貴陽學(xué)院生物工程專業(yè)本科畢業(yè)論文（設(shè)計）

1、<p>　　本科畢業(yè)論文（設(shè)計）</p><p>　　題 目: 花蓼莖段愈傷組織的誘導(dǎo)以及再生體系</p><p>　　的建立 </p><p>　　院 系：生物與環(huán)境工程學(xué)院 </p><p>　　專 業(yè)：

2、生物工程 </p><p>　　姓 名： </p><p>　　學(xué) 號： </p><p>　　指導(dǎo)教師： </p><p>　　教師職稱： 博士

3、 </p><p>　　填寫日期：2016年4月5 日</p><p><b>　　目 錄</b></p><p>　　頭花蓼莖段愈傷組織的誘導(dǎo)以及再生體系的建立- 3 -</p><p><b>　　摘要- 3 -</b></p>

4、<p>　　ABSTRACT- 3 -</p><p>　　Keywords- 4 -</p><p>　　第一部分 文獻(xiàn)綜述- 4 -</p><p>　　1.1 頭花蓼研究概況- 5 -</p><p>　　1.1.1頭花蓼作為景觀植物的研究- 6 -</p><p>　　1.1.2 頭

5、花蓼的成分分析- 6 -</p><p>　　1.1.3 組織培養(yǎng)- 7 -</p><p>　　1.1.3.1 種子的萌發(fā)和育苗技術(shù)- 7 -</p><p>　　1.1.3.2 組織培養(yǎng)- 7 -</p><p>　　1.1.3.3 再生體系的建立及四倍體誘導(dǎo)- 8 -</p><p>　　1.2

6、 影響頭花蓼組織培養(yǎng)的因素- 8 -</p><p>　　1.2.1　外植體- 8 -</p><p>　　1.2.2 基本培養(yǎng)基- 9 -</p><p>　　1.2.3 激素- 9 -</p><p>　　1.2.4 附加物質(zhì)- 9 -</p><p>　　1.2.5 培養(yǎng)條件因素的影響- 9

7、-</p><p>　　1.2.6實驗過程注意事項- 10 -</p><p>　　1.3 頭花蓼組織培養(yǎng)的意義- 10 -</p><p>　　第二部分 正文- 10 -</p><p>　　2.1 材料和方法- 10 -</p><p>　　2.1.1 實驗材料的獲取- 10 -</p>

8、<p>　　2.1.2 實驗方法- 11 -</p><p>　　2.2 培養(yǎng)條件- 11 -</p><p>　　2.3 培養(yǎng)過程- 11 -</p><p>　　2.3.1 胚芽獲得- 11 -</p><p>　　2.3.2 無菌苗的獲得- 11 -</p><p>　　2.3

9、.3再生植株的獲得- 12 -</p><p>　　2.4 結(jié)果與分析- 12 -</p><p>　　2.5 結(jié)論與討論- 12 -</p><p>　　參考文獻(xiàn)：- 13 -</p><p><b>　　致謝- 15 -</b></p><p>　　頭花蓼莖段愈傷組織的誘導(dǎo)以

10、及再生體系的建立</p><p><b>　　摘 要</b></p><p>　　頭花蓼是貴州少數(shù)民族地區(qū)常用的草藥，具有極大的藥用價值和經(jīng)濟價值。本實驗以頭花蓼無菌莖段為原材料，通過頭花蓼種子在無菌環(huán)境中萌發(fā)出胚芽；胚芽生長成完整植株（無菌苗）；無菌苗莖段獲得再生植株得的過程。目的是減少培養(yǎng)過程，縮短培養(yǎng)時間，提高組培效率。</p><p>

11、;<b>　　實驗結(jié)果：</b></p><p>　?。?）胚芽的獲得：以頭花蓼種子為原料，以MS+2mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+30mg(蔗糖)+9mg(瓊脂)為培養(yǎng)基，誘導(dǎo)胚芽萌發(fā)；</p><p>　　（2）無菌苗的獲得：以（1）中的胚芽為材料，接種到MS培養(yǎng)基中，在光照下培養(yǎng)獲得無菌苗；</p><p>　?。?）再生植

12、株的獲得：以（2）中的無菌苗為材料，剪切下莖段，接種到MS+2mg/L ZT+0.4mg/L NAA+30mg(蔗糖)+9mg(瓊脂)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)獲得再生植株。</p><p>　　關(guān)鍵詞:頭花蓼;胚芽;無菌苗;再生植株。</p><p><b>　　ABSTRACT</b></p><p>　　Polygonum Capitatum is

13、commonly used herbs in Guizhou Minority Areas, has great medicinal value and economic value. In this experiment, the first flower stem section Polygonum sterile raw materials, through the head Polygonum seeds sprout germ

14、 in a sterile environment; germ grow into whole plants (no vaccine); aseptic stem segments obtain regenerated plants was process. The purpose is to reduce the training process and shorten the incubation time, improve the

15、 efficiency of tissue culture.</p><p><b>　　Results:</b></p><p>　　(1) germs obtained: the first flowers Polygonum seeds as raw material, MS + 2mg / L 6-BA + 0.5mg / L NAA + 30mg (suc

16、rose) + 9mg (agar) for the medium to induce embryo germination;</p><p>　　(2) aseptic obtained: in (1) the germ of material inoculated into MS medium, and cultured in the light no vaccine;</p><p>

17、;　　(3) Regeneration Plants: A (2) no vaccine for the material, sheared stem, inoculated into MS + 2mg / L ZT + 0.4mg / L NAA + 30mg (sucrose) + 9mg (agar) on the medium, cultured plant regeneration.</p><p>　

18、　Keywords: Polygonum capitatum; germ; no vaccine; regenerated plants.</p><p><b>　　第一部分 文獻(xiàn)綜述</b></p><p>　　頭花蓼（Polygonum capitatum）是蓼科（Polygonaceae）蓼屬（Polygonum）多年生草本植物，又名四季紅、石莽草、骨蟲草等。

19、頭花蓼生長在海拔600-3500米的地區(qū)，在我國主要分布在江西、湖南、湖北、四川、貴州、廣東、廣西、云南及西藏等地；在國外主要分布在尼泊爾、不丹、印度、錫金、緬甸和越南等地。頭花蓼喜歡生長在陰暗濕潤的環(huán)境中，常生在草甸石上，常綠闊葉林中， 常綠林中， 稻田邊， 干旱山坡， 干旱田中， 耕地， 溝渠邊， 河邊， 荒地，樹 林中， 路邊，墻邊， 沙灘， 山谷，石縫中。頭花蓼根系發(fā)達(dá)，莖匍匐?yún)采?，葉片略帶紅色，有大量腺毛；葉面上還有

20、有黑褐色新月形斑點；花期長（1-12月），花球紅色或粉紅色，成片生長時具有良好的景觀效果，因此可作為一種園林觀賞植物。頭花蓼全草均可入藥，具有清熱、涼血、利尿、止痢的功能；主要治療膀胱炎、腎孟腎炎、痢疾等季疾病。頭花蓼是貴州苗族地區(qū)常用的草藥，也是貴州著重發(fā)展的“六大苗藥”之一。貴州威門藥業(yè)股份有限公司以頭花蓼為原料生產(chǎn)“熱淋清”顆粒，該顆粒對泌尿系統(tǒng)疾病有獨特療效、服用方便且無毒無副作用等特點，深受東南亞地區(qū)人</p>

21、<p>　　隨著藥材市場需求量的不斷增加和頭花蓼人工種植面積的不斷擴大，掀起了科學(xué)實驗者們對頭花蓼研究的熱潮，頭花蓼的研究正在進(jìn)入一個全新的時代。研究的內(nèi)容有：研究頭花蓼種子種植技術(shù)，頭花蓼化學(xué)成分分析，藥用成分研究，莖尖快速繁育，還有頭花蓼莖段組織培養(yǎng)技術(shù)，但是關(guān)于頭花蓼無菌苗莖段研究的很少。因此，本實驗在無菌環(huán)境下，通過頭花蓼種子消毒滅菌后在光照培養(yǎng)箱中萌發(fā)出胚芽；胚芽生長成完整植株（無菌苗）；無菌苗莖段培養(yǎng)獲得再生植株的

22、過程，建立了頭花蓼莖段的再生體系。</p><p>　　1.1 頭花蓼研究概況</p><p>　　從德國植物學(xué)家G．Haberlandt 19世紀(jì)初提出植物細(xì)胞組織培養(yǎng)的設(shè)想到現(xiàn)在，通過長期的科學(xué)研究，植物細(xì)胞的全能性和器管分化、體細(xì)胞胚胎發(fā)育的激素調(diào)節(jié)得到了證實；植物組織培養(yǎng)技術(shù)也有了迅速發(fā)展。組織培養(yǎng)技術(shù)的廣泛運用使得植物繁育體系發(fā)生了很大的改變。組織培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)成為了人們獲得理想

23、植株最常用的方法之一。組織培養(yǎng)技術(shù)可以得到和母本性狀保持一致的子代，這在果樹培育、瀕危植物的延續(xù)方面已經(jīng)得到運用；新品種的開發(fā)，也離不開組織培養(yǎng)，例如無籽西瓜。</p><p>　　頭花蓼是1959年在銅礦區(qū)發(fā)現(xiàn)的生長旺盛的優(yōu)勢草本植物[1]；1999年，《貴陽中藥現(xiàn)代化科技產(chǎn)業(yè)實施方案》頒布以后[2]，為頭花蓼的深入研究提供了條件。以頭花蓼為原料生產(chǎn)的熱淋清藥物開始用于尿道炎治療，療效顯著[3]；其后，頭花蓼的

24、研究主要在頭花蓼的藥用成分分析以及熱淋清藥物治療泌尿系統(tǒng)疾病方面[4-6]；直到2005年，才有了關(guān)于頭花蓼種子繁育的報道[7]；在之后的10年中，頭花蓼的研究的不斷的發(fā)展深入到各個方向：</p><p>　　1.1.1頭花蓼作為景觀植物的研究</p><p>　　頭花蓼葉面上還有有黑褐色新月形斑點，花期長，花球紅色或粉紅色，成片生長時具有良好的景觀效果，因此可作為一種園林觀賞植物[8]。

25、2014年，劉艷麗，付飛躍和王海洋三人以頭花蓼為研究對象，通過屋頂種植槽,設(shè)置實生苗幼苗期3種不同水分及成苗期6種不同水肥處理,對比分析其適應(yīng)性,探討景觀價值.結(jié)果表明:幼苗期,頭花蓼在900mL的澆水量下,生長最佳,經(jīng)歷30d,葉片大小穩(wěn)定;成苗期,頭花蓼在澆水1 600mL施氮肥處理下,生長最佳;頭花蓼植株80d成坪,種群平均蓋度為91%,花期持續(xù)時間為240d,可作為屋頂綠化地被材料[9];韋美玉和趙洪對野生頭花蓼形成的景觀效果進(jìn)

26、行研究，發(fā)現(xiàn)它的莖、葉、芽、花等具有較高的觀賞價值,可作為花卉開發(fā)利用[10]。</p><p>　　1.1.2 頭花蓼的成分分析</p><p>　　2000年，李勇軍，王永林，胡昌奇等人對頭花蓼的黃酮類物質(zhì)進(jìn)行研究，首次在頭花蓼中分離出了槲皮素、槲皮苷、陸地棉苷和槲皮素-3-O-(2″ 沒食子?；?-鼠李糖苷[11]；許乾麗對頭花蓼和頭花蓼制劑進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)了主要有效活性成分是沒食子

27、酸[12]；2003年，張麗艷、楊玉琴和高言明等人對不同產(chǎn)地、不同季節(jié)頭花蓼的黃酮含量進(jìn)行測定，結(jié)果顯示不同采收期的的頭花蓼中總黃酮含量差異明顯，在8月和9月含量最高[13]；2005年，趙德剛、劉世會和高玉瓊等人對頭花蓼揮發(fā)性成分研究，分離出88個成分,確定了51個化合物,占揮發(fā)油總量的73.10%[14]；趙葉，張開霞，劉軍等人對頭花蓼水提取物化學(xué)成分進(jìn)行研究，結(jié)果分離鑒定了15個化合物,分別為龍膽酸、原兒茶酸、沒食子酸甲酯、木犀草

28、素、兒茶素、水飛薊賓、大豆苷、楊梅苷、蘆丁、槲皮素、槲皮苷、五味子苷、山柰酚、尿嘧啶、苯丙氨酸。其中龍膽酸、沒食子酸甲酯、木犀草素、大豆苷、尿嘧啶、苯丙氨酸為首次從頭花蓼中分離得到[15]。</p><p>　　1.1.3 組織培養(yǎng)</p><p>　　1.1.3.1 種子的萌發(fā)和育苗技術(shù)</p><p>　　2003年，貴州省啟動中藥現(xiàn)代化產(chǎn)業(yè)種植基地、200

29、4年貴州全力打造中國藥谷的期刊發(fā)布以及貴州威門藥業(yè)生產(chǎn)的熱淋清藥物在治療泌尿系統(tǒng)疾病取得的良好效果[16-18]，推動了貴州省頭花蓼的現(xiàn)代化、產(chǎn)業(yè)化發(fā)展，同時也加快了科研人員對頭花蓼快速繁殖研究的步伐。2006年，王新村和孫長生等人通過對影響頭花蓼種子育苗的因素（育苗基質(zhì)、覆土厚度、播種方法、播種后保溫保濕措施等）進(jìn)行系列試驗研究,提出了頭花蓼種子育苗的可行方法,并研究制訂了種苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[19]；呂小梨、趙 致、王華磊對頭花蓼種子發(fā)芽條

30、件(溫度、鹽脅迫和培養(yǎng)方式)的研究，得出在種子15攝氏度時發(fā)芽率最高，在同一溫度條件下光培養(yǎng)比暗培養(yǎng)發(fā)芽率高,紙間比紙上發(fā)芽率高的結(jié)論[20]；孫長生，韓見宇，魏升華等人也對頭花蓼種子育苗技術(shù)做了進(jìn)一步研究[21]。</p><p>　　1.1.3.2 組織培養(yǎng)</p><p>　　繼頭花蓼種子育苗技術(shù)研究之后，為了滿足頭花蓼產(chǎn)業(yè)化種植的需要，科研人員的研究也進(jìn)一步深入到頭花蓼的組織培養(yǎng)

31、和快速繁育方面。2006年，龍祥友和孫長生以頭花蓼莖尖為實驗材料，以MS為基本培養(yǎng)基，以6-BA和NAA作為生長調(diào)節(jié)劑，通過叢芽誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖誘導(dǎo)培養(yǎng)、生根誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得苗根[22]；毛堂芬和朱英以當(dāng)年新生的植株的中部莖段為外植體，在超凈臺上，先用75%的酒精消毒10-20秒，再用0.1%的升汞消毒4-5分鐘，無菌水沖洗4-5次后，然后切小段極性接種在不同濃度培養(yǎng)基（MS、1/2MS、6-BA和B5）上，通過繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)獲得幼苗[2

32、3]；馬鮮，趙德剛，楊琴和蘇蓮等人報道了不同方法對頭花蓼組織培養(yǎng)實驗材料消毒效果的影響[24]；</p><p>　　1.1.3.3 再生體系的建立及四倍體誘導(dǎo)</p><p>　　劉世會，龍鳳榮，趙德剛等人以頭花蓼無菌苗頂芽為外植體,MS為基本培養(yǎng)基,通過頂芽直接誘導(dǎo)叢生芽、叢芽增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、移栽煉苗,以建立頭花蓼組培快速繁育體系。結(jié)果表明:頭花蓼叢生芽誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)基為MS+6

33、-BA2.0 mg/L+NAA 0.10mg/L+30g蔗糖/L+9g瓊脂/L；最佳芽增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0 mg/L+NAA0.05 mg/L+30g蔗糖/L+9g瓊脂/L；組培苗生根的最佳培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.10 mg/L+30g蔗糖/L+9g瓊脂/L；在腐殖土中,幼苗移栽成活率達(dá)100%,植株生長良好[25]。郭彪在研究頭花蓼再生體系的建立及四倍體誘導(dǎo)的實驗中，通過不同的消毒方法、更換培養(yǎng)基種類、添加活性炭、

34、添加不同植物生長調(diào)節(jié)劑等方法對頭花蓼的葉片和莖段進(jìn)行處理，并利用秋水仙素誘變頭花蓼的不同器官獲取純合的四倍體，然后進(jìn)行四倍體及二倍體的形態(tài)學(xué)、細(xì)胞學(xué)及抗逆性等特性進(jìn)行分析比較,為頭花蓼育種的研究提供了基礎(chǔ)性資料。研究結(jié)果如下：1消毒、葉片用70%的酒精消毒10秒，無菌水洗3-4次后用0.15%的升汞消毒6分鐘；莖段用10%的升汞消毒毒9分鐘效果最好。</p><p>　　1.2 影響頭花蓼組織培養(yǎng)的因素<

35、/p><p><b>　　1.2.1　外植體</b></p><p>　　外植體選擇是頭花蓼的組織培養(yǎng)的第一步，也是最重要的一步。外植體的選擇直接影響之后的實驗。頭花蓼在組培中用得最多的外植體是頂芽、莖段、葉片和莖尖。不同的外植體愈傷組織的發(fā)生率、植株的再生性都有著很大的差異。劉世會，趙德剛等人的研究表明：最佳的叢芽在MS+2.0 mg/L 6-BA +0.10 mg/L

36、 NAA下的誘導(dǎo)增值倍數(shù)是7.1倍，在MS+2.0 mg/L 6-BA +0.05 mg/L NAA的誘導(dǎo)下芽的增殖倍數(shù)是10倍；頭花蓼的莖段作為實驗的主要材料是因為其表面的纖毛很少，沒有氣孔，所攜帶的雜菌少；莖尖是作為實驗的材料是因為它分生能力強，能很快長出愈傷組織或新的植株；葉片的使用是因為其量多，最易獲得，但也存在著雜菌多，分化能力弱的特點。</p><p>　　1.2.2 基本培養(yǎng)基　</p>

37、;<p>　　植物組織培養(yǎng)常用的基本培養(yǎng)基有MS和1/2MS, 也有使用N6、MT、B5等其他培養(yǎng)基的，頭花蓼組織培養(yǎng)主要使用的培養(yǎng)基是MS，瓊脂使用的濃度為9g/L,蔗糖濃度為30g/L, 頭花蓼組織培養(yǎng)中使用的是固體培養(yǎng)基，不用液體培養(yǎng)基，pH值5.80-6.0之間。</p><p>　　1.2.3 激素　</p><p>　　植物組織培養(yǎng)成功的關(guān)鍵是激素的種類和比例

38、，生長素，赤霉素，細(xì)胞分裂素，脫落酸和乙烯等五大類基本植物激素是實驗常用的激素。一般認(rèn)為，生長素和細(xì)胞分裂素很重要，不同濃度的配比決定著實驗的走向。低濃度2.4-D有利于胚狀體的分化，NAA有利于單子葉植物分化，IBA誘導(dǎo)生根效果最好。普遍認(rèn)為細(xì)胞分裂素對頭花蓼愈傷組織分化和芽分化誘導(dǎo)是必需的。</p><p>　　在已知的所有文獻(xiàn)中，6-BA是頭花蓼組織培養(yǎng)中用于芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)和芽的增殖培養(yǎng)效果最好的生長調(diào)節(jié)劑。

39、毛堂芬和朱英的研究表明：添加4.0mg/L的6-BA時芽的增殖倍數(shù)達(dá)最高4.2，且植株生快，長勢旺盛，有利于組培苗的大量繁殖，6-BA和NAA之間具有協(xié)同作用。</p><p>　　1.2.4 附加物質(zhì)</p><p>　　頭花蓼組織培養(yǎng)中使用的附加物質(zhì)很多,有機成分為肌醇、甘氨酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、煙酸或VPP，使用濃度一般比較低，為（0.1-100mg/L）。生根誘導(dǎo)中也會使用的

40、活性碳之類的物質(zhì),但是這些物質(zhì)成份復(fù)雜和具有不確定性，因此常用在研究上。 </p><p>　　1.2.5 培養(yǎng)條件因素的影響　</p><p>　　溫度、光照時間、光強和濕度對頭花蓼組培都有一定影響。頭花蓼組織培養(yǎng)條件一般的要求是:溫度24-27℃,光照強度1 500～3 500 lx，光照時間12小時/天，濕度為70%-85%。</p><p>　　1.2.6實

41、驗過程注意事項</p><p>　　為了減少材料因操作不當(dāng)而染菌，實驗過程應(yīng)注意以下問題：</p><p>　　1）、實驗材料現(xiàn)取現(xiàn)用，不能放置太長時間。</p><p>　　2）培養(yǎng)基應(yīng)在接種前配好，冷卻凝固。</p><p>　　3）材料消毒洗凈后用濾紙吸干水分，盡快接種。</p><p>　　4）接種過程中要經(jīng)常

42、用75%的酒精擦手和超凈臺桌面。</p><p>　　5）鑷子、剪刀在使用時最好只用一次，然后滅菌。</p><p>　　6)材料剪好之后立即接種。</p><p>　　7）材料接種后用封口膜封好。</p><p>　　1.3 頭花蓼組織培養(yǎng)的意義</p><p>　　隨著社會的需求面的不斷擴大和人們保健意識的不斷增

43、強，無毒無副作用且治療效果顯著的藥物已經(jīng)是人們?nèi)粘Ｉ钪杏盟幍氖走x。隨著頭花蓼為原料生產(chǎn)的“熱淋清”顆粒對泌尿系統(tǒng)疾病的療效不斷增強、再加上服用方便且無毒無副作用，熱淋清顆粒受到廣大人民的歡迎，所以每年貴州省威門藥業(yè)股份有限公司需要上百噸頭花蓼用于生產(chǎn)“熱淋清”顆粒[27]。為了滿足藥材市場對頭花蓼每年不斷增長的需求，人們已經(jīng)開始人工規(guī)范化、產(chǎn)業(yè)化種植頭花蓼，但這都需要科學(xué)技術(shù)的支撐。</p><p>　　為了給

44、頭花蓼的快速繁育和再生體系的建立提供參考，本實驗以頭花蓼（無菌苗）莖段為實驗材料，通過組織培養(yǎng)，直接獲再生植株，減少愈傷組織增殖培養(yǎng)和誘導(dǎo)愈傷生根、生芽環(huán)節(jié)，目的是縮短組織培養(yǎng)時間，提高組培效率。</p><p><b>　　第二部分 正文</b></p><p>　　2.1 材料和方法</p><p>　　2.1.1 實驗材料的獲取<

45、;/p><p>　　頭花蓼的種子用自來水浸泡24小時后，在超凈臺上，先用75%的酒精消毒50秒后，無菌水洗3-4次，然后用0.1%的升汞消毒10分鐘，無菌水洗3-4次，最后接種到MS+2mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+30mg(蔗糖)+9mg(瓊脂)的培養(yǎng)基上，放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至露出胚芽，將胚芽轉(zhuǎn)接到MS培養(yǎng)基中，放在光下培養(yǎng)成無菌苗，剪切下無菌苗的莖段作為實驗材料。</p><p

46、>　　2.1.2 實驗方法</p><p>　　將剪切下的頭花蓼無菌苗莖段（長度約0.5-1CM）（超凈臺中）接到MS+2mg/L ZT+0.4mg/L NAA+30mg(蔗糖)+9mg(瓊脂) 和MS+2mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+30mg(蔗糖)+9mg(瓊脂)培養(yǎng)基中，在光照培養(yǎng)箱培養(yǎng)。 </p><p><b>　　2.2 培養(yǎng)條件</b&

47、gt;</p><p>　　培養(yǎng)條件：溫度25士2℃，光照時間(光照/黑暗)12h/12h，光照強度？？。</p><p>　　培養(yǎng)基條件：pH 5.85—5.88，121℃滅菌20min ，MS加蔗糖30 g/L、瓊脂9 g/L。</p><p>　　植物激素: 6-BA, NAA，ZT。</p><p><b>　　2.3

48、培養(yǎng)過程</b></p><p>　　2.3.1 胚芽獲得</p><p>　　將頭花蓼種子放在大燒杯（1000ml）中，用自來水浸泡24小時，去除懸浮在水面上的種子，將沉在燒杯底的種子倒入小燒杯（50ml）。在超凈臺上，先用75%的酒精消毒50秒后，無菌水洗3-4次，然后用0.1%的升汞消毒10分鐘，無菌水洗3-4次，最后接到事先準(zhǔn)備好的MS+2mg/L 6-BA+0.5m

49、g/L NAA+30mg(蔗糖)+9mg(瓊脂)培養(yǎng)基上，放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至露出胚芽。</p><p>　　2.3.2 無菌苗的獲得</p><p>　　在超凈臺上，將培養(yǎng)獲得的胚芽接種到預(yù)先準(zhǔn)備好的MS+30mg(蔗糖)+9mg(瓊脂)培養(yǎng)基中，然后放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至長出完整植株（即無菌苗）。</p><p>　　2.3.3再生植株的獲得</p&

50、gt;<p>　　將無菌苗的莖段剪切成(0.5-1CM),分別接種到MS+2mg/L ZT+0.4mg/L NAA+30mg(蔗糖)+9mg(瓊脂)的培養(yǎng)基和MS+2mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+30mg(蔗糖)+9mg(瓊脂)培養(yǎng)基上，觀察莖段的生長情況。接種在添加ZT和NAA培養(yǎng)基的莖段形成了再生植株，而在添加6-BA和NAA培養(yǎng)基的莖段沒有形成再生植株，只形成了愈傷組織。</p><

51、p>　　2.4 結(jié)果與分析</p><p>　　本實驗將頭花蓼無菌苗莖段接種在添加不同植物激素的培養(yǎng)基中，第一組為MS+2mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+30mg(蔗糖)+9mg(瓊脂)；第二組為MS+2mg/L ZT+0.4mg/L NAA+30mg(蔗糖)+9mg(瓊脂)。接種在第一組的無菌苗莖段，在光照培養(yǎng)箱中（培養(yǎng)條件：溫度25士2℃，光照時間(光照/黑暗)12h/12h。）經(jīng)過50

52、天的培養(yǎng)，長出了再生植株（中途沒有更換培養(yǎng)基。）。第二組在光照培養(yǎng)箱中（培養(yǎng)條件：溫度25士2℃，光照時間(光照/黑暗)12h/12h。）經(jīng)過50天的培養(yǎng)，沒有長出再生植株。</p><p>　　由此可以看出，頭花蓼的組織培養(yǎng)在原有固定步驟上，也可以通過一步培養(yǎng)獲得再生植株，不用經(jīng)過增殖培養(yǎng)和誘導(dǎo)生根、生芽步驟，由此可簡化組培步驟。</p><p>　　2.5 結(jié)論與討論</p&

53、gt;<p>　　組織培養(yǎng)是植物無性繁殖最常用的方法，它利用植物組織或器官在離體條件再生獲得新植株，以此獲取和母本一樣的理想植株，為種植提供優(yōu)質(zhì)、適應(yīng)力強和快速繁殖的物種。植物生長調(diào)節(jié)劑在植物組織培養(yǎng)中起著至關(guān)重要的作用。組織培養(yǎng)中細(xì)胞分裂素和生長素有著協(xié)同作用，植物愈傷組織的形成、脫分化、再分化都受到細(xì)胞分裂素和生長素濃度比的影響。</p><p>　　頭花蓼莖段的組織培養(yǎng)，相同的實驗材料通過添加

54、不同植物生長調(diào)節(jié)激素，可以得出：添加2mg/L ZT和0.4mg/L NAA，頭花蓼莖段愈傷組織形成，脫分化和再分化都能一次完成，中途不需要更換增殖培養(yǎng)基、誘導(dǎo)生根和生芽培養(yǎng)基，這樣可以大大縮短頭花蓼培養(yǎng)的時間，簡化頭花蓼組織培養(yǎng)步驟，為頭花蓼的快速繁育提供參考。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)：</b></p><p>　　[1]寧德銘，徐奇元，王大寧，李家英

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64、在短暫而又充實的本科畢業(yè)論文實驗中，xx給予我的不僅僅是學(xué)習(xí)、實驗上的耐心指導(dǎo)，還有有提供給我很多鍛煉的機會，培養(yǎng)了我獨立分析問題和解決問題的能力，更重要德爾是教會了我許多做人的道理。在此，謹(jǐn)向xxx致以最崇高的敬意和最誠摯的謝意!</p><p>　　在論文完成的過程中，xxx一直都給予極大的支持和幫助，在實驗中傾注了大量的心血并在資料的收集方面提供了熱心的幫助和指導(dǎo)，同時xxxx也給予了很多真誠的幫助，不勝感