人基質(zhì)金屬蛋白酶-2mmp-2酶聯(lián)免疫分析

1、<p>　　人基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）酶聯(lián)免疫分析</p><p><b>　　試劑盒使用說明書</b></p><p>　　本試劑盒僅供研究使用。</p><p><b>　　檢測范圍：</b></p><p><b>　　96T</b></p>

2、<p>　　20μg/L -480μg/L</p><p><b>　　使用目的：</b></p><p>　　本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）含量。</p><p><b>　　實驗原理</b></p><p>　　本試劑盒應用雙抗體夾心法

3、測定標本中人基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）水平。用純化的</p><p>　　人基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次</p><p>　　加入 MMP-2，再與 HRP標記的 MMP-2抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過</p><p>　　徹底洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在 HRP酶的催化下

4、轉化成藍色，并在酸的作用下轉化</p><p>　　成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）呈正相關。用酶標儀在</p><p>　　450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）</p><p><b>　　濃度。</b></p><p><

5、;b>　　試劑盒組成</b></p><p><b>　　1</b></p><p><b>　　2</b></p><p><b>　　3</b></p><p><b>　　4</b></p><p><

6、b>　　5</b></p><p><b>　　6</b></p><p><b>　　30倍濃縮洗滌液</b></p><p><b>　　酶標試劑</b></p><p><b>　　20ml×1瓶</b></p>

7、;<p><b>　　6ml×1瓶</b></p><p><b>　　12孔×8條</b></p><p><b>　　6ml×1瓶</b></p><p><b>　　6ml×1瓶</b></p><p

8、><b>　　6ml×1/瓶</b></p><p><b>　　7</b></p><p><b>　　8</b></p><p><b>　　終止液</b></p><p><b>　　6ml×1瓶</b>

9、;</p><p><b>　　0.5ml×1瓶</b></p><p><b>　　1.5ml×1瓶</b></p><p><b>　　1份</b></p><p>　　標準品（960μg/L）</p><p><b>

10、　　標準品稀釋液</b></p><p><b>　　說明書</b></p><p><b>　　酶標包被板</b></p><p><b>　　樣品稀釋液</b></p><p><b>　　顯色劑 A液</b></p><

11、;p><b>　　顯色劑 B液</b></p><p><b>　　9</b></p><p><b>　　10</b></p><p><b>　　11</b></p><p><b>　　12</b></p>

12、<p><b>　　封板膜</b></p><p><b>　　2張</b></p><p><b>　　密封袋</b></p><p><b>　　1個</b></p><p><b>　　標本要求</b></p&g

13、t;<p>　　1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能</p><p>　　馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融</p><p>　　2．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。</p><p><b>　　操作步驟</b></p

14、><p><b>　　1.</b></p><p>　　標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀</p><p><b>　　釋。</b></p><p><b>　　480μg/L</b></p><p><b&g

15、t;　　240μg/L</b></p><p><b>　　120μg/L</b></p><p><b>　　60μg/L</b></p><p><b>　　5號標準品</b></p><p><b>　　4號標準品</b></p&g

16、t;<p><b>　　3號標準品</b></p><p><b>　　2號標準品</b></p><p><b>　　1號標準品</b></p><p>　　150μl的原倍標準品加入 150μl標準品稀釋液</p><p>　　150μl的 5號標準品加入

17、 150μl標準品稀釋液</p><p>　　150μl的 4號標準品加入 150μl標準品稀釋液</p><p>　　150μl的 3號標準品加入 150μl標準品稀釋液</p><p>　　150μl的 2號標準品加入 150μl標準品稀釋液</p><p><b>　　30μg/L</b></p

18、><p><b>　　2.</b></p><p>　　加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、</p><p>　　待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，</p><p>　　然后再加待測樣品 10μl（樣品最終稀釋度為 5倍）。加樣

19、將樣品加于酶標板孔底部，盡</p><p>　　量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。</p><p><b>　　3.</b></p><p><b>　　4.</b></p><p><b>　　5.</b></p><p>　　溫育：用封板膜封板后置 37℃

20、溫育30分鐘。</p><p>　　配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用</p><p>　　洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此</p><p><b>　　重復 5次，拍干。</b></p><p><b>　　6.</b></p

21、><p><b>　　7.</b></p><p><b>　　8.</b></p><p><b>　　9.</b></p><p>　　加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外。</p><p><b>　　溫育：操作同 3。</b&

22、gt;</p><p><b>　　洗滌：操作同 5。</b></p><p>　　顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色</p><p><b>　　15分鐘.</b></p><p>　　10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應（此時

23、藍色立轉黃色）。</p><p>　　11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止</p><p>　　液后 15分鐘以內(nèi)進行。</p><p><b>　　操作程序總結：</b></p><p><b>　　計算</b></p><p

24、>　　以標準物的濃度為橫坐標， OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的</p><p>　　OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與 OD值計算出標</p><p>　　準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，</p><p>　　即為樣品的實際濃度。</p>&

25、lt;p><b>　　注意事項</b></p><p>　　1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未</p><p>　　用完，板條應裝入密封袋中保存。</p><p>　　2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。</p><p>　　

26、3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好</p><p>　　控制在 5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。</p><p>　　4．請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD值</p><p>　　大于標準品孔第一孔的 OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計<

27、/p><p>　　算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。</p><p>　　5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。</p><p>　　6．底物請避光保存。</p><p>　　7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.</p><p>　　8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都

28、應按傳染物處理。</p><p>　　9．本試劑不同批號組分不得混用。</p><p>　　10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。</p><p><b>　　保存條件及有效期</b></p><p>　　1．試劑盒保存：；2-8℃。</p><p><b>　　2．有效期：6個月