化工專業(yè)優(yōu)秀畢業(yè)論文模板(精華版)

1、<p>　　寶雞文理學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院畢業(yè)論文</p><p>　　2013年5月28日</p><p><b>　　目 錄</b></p><p><b>　　摘要1</b></p><p><b>　　關(guān)鍵詞1</b></p><p>　

2、　Abstract……………………………………………………………………… ………………...…..1</p><p>　　Keywords…………………………….………………………………………………..……......….. 2</p><p><b>　　1 前言3</b></p><p><b>　　2 實(shí)驗(yàn)部分4</

3、b></p><p>　　2.1 主要試劑及儀器4</p><p>　　2.2 熒光光譜的測量4</p><p><b>　　3 結(jié)果和討論5</b></p><p>　　3.1 非標(biāo)記分子信標(biāo)的設(shè)計(jì)5</p><p>　　3.2 GSMB探針的表征5</p>&l

4、t;p>　　3.3 使用非標(biāo)記分子信標(biāo)檢測目標(biāo)DNA8</p><p><b>　　4 結(jié)論9</b></p><p><b>　　參考文獻(xiàn)11</b></p><p><b>　　謝 辭12</b></p><p>　　萘啶類熒光小分子在缺陷DNA腔體內(nèi)熒光行

5、為的研究</p><p><b>　　楊世明</b></p><p>　　(寶雞文理學(xué)院 化學(xué)化工學(xué)院，陜西 寶雞 721007)</p><p>　　摘 要：本文主要研究了把熒光小分子作為信號物質(zhì)用于構(gòu)建信號增強(qiáng)型非標(biāo)記分子信標(biāo)。利用兩段單鏈DNA雜交形成一個發(fā)卡DNA結(jié)構(gòu)，發(fā)卡DNA的莖狀部分形成了一個空缺位點(diǎn)，空缺位點(diǎn)對面是C堿基。熒光

6、雜環(huán)小分子ATMND通過氫鍵識別未配對的C堿基并嵌入空缺位點(diǎn)，ATMND熒光發(fā)生淬滅。當(dāng)向體系加入與分子信標(biāo)環(huán)狀部分互補(bǔ)的目標(biāo)連時，分子信標(biāo)環(huán)狀部分打開，ATMND與目標(biāo)堿基結(jié)合的微環(huán)境發(fā)生變化，ATMND被釋放出，其熒光強(qiáng)度恢復(fù)表明目標(biāo)鏈的存在。本文研究了影響小分子熒光淬滅的因素，優(yōu)化了實(shí)驗(yàn)條件。研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)加入目標(biāo)DNA鏈時，ATMND熒光強(qiáng)度恢復(fù)，而加入含有錯配堿基的目標(biāo)鏈時，熒光恢復(fù)不明顯，表明我們的非標(biāo)記分子信標(biāo)可以有效的區(qū)分

7、完全互補(bǔ)鏈和單堿基錯配目標(biāo)DNA。</p><p>　　關(guān)鍵詞：2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶; 熒光法; 空缺位點(diǎn)探針 </p><p>　　Label-free fluorescent molecular beacon based on a small fluorescent molecule</p><p>　　non-covalently bou

8、nd to the intentional gap site in the stem moiety</p><p>　　Yang Shi-ming</p><p>　　( College of Chem. & Chem. Eng., Baoji University of Arts & Sciences, Baoji 721007 Shaanxi )</p>

9、<p>　　Abstract：A label-free ?uorescent molecular beacon (MB) based on a ?uorescent molecule, 5,6,7-trimethyl-1,8-naphthyridin-2-ylamine (ATMND) which is non-covalently bound to the intentional gap site in the stem m

10、oiety of the label-free MB, was developed. a label-free molecular beacon (MB) based on non-covalent binding of a fluorescence molecule, 5,6,7-Trimethyl- 1,8-naphthyridin-2-ylamine (ATMND), to the intentional gap site in

11、the stem moiety of a hairpin DNA has been developed. When the free-labe</p><p>　　Key words: 5,6,7-Trimethyl-1,8-naphthyridin-2-ylamine; Fluorescent method; Gap site</p><p><b>　　1 前言</b&

12、gt;</p><p>　　DNA的雜交序列特異性的檢測，已經(jīng)引起了包括分子診斷、環(huán)境檢測等領(lǐng)域的廣泛關(guān)注, 因此，對敏感性和選擇性探針的需求越來越多。DNA序列分析是現(xiàn)代分子診斷學(xué)的基礎(chǔ)，對于各種遺傳類疾病、病毒或細(xì)菌的感染、遺傳與變異都有重要意義。尤其對于基因藥物治療、靶向釋放等水平上的個性化用藥，最終都依賴于基因測序結(jié)果。近年來，DNA測序技術(shù)的飛速發(fā)展，加速了人類基因組計(jì)劃的完成，對基因結(jié)構(gòu)分析和功能研究

13、做出了巨大的貢獻(xiàn)。長期以來由于特異性DNA探針的大量需求，各種分子工程在最近幾年迅速發(fā)展起來了。包括熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）探針、臨近探針、熒光探針等。在這些DNA探針中，由于分子信標(biāo)的穩(wěn)定性和特異性的特點(diǎn)，受到極大的關(guān)注。傳統(tǒng)的分子信標(biāo)是有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的低核酸探針。當(dāng)一個分子信標(biāo)與它的遺傳微粒，隨著莖的曲張導(dǎo)致熒光恢復(fù)，它經(jīng)歷了一個自發(fā)的構(gòu)象重組。其獨(dú)特的目標(biāo)識別和信號傳導(dǎo)的能力的關(guān)系已經(jīng)在許多生物化學(xué)和生物學(xué)中大量的運(yùn)用，包括定量聚

14、合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，DNA-蛋白質(zhì)相互作用，多基因分析以及信使RNA在活細(xì)胞中的表達(dá)等。</p><p>　　從1996年第一次發(fā)現(xiàn)分子信標(biāo)到現(xiàn)在，利用信標(biāo)在檢測盒研究的技術(shù)得到了不斷地提高和進(jìn)步。新類型的分子信標(biāo)已經(jīng)發(fā)展到了波長的移動和酶的增加與電化學(xué)信號之間的相互轉(zhuǎn)化。分子信標(biāo)是一種新型的可以特異識別核酸序列的熒光探針，這種熒光探針通過與核酸靶分子進(jìn)行雜交后構(gòu)象發(fā)生變化而發(fā)出熒光，他們將其命名為分子信標(biāo)(MB) 。

15、分子信標(biāo)具有靈敏度高、背景信號低、特異性識別性強(qiáng)、操作簡單以及可進(jìn)行實(shí)時檢測等優(yōu)點(diǎn)，在近幾年內(nèi)得到了迅速發(fā)展，并已廣泛地應(yīng)用于實(shí)時監(jiān)測聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、基因突變的快速分析、DNA、RNA 的檢測、DNA/RNA雜交的動力學(xué)研究以及DNA/蛋白質(zhì)相互作用研究等，其應(yīng)用領(lǐng)域仍在不斷拓展。雖然使用了傳感器系統(tǒng)，在許多情況下，即使是允許一個單核苷酸錯配的檢測，系統(tǒng)仍然需要特定的標(biāo)記探針例如熒光染料，因此設(shè)計(jì)一個基于光學(xué)的原理來探測的方法來

16、替代分子信標(biāo)的寡核苷酸標(biāo)記是使用最廣泛的。利用在DNA鏈中嵌入染料的方式來檢測在溶液中的雙鏈DNA，作為一個簡單的和無標(biāo)記的探針設(shè)計(jì)方法，這種方法在分子信標(biāo)的情況下有內(nèi)在的局限性。這是因?yàn)槿玖峡梢郧度朐贛B的干部分產(chǎn)生一個大的干擾。一些小的熒光分子</p><p><b>　　圖1 實(shí)驗(yàn)原理圖</b></p><p><b>　　2 實(shí)驗(yàn)部分</b&

17、gt;</p><p>　　2.1 主要試劑及儀器</p><p>　　2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶(ATMND)、二甲基砷酸鈉、乙二胺四乙酸二鈉（EDTA）。實(shí)驗(yàn)中所用試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水均為高純水。DNA由上海生工生物工程技術(shù)公司生產(chǎn)合成，序列如表1所示。</p><p>　　RF-5301熒光分光光度計(jì)(日本島津）、PC紫外-可見分光光度計(jì)（

18、日本島津）。</p><p>　　2.2 熒光光譜的測量</p><p>　　用帶有熱電溫度控制盒的熒光分光光度計(jì)在370到500nm波長范圍內(nèi)測量，熒光激發(fā)波長350nm。激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度為0.5nm到2.0nm之間，掃描速度為100nm/min。</p><p>　　表1 探針和目的寡核苷酸設(shè)計(jì)</p><p><b>　

19、　3 結(jié)果和討論</b></p><p>　　3.1 非標(biāo)記分子信標(biāo)的設(shè)計(jì)</p><p>　　如圖1所示，非標(biāo)記分子信標(biāo)是由一個小的熒光分子組成的，含有47個核苷酸的DNA鏈（M1），并含有15個核苷酸的DNA鏈（S1）。S1鏈?zhǔn)?5個堿基序列互補(bǔ)的（斜體M1由15個堿基構(gòu)成）在M1末端的3、上。M1/S1合成體，是由胞嘧啶的相反的缺口位點(diǎn)組成，一個發(fā)夾結(jié)構(gòu)（下劃線基地M1）

20、組成的6個堿基對干和19個環(huán)序列（斜體下劃線的基地和M1寫），是由退火溶液M1（2μm）和S1（2μm）構(gòu)成的。把2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶（2μm）添加到M1 /S1復(fù)合溶液形成更復(fù)雜的M1 / S1 / 2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶溶液。上面描述的就是非標(biāo)記分子信標(biāo)的設(shè)計(jì)，稱之為GSMB。通過對2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶的實(shí)驗(yàn)，不成對的胞嘧啶將會在S1/M1復(fù)雜的缺口位點(diǎn)緊密結(jié)合，導(dǎo)致其

21、熒光猝滅。一個打開的發(fā)夾結(jié)構(gòu)將會從GSMB中釋放出2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶。</p><p>　　3.2 GSMB探針的表征</p><p>　　為了證明所示的方法的可行性，我們評估了GSMBs的熒光在遺傳微粒上的缺失以及在目標(biāo)基因變化后的熒光情況。圖2顯示了2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶的熒光光譜（2μm）在含有100mM 氯化鈉和1mM四乙酸二氨基乙烯的

22、10mM的二甲胂酸鈉緩沖溶液變化情況。在M1/S1分子的復(fù)雜結(jié)構(gòu)情況下，2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶熒光表現(xiàn)出的發(fā)射波段在401nm處的和最多（曲線a）。然而，2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶除了比M1/S1分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜外（圖2，曲線b），其熒光表現(xiàn)出顯著的猝滅現(xiàn)象，2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶的熒光從201u減少到11u。在2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶的熒光強(qiáng)度略有下降時，觀察到一個

23、ss的M1，S1或完全匹配的雙鏈的存在。一個小的熒光分子可以通過氫鍵的為成對堿基結(jié)合在DNA雙鏈上。這導(dǎo)致分子的熒光猝滅。這些結(jié)果表明，2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶納入M1/S1分子結(jié)構(gòu)的復(fù)合物的干基部分的缺口位點(diǎn)中，是通過氫鍵來結(jié)合胞嘧啶的。在對GSMBs的其他的cDNA的反應(yīng)進(jìn)行研究，如圖2所示，在加入1.5μM的</p><p>　　圖2 加入M1/S1復(fù)合物前后ATMND的熒光光譜</

24、p><p>　　Fig. 2. Fluorescence spectra of ATMND before (a) and after bound to M1/S1 complex to form GSMB (b). (a) ATMND alone (2.0 μM); (b) GSMB (ATMND (2.0 μM) in the presence of M1/S1 complex (2.0 μM)). Spectra

25、 (c) is ?uorescence spectra of GSMBs (M1/S1/ATMND complex, 2.0 μM) in the presence of target cDNA (1.5μM). Sample solutions were adjusted to pH 7.0 with 10 mM sodium cacodylate containing 100 mM NaCl and 1 mM EDTA.</p

26、><p>　　為了定量地確定2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶胞嘧啶在缺口位點(diǎn)的M1/S1的復(fù)雜情況，對2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶的熒光滴定法進(jìn)行了研究。在401nm處的熒光強(qiáng)度所產(chǎn)生的變化提供了一個按1:1[1/S1分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜]/[2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶]的測定終點(diǎn)，說明2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶形成了穩(wěn)定的1：1的復(fù)合物與M1/S1復(fù)雜的缺口位點(diǎn)。結(jié)合

27、常數(shù)K值8.1×106M-1，在本實(shí)驗(yàn)滴定曲線測定下，得出2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶含有不共價(jià)結(jié)合的DNA。</p><p>　　這種非標(biāo)記分子信標(biāo)采用“信號”的方法，重點(diǎn)考慮的是讓靈敏度達(dá)到最高。作為常識，宏塊的靈敏度可以通過增加熒光團(tuán)的強(qiáng)度或提高猝滅劑的效率提高。一個小的熒光分子可以捆綁到一個未成對的基地，這就是側(cè)翼的結(jié)合位點(diǎn)的堿基與一個未成對堿的氫鍵和堆疊。因此2-氨基-5,6,7

28、-三甲基-1,8-萘啶的熒光猝滅效率可能會受未成對的胞嘧啶在復(fù)雜的M1/S1的缺口位點(diǎn)的影響，即使在2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶和胞嘧啶堿基之間有互補(bǔ)的氫鍵，也無法避免。為了檢查側(cè)翼堿基上熒光猝滅的效果，我們研究了2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶序列在一個單一的胞嘧啶M1/S1復(fù)雜干部分的依賴性結(jié)合的缺口位點(diǎn)。如圖2所示，最強(qiáng)的淬滅是2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶綁定的M1/ S1復(fù)雜的具有GG堿基對

29、在5、和3、側(cè)間隙站點(diǎn)（圖3），在401nm處的熒光強(qiáng)度猝滅高達(dá)95%，在基準(zhǔn)2.0μM處，M1/S1分子結(jié)構(gòu)復(fù)雜。對于其他的側(cè)鏈堿基（圖3，光譜b-e），觀察到的熒光猝滅是相對穩(wěn)定的，在那兒的順序是T-T(74%)<C-C(76%)<A-A(83%)。</p><p>　　圖3 側(cè)鏈堿基對探針識別性能影響的考察</p><p>　　Fig. 3. Fluorescence s

30、pectra of ATMND (2.0μM) in the presence of 2.0μM M1/S1 complex with different ?anking bases.</p><p>　　這些結(jié)果表明，雖然在2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶和胞嘧啶堿基之間互補(bǔ)的氫鍵發(fā)揮了很重要的作用，但是缺口位點(diǎn)依然對熒光猝滅效率產(chǎn)生了影響。所以在GSMs中我們選擇5、和3、的GS缺口位點(diǎn)。在紫外線范

31、圍內(nèi)的CD光譜可以用來監(jiān)測DNA的構(gòu)象轉(zhuǎn)變。如果確定的構(gòu)象發(fā)生變化，結(jié)合后的2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶在M1／S1復(fù)雜的莖部分的缺口位點(diǎn)，鎘的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了M1/S1復(fù)雜之前和之后的2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶結(jié)合。在沒有2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶和遺傳微粒時，M1/S1分子結(jié)構(gòu)的復(fù)合物顯示在250nm處取得負(fù)峰值，在275nm處取得正峰值，這是在一個莖部分的螺旋特征的β-構(gòu)象。而添加2-氨基-

32、5,6,7-三甲基-1,8-萘啶后，在M1/S1/2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶沒有觀察到明顯的復(fù)雜誘導(dǎo)CD（GSMBs）,表明2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶與胞嘧啶堿基的結(jié)合，莖的部分的缺口位點(diǎn)不誘導(dǎo)M1／S1復(fù)雜的的構(gòu)象變化。因此，它不影響靶DNA的雜交動力學(xué)。我們推斷在250nm處的CD峰值的增加是由于GSMB環(huán)遺傳微</p><p>　　3.3 使用非標(biāo)記分子信標(biāo)檢測目標(biāo)DNA&l

33、t;/p><p>　　由于2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶的熒光猝滅效率與濃度和M1/S1分子結(jié)構(gòu)有關(guān)系，為了優(yōu)化條件，我們選擇2μM的濃度，實(shí)現(xiàn)了良好的靈敏度。在最佳條件下，在校準(zhǔn)曲線的基礎(chǔ)上獲得三組平均測量值（圖4）。</p><p>　　圖4 目標(biāo)鏈的濃度與ATMND熒光強(qiáng)度關(guān)系圖</p><p>　　Fig.4. Fluorescence spectr

34、a of a GSMB after hybridization with (from up to down) 2.0, 1.5, 1.0, 0.5, 0.3, 0.2, 0.1, 0.05, and 0 μM of cDNA, respectively.</p><p>　　如上圖所示，正如預(yù)期的那樣，當(dāng)信號增強(qiáng)時，觀察到熒光強(qiáng)度在50nM到1.5μM的范圍內(nèi)，與cDNA濃度成正比。線性回歸方程為I = 11+8

35、1c(μM)(r=0.9923),檢測限為20nM，經(jīng)過多次重復(fù)測量，得出用7個測量值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差小于5%。對GSMB的觀察報(bào)告表明，分子信標(biāo)的選擇性一般是歸因于莖環(huán)結(jié)構(gòu)的構(gòu)象。對GDSMB選擇性研究測量分別為1.5μM遺傳微粒(cDNA)雜交后的GSMBs熒光，1.5μM單堿基錯配的DNA(TM)，1.5Μ雙堿基的寡核苷酸（TM2），1.5μM四個堿基不匹配的寡核苷酸（TM4）和1.5μM全匹配DNA。所有的結(jié)果都顯示在圖5中。對于

36、全匹配DNA，幾乎沒有觀察到什么響應(yīng)（數(shù)據(jù)未顯示）。該GSMBs回應(yīng)的單堿基錯配，但反應(yīng)明顯小于全匹配DNA（圖5）。對應(yīng)背景熒光GSMNs上觀察到的發(fā)光強(qiáng)度，雜交的全匹配DNA和在溶液中的單堿基錯配的DNA分別提高了13倍和4倍，這表明對目標(biāo)序列的選擇性比較高。兩個堿基錯配寡核苷酸（TM2）顯現(xiàn)出了一個接近五分之一分子信標(biāo)中加入與環(huán)狀區(qū)互補(bǔ)的目標(biāo)鏈Target后，分子信標(biāo)可與目標(biāo)鏈Target形成相對剛性并且更加穩(wěn)</p>

37、<p>　　圖5 含有雙堿基錯配的目標(biāo)鏈對ATMND熒光強(qiáng)度的恢復(fù)</p><p>　　Fig 5. Fluorescence quenching of hybridization solution includes fluorescence intensity of solution includes double basic group mispairing target is lower th

38、an the complementary target.</p><p><b>　　4 結(jié)論</b></p><p>　　在這次試驗(yàn)研究中，將傳統(tǒng)的分子信標(biāo)結(jié)構(gòu)改變，延長分子信標(biāo)莖狀部分并在其中設(shè)計(jì)一個空缺位點(diǎn)，使得熒光雜環(huán)小分子ATMND可以與空缺位點(diǎn)對面的C堿基特異性結(jié)合，來構(gòu)建非標(biāo)記信號增強(qiáng)型熒光分子信標(biāo)。在這個過程中，由于與C堿基結(jié)合后，ATMND結(jié)構(gòu)發(fā)生變

39、化，使得ATMND的熒光會發(fā)生淬滅。向分子信標(biāo)體系加入與環(huán)狀部分完全互補(bǔ)的目標(biāo)鏈，通過熒光檢測，發(fā)現(xiàn)ATMND熒光有一定的恢復(fù)。同時也考察了含有錯配堿基的目標(biāo)鏈對ATMND熒光的恢復(fù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，完全互補(bǔ)的目標(biāo)鏈可以很明顯的與含有錯配堿基的目標(biāo)鏈區(qū)分。當(dāng)非標(biāo)記分子信標(biāo)增加時與全匹配DNA雜交產(chǎn)生強(qiáng)烈熒光現(xiàn)象，然而，熒光強(qiáng)度稍微一點(diǎn)點(diǎn)的增加都會導(dǎo)致得到不匹配的DNA序列。因此，非標(biāo)記的分子信標(biāo)在這項(xiàng)研究中是有用的探針，可以用來區(qū)分他們的

40、目標(biāo)和單堿基錯配的DNA序列。不同于傳統(tǒng)的分子信標(biāo)，在這項(xiàng)研究中的非標(biāo)記的分子信標(biāo)和其他有用的功能的測試效果都是比較顯著的。在使用分子信標(biāo)進(jìn)行堿基錯配分析時，對錯配位點(diǎn)的位置沒有特別的要求，改變錯配堿基的位置，并不能改變分子信標(biāo)的特異性，也不會影響反應(yīng)結(jié)果的準(zhǔn)確性，同時證明了分子信標(biāo)比普通線性核酸探針的應(yīng)用具有更</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p

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47、;/p><p>　　[9] Q. Guo, M. Lu, L. A. Marky, et al. Interaction of the dye ethidium bromide with DNA containing guanine repeats[J]. Biochemistry, 1992, 31(9): 2451-2455.</p><p>　　[10] K. Yoshimoto, S.

48、 Nishizawa, M. Minagawa, et al. Use of abasic site-containing DNA strands for nucleobase recognition in water[J]. J. Am. Chem. Soc., 2003, 125(30): 8982-8983.</p><p>　　[11] 黃留玉. PCR最新技術(shù)原理、方法及應(yīng)用[M].第二版，北京：化學(xué)工

49、業(yè)出版社，2011： 121-146.</p><p>　　[12] 劉森. PCR聚合酶鏈反應(yīng)[M]. 第一版, 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社，2009：20-183.</p><p>　　[13] 劉明鐘. 原子熒光光譜分析[Ｍ].第一版，北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2008：41-87.</p><p>　　[14] 靜國忠．基因工程及其分子生物學(xué)基礎(chǔ):分子生物學(xué)基礎(chǔ)分冊

50、[Ｍ]．第二版. 北京：北京大學(xué)出版社，2009：40-79．</p><p><b>　　謝 辭</b></p><p>　　本論文是在寶雞文理學(xué)院化學(xué)化工學(xué)院張紅鴿老師的指導(dǎo)下完成的，值此論文完成之際，我謹(jǐn)向張老師以及所有給予我?guī)椭?、關(guān)心我進(jìn)步的老師和同學(xué)表示誠摯的感謝。 </p><p>　　回想這段時間，由于開始理論知識的不足，還

51、有實(shí)驗(yàn)操作方面的不熟練，在自己的實(shí)驗(yàn)過程中遇到了很多問題，然而在面對一個個的問題和解決的過程中，也讓我學(xué)到了很多東西。不但豐富了自己的理論知識，同時實(shí)驗(yàn)技能也得到了很大的提高。值此之際，衷心的感謝我的指導(dǎo)老師張紅鴿老師，在整個畢業(yè)論文的完成中，給了我很大的支持和鼓勵，也經(jīng)常詢問我的實(shí)驗(yàn)情況，并給予我所需要的幫助。同時，我也感謝和我一起在進(jìn)行畢業(yè)論文實(shí)驗(yàn)的同學(xué)，大家互相討論，互相學(xué)習(xí)，互相幫助，得到共同提高。通過這次畢業(yè)論文，我的實(shí)驗(yàn)操作

52、能力和綜合能力都有所提高，對于我今后的學(xué)習(xí)和工作都將是寶貴的財(cái)富！</p><p>　　總之，論文的完成凝聚著眾多幫助過我的老師和同學(xué)的汗水和希望，敬請讓我留存于心，在將來的生活和學(xué)習(xí)中，我會加倍努力表達(dá)對他們的誠摯謝意。</p><p>　　在此即將畢業(yè)之際，祝福學(xué)校，祝福老師，祝福同學(xué)，祝福所有的人！</p><p>　　有志者，事竟成，破釜沉舟，百二秦關(guān)終屬楚