肝素酶、基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-14、鈣粘蛋白與胃癌生物學(xué)行為關(guān)系的研究.pdf

1、腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤最重要也是最本質(zhì)的生物學(xué)特征，是引起惡性腫瘤患者預(yù)后不良和死亡的主要原因。目前，胃癌仍是我國乃至全世界發(fā)病率和死亡率很高的惡性腫瘤。胃癌早期沒有特異性的癥狀，大多數(shù)患者就診時已到晚期，而晚期胃癌預(yù)后很差，患者常常因?yàn)閺V泛的侵襲轉(zhuǎn)移而死亡。因此，對胃癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)免疫分子和基因的研究，可以為胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的早期診斷和靶向治療提供幫助和依據(jù)。胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移在本質(zhì)上是一個多步驟的復(fù)雜事件，包含下列幾個主要過程(1)腫瘤細(xì)胞

2、與正常細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)的粘附改變(2)細(xì)胞外基質(zhì)降解增加(3)腫瘤細(xì)胞的遷移(4)新生血管形成(5)癌細(xì)胞逃避宿主免疫監(jiān)視得以生存增殖。但目前胃癌侵襲轉(zhuǎn)移分子機(jī)制尚未明確，尋找及研究胃癌侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)基因及其產(chǎn)物的表達(dá)變化和功能，對早期診斷、指導(dǎo)治療、評價預(yù)后具有重要的臨床意義。本文就肝素酶、基質(zhì)金屬蛋白酶MMP—2、MMP—14、鈣粘蛋白在胃癌組織及胃周正常粘膜的表達(dá)進(jìn)行了研究，并就肝素酶、基質(zhì)金屬蛋白酶MMP—2、MMP—14、鈣粘蛋

3、白與胃癌的生物學(xué)行為進(jìn)行了統(tǒng)計學(xué)分析，以期了解肝素酶、基質(zhì)金屬蛋白酶MMP—2、MMP—14、鈣粘蛋白作為胃癌復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移的臨床篩選指標(biāo)的可能性。 實(shí)驗(yàn)方法： 1、收集2007年中國醫(yī)科大學(xué)附屬一院胃癌手術(shù)標(biāo)本及病理石蠟塊。67例胃癌組織及癌旁正常胃組織取自中國醫(yī)科大學(xué)附屬一院腫瘤科2007年4月—2007年8月間手術(shù)切除的新鮮標(biāo)本。每例分別取胃癌組織及癌旁正常胃組織(距癌緣5cm以上)各一塊，—80℃冰箱保存。

4、2、免疫組織化學(xué)方法檢測肝素酶、基質(zhì)金屬蛋白酶MMP—2、MMP—14、鈣粘蛋白在胃癌及胃周正常粘膜的表達(dá)。 3、Western blot方法檢測肝素酶、基質(zhì)金屬蛋白酶MMP—2、MMP—14、鈣粘蛋白在胃癌及胃周正常粘膜的表達(dá)。 4、RT-PCR方法檢測肝素酶、基質(zhì)金屬蛋白酶MMP—2、MMP—14、鈣粘蛋白基因在胃癌及胃周正常粘膜的表達(dá)。 5、統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包，采用卡方檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)和s

5、pearman等級相關(guān)分析方法，P<0.05定為統(tǒng)計學(xué)上有顯著性差異。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1、肝素酶在胃癌組織中的表達(dá)增高。免疫組化結(jié)果顯示，肝素酶蛋白在胃癌組織中的表達(dá)率為76.1％，在正常胃黏膜也有20.9％的表達(dá)率，二者有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。Western blot實(shí)驗(yàn)顯示，肝素酶蛋白在胃癌組織及癌旁正常胃組織中的表達(dá)率分別是77.6％及23.9％(P<0.05)。在兩者中的表達(dá)平均指數(shù)分別為0.915±0.12

6、4和0.665±0，095(P<0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示，肝素酶mRNA在胃癌組織及癌旁正常胃組織中的表達(dá)率分別是74.6％及31.3％(P<0.05)。在兩者中的表達(dá)平均指數(shù)分別為0.399±0.054和0.141±0.035(P<0.05)。肝素酶蛋白及mRNA的表達(dá)與胃癌的大體類型，浸潤深度，細(xì)胞分化程度，組織學(xué)生長方式，淋巴轉(zhuǎn)移及TNM分期呈正相關(guān)，而與腫瘤大小無關(guān)。 2、免疫組化結(jié)果顯示，基質(zhì)金屬蛋白酶MMP—

7、2蛋白在正常胃組織不表達(dá)，而在胃癌組織中顯著高表達(dá)，表達(dá)率為85.1％，與正常胃組織比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。Western blot實(shí)驗(yàn)顯示，基質(zhì)金屬蛋白酶MMP—2蛋白在胃癌組織及癌旁正常胃組織中的表達(dá)率分別是88.1％及16，4％(P<0.05)。在兩者中的表達(dá)平均指數(shù)分別為0.936±0.143和0.632±0.115(P<0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示，基質(zhì)金屬蛋白酶MMP—2mRNA在胃癌組織及癌旁正常胃組織中的表

8、達(dá)率分別是83.6％及56.7％(P<0.05)。在兩者中的表達(dá)平均指數(shù)分別為0.573±0.084和0.364±0.065(P<0.05)?；|(zhì)金屬蛋白酶MMP—2表達(dá)與胃癌的浸潤深度，細(xì)胞分化程度，淋巴轉(zhuǎn)移及TNM分期呈正相關(guān)，而與腫瘤大小、大體類型、組織學(xué)生長方式無關(guān)。 3、免疫組化結(jié)果顯示，基質(zhì)金屬蛋白酶MMP—14在正常胃組織不表達(dá)，而在胃癌組織中顯著高表達(dá)，表達(dá)率為91.0％，與正常胃組織比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.0

9、5)。Western blot實(shí)驗(yàn)顯示，基質(zhì)金屬蛋白酶MMP—14蛋白在胃癌組織及癌旁正常胃組織中的表達(dá)率分別是94％及19.4％(P<0.05)。在兩者中的表達(dá)平均指數(shù)分別為0.908±0.138和0.563±0.102(P<0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示，基質(zhì)金屬蛋白酶MMP—14mRNA在胃癌組織及癌旁正常胃組織中的表達(dá)率分別是77.6％及43.3％(P<0.05)。在兩者中的表達(dá)平均指數(shù)分別為0.887±0.104和0.553

10、±0，085(P<0.05)?；|(zhì)金屬蛋白酶MMP—14表達(dá)與胃癌的浸潤深度，細(xì)胞分化程度，淋巴轉(zhuǎn)移及TNM分期呈正相關(guān)，而與腫瘤大小、大體類型、組織學(xué)生長方式無關(guān)。 4、免疫組化結(jié)果顯示，鈣粘蛋白在胃癌組織中表達(dá)降低或缺失。在67例正常胃粘膜上皮表達(dá)陽性率為94％；而在胃癌組織中瘤細(xì)胞染色與正常上皮細(xì)胞相似，表達(dá)降低，有時可見胞漿染色，陽性表達(dá)率為55.2％，其差別有顯著性意義(P<0.05)。Western blot實(shí)驗(yàn)顯示

11、，鈣粘蛋白在胃癌組織及癌旁正常胃組織中的表達(dá)率分別是50.7％及97％(P<0.05)。在兩者中的表達(dá)平均指數(shù)分別為0.557±0，113和0.924±0.141(P<0.05)。RT-PCR結(jié)果顯示，鈣粘蛋白mRNA在胃癌組織及癌旁正常胃組織中的表達(dá)率分別是86.6％及98.5％(P<0.05)specif。在兩者中的表達(dá)平均指數(shù)分別為0.541±0，084和0.722±0.115(P<0.05)。胃癌鈣粘蛋白的表達(dá)缺失與胃癌的浸潤深

12、度，細(xì)胞分化程度，淋巴轉(zhuǎn)移及TNM分期呈正相關(guān)，而與腫瘤大小、大體類型、組織學(xué)生長方式無關(guān)。 5、MMP—2、MMP—14在胃癌組織中高表達(dá)有相關(guān)性，肝素酶、MMP—2、鈣粘蛋白的表達(dá)無相關(guān)性。 結(jié)論： 1、肝素酶在胃癌組織中的表達(dá)增高，與胃癌的生物學(xué)行為及預(yù)后判斷有關(guān)。 2、MMP—2在胃癌組織中高表達(dá)，與胃癌的生物學(xué)行為及預(yù)后判斷有關(guān)。 3、MMP—14在胃癌組織中高表達(dá)，與胃癌的生物學(xué)行為及