽降解率比較低，此外還存在容易反彈的弱點。</p><p>　　肥水法，亞硝酸鹽富含氮肥，是藻類生長繁殖的基本營養(yǎng)。因此，使用單細胞植物生長調(diào)節(jié)劑、光合作用催化劑、微量元素、硅肥等來加快水體藻類生長繁殖速度，能有效降低亞硝酸鹽的濃度。</p><p>　　間接控制法，通過換水、增氧、使用底質(zhì)改良劑、潑灑紅

46、糖、食鹽、硫代硫酸鈉等控制亞硝酸鹽濃度的偏高。</p><p>　　以上方法都沒有從根本上解決問題，僅起到緩解和控制亞硝酸鹽濃度的作用，治標不治本，有些方法不僅作用時間短、成本高、亞硝酸鹽的濃度會反彈、對規(guī)?；?，高密度的養(yǎng)殖不適用，還可能造成一系列的環(huán)境和社會問題。</p><p>　　2.3.4.2微生態(tài)制劑防治</p><p>　　微生態(tài)制劑又稱微生態(tài)調(diào)節(jié)劑、益

47、生素等。它是從天然環(huán)境中篩選出來的微生物菌體經(jīng)培養(yǎng)、繁殖后制成的含有大量有益菌的活菌制劑。微生物有益菌可用來凈化水質(zhì)，還能防治病害，提高飼料的轉(zhuǎn)化率和養(yǎng)殖動物生產(chǎn)性能，明顯減少水產(chǎn)對周邊環(huán)境造成的污染，同時由于具有無毒副作用，無耐藥性、無殘留、生產(chǎn)成本低、生產(chǎn)效果顯著等特點而日益受到重視。我們知道的細菌主要有兩類：硝化菌和反硝化菌，硝化菌能將亞硝酸鹽轉(zhuǎn)化為硝酸鹽，需要在有氧條件下進行；反硝化菌在缺氧條件下將亞硝酸鹽還原成N2或氮氧化合物

48、。目前，人們開始廣泛使用微生物制劑來解決養(yǎng)殖水體中亞硝酸鹽偏高的問題，并取得了一定的效果。</p><p>　　市場上許多降解亞硝酸鹽的產(chǎn)品都標示主要成分為硝化菌和反硝化菌，從理論上說，硝化菌和反硝化菌是可以降低水體中亞硝酸鹽的含量，但是因為它們是化能自養(yǎng)菌，生長繁殖速度慢，要比較長的時間才能繁殖一代，加上菌類保存技術(shù)、投放后到水體成活率高低、水體環(huán)境等各方面影響，造成了硝化菌和反硝化菌降解亞硝酸鹽的效果不是很理

49、想。</p><p>　　2.4亞硝酸鹽檢測方法研究現(xiàn)狀 [20] [21]</p><p>　　2.4.1光譜分析法</p><p>　　光譜分析法主要分為分光光度法和發(fā)光分析法法(包括熒光法,化學發(fā)光法和生物發(fā)光法)，分光光度法是亞硝酸鹽分析中應用最廣泛的，分光光度法能保持長盛不衰的原因很多，主要為 5個方面:①比起其它痕量分析方法來說,分光光度法的精密度和

50、準確度比較高,所以在標樣定值及標準方法中被廣泛采用；②分光光度法比較成熟,可以測定很多的元素(包括離子),測定也比較靈活；③分光光度法有一定的靈敏度和選擇性,比較簡單、快速；④分光光度法不需要大型的儀器設(shè)備,也不需要過多的投資,比較適合我國國情；⑤分光光度法歷史的悠久,普及度廣,有一支龐大的技術(shù)隊伍和雄厚的技術(shù)力量。</p><p>　　在亞硝酸鹽的光譜分析法中以可見分光光度法和紫外分光光度法最常見。</p

51、><p>　　2.4.1.1可見分光光度法</p><p>　　可見光分光光度法測定亞硝酸鹽大多基于亞硝酸根在較低溫度下的重氮-偶合反應和亞硝化反應,在水樣及食品分析中有重要的應用。但這些方法大多要使用有毒有害試劑,不僅危及操作者的身心健康,也會造成二次污染,因而有一定局限性。</p><p>　　2.4.1.2紫外分光光度法</p><p>　

52、　紫外分光光度法主要是利用硝酸鹽和亞硝酸鹽在210nm的紫外區(qū)有較強吸收的特性進行測定。因而可以直接用紫外光度法測定亞硝酸根，也有用堿性品紅紫外光度法測定亞硝酸根的報道,但靈敏度較低(ε=1.2×104),干擾嚴重。一些離子和溶解性有機物對測定干擾較大，且兩種離子無法同時測定。但紫外光度法和化學計量學方法聯(lián)用,在很大程度上解決了譜圖重疊、干擾嚴重等問題,實現(xiàn)了多組分不分離同時測定。</p><p>　　

53、2.4.2色譜分析法</p><p>　　色譜分析法具有良好的分離能力和較高的靈敏度,比較適合于分離分析成分比較復雜樣品。中硝酸鹽和亞硝酸鹽的色譜法主要有高效液相色譜法和離子色譜法。</p><p>　　2.4.2.1高效液相色譜法</p><p>　　利用高效液相色譜法測定蔬菜等食品中的硝酸鹽亞硝酸酸鹽主要是利用流動相(通常是磷酸、磷酸鹽緩液)將樣品中的磷酸鹽和亞

54、硝酸鹽在色譜柱中得到分離，然后用紫外檢測器檢測，因而可以同時測定硝酸鹽和亞硝酸鹽，具有快速、高效、準確的優(yōu)點。與紫外分光光度法想比較，無論是方法的靈敏發(fā)、回收率、線性范圍還是精密度方面，均優(yōu)于紫外分光光度法，而且硝酸鹽和亞硝酸鹽可以同時測定，因此，該方法是蔬菜等食品中硝酸鹽和亞硝酸鹽同時快速測定的理想方法。</p><p>　　2.4.2.2離子色譜法</p><p>　　離子色譜法(IC

55、)是20世紀70年中期發(fā)展起來的一項新的液相色譜技術(shù)，隨著IC理論逐漸成熟，目前IC已成為分析化學中發(fā)展較快的分析方法之一。作為一種新型的色譜分析方法，離子色譜法不僅可以同時測定蔬菜等食品中的硝酸鹽和亞硝酸鹽，還可以根據(jù)不同的研究目的，同時定量測定其他陰離子組分的含量。如氟、氯、甲酸、抗壞血酸、檸檬酸等離子，以滿足同一樣品多陰離子組分的同時定量測定。與比色法相比，離予色譜法具有準確度高、重復性好、簡單、快速、靈敏等優(yōu)點。</p&g

56、t;<p>　　2.4.3電化學分析法</p><p>　　與光度法相比較,電化學法有自身的特點:儀器簡單,操作簡便,分析速度快。用于測定蔬菜等食品中硝酸鹽和亞硝酸鹽的電化學分析方法主要有離子選擇電極法、極譜法和毛細管電泳法等。</p><p>　　離子選擇性電極法是20世紀60年代快速發(fā)展起來的一種分析方法，通過簡單的電位測量，直接測定溶液中某單一離子的離子活度，一般只用于

57、測定蔬菜中的硝酸鹽。</p><p>　　極譜法則是通過亞硝酸鹽重氮偶合后形成的偶氮染料在汞電極上還原產(chǎn)生的電流測定亞硝酸鹽的含量，由于該方法靈敏度較低，因此比較少用于蔬菜樣品中亞硝酸鹽含量的測定。</p><p>　　毛細管電泳法是應用了毛細管分離技術(shù)，使得硝酸根、亞硝酸根離子與其他陰離子分開，從而進行單一物質(zhì)的定量檢測。用毛細管電泳法能有效分離硝酸根和亞硝酸根，但兩者不能同時被檢測。&

58、lt;/p><p><b>　　3 實驗部分</b></p><p><b>　　3.1 原理</b></p><p>　　亞硝酸鹽采用鹽酸萘乙二胺法測定，硝酸鹽采用鎘柱還原法測定。試樣經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪后，在弱酸條件下亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸重氮化后，再與鹽酸萘乙二胺偶合形成紫紅色染料，外標法測得亞硝酸鹽含量。采用鎘柱將硝

59、酸鹽還原成亞硝酸鹽，測得亞硝酸鹽總量，由此總量減去亞硝酸鹽含量，即得試樣中硝酸鹽含量。</p><p><b>　　3.2 試劑和材料</b></p><p>　　3.2.1 亞鐵氰化鉀溶液(106 g/L)：稱取106.0 g 亞鐵氰化鉀（9.1），用水溶解，并稀釋至1000 mL。</p><p>　　3.2.2 乙酸鋅溶液(220 g/L

60、)： 稱取220.0 g 乙酸鋅（9.2），先加30 mL 冰醋酸（9.3）溶解，用水稀釋至1000 mL。</p><p>　　3.2.3 飽和硼砂溶液(50 g/L)： 稱取5.0 g 硼酸鈉（9.4），溶于100 mL 熱水中，冷卻后備用。</p><p>　　3.2.4 氨緩沖溶液（pH 9.6～9.7）：量取30 mL 鹽酸（9.5），加100 mL 水，混勻后加65 mL 氨水

61、（9.6），再加水稀釋至1000 mL，混勻。調(diào)節(jié)pH 至9.6～9.7。</p><p>　　3.2.5 氨緩沖液的稀釋液：量取50 mL 氨緩沖溶液（2.2.4），加水稀釋至500 mL，混勻。</p><p>　　3.2.6 鹽酸(0.1 mol/L)： 量取5 mL 鹽酸，用水稀釋至600 mL。</p><p>　　3.2.7 對氨基苯磺酸溶液（4 g/L

62、）：稱取0.4ｇ對氨基苯磺酸（9.7），溶于100 mL 20 %（V/V）鹽酸中，置棕色瓶中混勻，避光保存。</p><p>　　3.2.8 鹽酸萘乙二胺溶液（2 g/L）：稱取0.2 g 鹽酸萘乙二胺（9.8），溶于100 mL 水中, 混勻后，置棕色瓶中，避光保存。</p><p>　　3.2.9 亞硝酸鈉標準溶液（200 μg /mL）：準確稱取0.1000ｇ于110℃～120℃干

63、燥恒重的亞硝酸鈉，加水溶解移入 500 mL 容量瓶中，加水稀釋至刻度，混勻。</p><p>　　3.2.10 亞硝酸鈉標準使用液（5.0 μg/mL）：臨用前，吸取亞硝酸鈉標準溶液5.00 mL，置于200 mL 容量瓶中，加水稀釋至刻度。</p><p><b>　　3.3 儀器和設(shè)備</b></p><p>　　天平（感量為0.1 mg

64、 和1 mg）；組織搗碎機；超聲波清洗器；恒溫干燥箱；VIS-723N可見分光光度計。</p><p><b>　　3.4 試樣預處理</b></p><p>　　用四分法取水產(chǎn)樣品適量或取全部，用食物粉碎機制成勻漿備用。</p><p><b>　　3.5 提取</b></p><p>　　稱取5

65、ｇ（精確至0.01 g）制成勻漿的試樣（如制備過程中加水，應按加水量折算），置于50 mL燒杯中，加12.5 mL 飽和硼砂溶液（2.2.3），攪拌均勻，以70 ℃左右的水約300 mL 將試樣洗入 500 mL容量瓶中，于沸水浴中加熱 15 min，取出置冷水浴中冷卻，并放置至室溫。</p><p><b>　　3.6 提取液凈化</b></p><p>　　在振蕩

66、上述提取液時加入5 mL 亞鐵氰化鉀溶液（2.2.1）, 搖勻, 再加入 5 mL 乙酸鋅溶液（2.2.2）,以沉淀蛋白質(zhì)。加水至刻度, 搖勻, 放置30 min, 除去上層脂肪, 上清液用濾紙過濾, 棄去初濾液30 mL,濾液備用。</p><p>　　3.7 亞硝酸鹽的測定</p><p>　　3.7.1 亞硝酸鹽標準工作曲線的繪制</p><p>　　吸取0.

67、00 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、2.50 mL 亞硝酸鈉標準使用液（相當于0.0 μｇ、1.0 μｇ、2.0 μｇ、3.0 μｇ、4.0 μｇ、5.0 μｇ、7.5 μｇ、10.0 μｇ、12.5 μｇ亞硝酸鈉），分別置于50 mL 帶塞比色管中。于標準管與試樣管中分別加入2 mL 對氨基苯磺酸溶液（2.2.7），混勻，靜置3 min～5 min

68、后各加入1 mL鹽酸萘乙二胺溶液(2.2.8)，加水至刻度，混勻，靜置15 min，用2 cm 比色杯，以零管調(diào)節(jié)零點，于波長 538 nm、543nm 處測吸光度，繪制標準曲線比較。同時做試劑空白。</p><p>　　表3-1 繪制標準曲線的標樣濃度及其吸光度</p><p>　　Tab. 2-2 mapping the concentration of standard cur

69、ve and absorbance</p><p>　　圖3-1波長在543nm的標準工作曲線</p><p>　　Pig.3-1 curve of work at a wavelength of 543 nm</p><p>　　相關(guān)系數(shù)r方為 0.9994</p><p>　　線性回歸方程為 Y=1.5419X+0.002

70、5</p><p>　　圖3-2波長在538nm的標準工作曲線</p><p>　　Pig.3-2 curve of work at a wavelength of 538 nm</p><p>　　相關(guān)系數(shù)r方為 0.9994</p><p>　　線性回歸方程為 Y=1.5526X+0.0021</p>

71、<p>　　3.7.2 樣品的測定和結(jié)果計算</p><p>　　吸取40.0 mL （2.5）濾液于50 mL 帶塞比色管中，按亞硝酸鹽標準工作曲線的繪制（2.6.1）的步驟一次操作。將檢測的樣品的吸光值帶入標準工作曲線，計算出濾液樣液中亞硝酸鹽的含量濃度。在按下式計算出樣中亞硝酸鹽的含量。</p><p>　　…………………………（1-1）

72、 </p><p><b>　　式中：</b></p><p>　　X1——試樣中亞硝酸鈉的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；</p><p>　　A1——測定用樣液中亞硝酸鈉的質(zhì)量，單位為微克（μg）；</p><p>　　m——試樣質(zhì)量，單位為克（ｇ）；</p><p>　　V1——測定用

73、樣液體積，單位為毫升（mL）；</p><p>　　V0 ——試樣處理液總體積，單位為毫升（mL）。</p><p>　　以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。</p><p>　　表3-2 樣品在波長為543nm處的檢測結(jié)果</p><p>　　Tab. 3-2 determination of nit

74、rate in samples at a wavelength of 543 nm</p><p>　　表3-3 樣品在波長為538nm處的檢測結(jié)果</p><p>　　Tab. 3-3 determination of nitrate in samples at a wavelength of 538 nm</p><p>　　3.8 分析結(jié)果與討論</p&

75、gt;<p>　　3.8.1 標準曲線及其結(jié)果</p><p>　　以亞硝酸鈉標準使用液（5.0 μg/mL）配制濃度為0.00、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.15、0.20、0.25μg/mL的亞硝酸鈉標準工作溶液。用VIS-723N可見分光光度計測定波長在543nm、538nm的吸光值，以吸收值(Y)對亞硝酸鈉的濃度(X)進行線性回歸，得兩處的線性回歸方程分別為Y=1.5

76、542X+0.0075、Y=1.5646X+0.0072，相關(guān)系數(shù)r方分別為0.9996、0.9997。在波長543nm、538nm處，曲線范圍在0～0.25μg/mL內(nèi)亞硝酸鈉含量與吸光度呈良好線性關(guān)系。（圖2-1、圖2-2）</p><p>　　3.8.2 檢出限和精密度</p><p>　　3.8.2.1 檢出限</p><p>　　按著樣品檢測的方法，連續(xù)測

77、定12個空白樣。根據(jù)公式 （其中a是標準曲線的斜率，SD是12次空白樣品的標準偏差）及 計算出設(shè)備檢出限、方法檢出限。結(jié)果見表2-4，稱取5.00g樣品,按2.5-2.7步驟操作，亞硝酸鹽的在543nm、538nm的方法檢出限分別為0.0066mg/kg、0.0063mg/kg。</p><p>　　表3-4 檢出限（n=12）</p><p>　　Tab. 3-4 examinati

78、on limits (n=12)</p><p>　　3.8.2.2 精密度</p><p>　　在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。其結(jié)果如表2-5，兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值與算術(shù)平均值的比值的百分比為0.59～1.00%，均小于10%。</p><p><b>　　表3-5 精密度</b></p

79、><p>　　Tab. 3-5 accuracy</p><p>　　3.8.3 回收率計算</p><p>　　分別稱取魚蝦樣品5.00g左右，加人一定體積的鉛標準溶液(21號、28號加0.015ml的5000ug/mL標準亞硝酸鈉溶液，35號加0.010ml的5000ug/mL標準溶液),按照步驟2.5-2.7處理后，進行樣品檢測和回收率實驗，結(jié)果見表2-6。樣品加

80、標回收率在90.26～107.01%之間。</p><p>　　樣品回收率計算公式：</p><p><b>　　…………（1-2）</b></p><p>　　表3-6 樣品回收率檢測結(jié)果</p><p>　　Tab. 3-6 the results of the actual sample returns-rat

81、io</p><p><b>　　4 小結(jié)</b></p><p>　　水產(chǎn)養(yǎng)殖是發(fā)展最為迅速的行業(yè)之一。隨著我國規(guī)?；?、高密度水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展，魚食料，藥物，肥料的投放，工業(yè)廢水和生活污水的大量排放，養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境遭到嚴重破壞，從而導致養(yǎng)殖病害頻繁發(fā)生。水體中亞硝酸鹽的含量過高是主要危害之一，嚴重抑制了水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)量的增長，殘留在魚體內(nèi)的亞硝酸鹽也影響著人類的健康。

82、本文食品安全國家標準食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的檢測（GB 5009.33—2010）中的分光光度法，對養(yǎng)殖水產(chǎn)品中的亞硝酸鹽進行檢測、分析。用VIS-723N可見分光光度計檢測543nm、538nm兩波長樣品的吸光值，檢測樣品中亞硝酸鹽的含量，進行結(jié)果比較、分析。亞硝酸鹽的在543nm、538nm的方法檢出限分別為0.0066mg/kg、0.0063mg/kg。樣品加標回收率在90.26～107.01%之間，兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值與算

83、術(shù)平均值的比值的百分比為0.59～1.00%，均小于10%。精密度和重現(xiàn)性均能滿足試驗要求。</p><p>　　用該方法檢測出養(yǎng)殖魚蝦樣品中亞硝酸鹽的含量均在0.20～0.85mg/kg之間，根據(jù)食品中污染物限量（GB 2762—2005）規(guī)定的魚類食品中亞硝酸鹽的限量指標為3mg/kg，此次檢測的養(yǎng)殖水產(chǎn)品中的亞硝酸鹽的含量在-0.30～0.93 mg/kg之間，均小于3mg/kg，說明此次檢測的魚蝦樣品均未

84、受到污染。</p><p><b>　　[參 考 文 獻]</b></p><p>　　[1] 何盈,蔡順香,何春梅,羅濤.蔬菜硝酸鹽累積的主要影響因子及其防治對策研究現(xiàn)狀[J]. 福建農(nóng)業(yè)學報，2007，22(01):100-105.</p><p>　　[2] 王鳳英，李文娟.淺談亞硝酸鹽及其危害[J]. 集寧師專學報, 2007,29(0

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