8種雙酚A類化合物對(duì)MCF-7細(xì)胞的毒性及損傷研究.pdf

1、雙酚A(BPA)是廣泛存在的環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(EDCs),BPA類化合物作為環(huán)氧樹脂,聚碳酸酯塑料以及阻燃劑等產(chǎn)品添加劑,在水杯、奶瓶、食品飲料容器、醫(yī)療設(shè)備等生產(chǎn)中被廣泛使用,并被不斷開發(fā)做新的用途。這些制品在長(zhǎng)期使用或在高溫、堿性條件下,BPA都會(huì)緩慢釋放到周圍環(huán)境中,并且很容易在環(huán)境中積累,并通過(guò)用水,空氣,土壤和食品污染等對(duì)周圍生物產(chǎn)生影響。
　　 BPA類化合物的雌激效應(yīng)一直是研究的重點(diǎn),但是關(guān)于其化合物毒性效應(yīng)的研究

2、較少。到目前為止,研究發(fā)現(xiàn)BPA在較窄的濃度范圍內(nèi)對(duì)MCF-7的損傷作用主要依賴于類雌激素作用干擾胞內(nèi)酶活性及細(xì)胞代謝活性影響細(xì)胞增殖,而微高濃度的BPA會(huì)對(duì)細(xì)胞造成損傷,導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。因此在細(xì)胞水平上研究BPA類化合物的毒性效應(yīng)具有重要的意義。同時(shí),環(huán)境中的污染物并不是單獨(dú)存在的,人群在生產(chǎn)生活中總是處于各種污染物的混合暴露之下。研究污染物的聯(lián)合作用比污染物的單獨(dú)作用更加貼近實(shí)際,更有現(xiàn)實(shí)意義。本實(shí)驗(yàn)主要是通過(guò)微板毒性分析法研究8種B

3、PA類化合物對(duì)雌激素受體缺失MCF-7細(xì)胞的毒性效應(yīng),并初步結(jié)合DNA損傷以及細(xì)胞膜損傷研究為進(jìn)一步評(píng)價(jià)BPA類化合物的環(huán)境毒性效應(yīng)奠定基礎(chǔ)。
　　 實(shí)驗(yàn)選用8種雙酚A類化合物,包括2,2-雙(4-羥基苯基)丙烷(簡(jiǎn)稱BPA),2,2-二(4-羥基苯基)丁烷(簡(jiǎn)稱BPB),4,4'-(1-甲基亞乙基)雙(2-甲基苯甲醚)(簡(jiǎn)稱BPC),4,4’-亞乙基雙苯酚(簡(jiǎn)稱BPE),2,2-雙(2-羥基-5-聯(lián)苯基)丙烷(簡(jiǎn)稱BPQ,4,

4、4'-硫代二苯酚(TDP),雙酚AF(簡(jiǎn)稱BPAF),4,4’-(1-苯乙基)雙酚(簡(jiǎn)稱BPAP),采用四唑鹽(MTS/PMS)比色法檢測(cè)此8種BPA類化合物和12種根據(jù)等效應(yīng)濃度比和均勻濃度比設(shè)計(jì)的混合物對(duì)雌激素受體缺失人乳腺癌細(xì)胞(MCF-7(ER-))增殖活性的影響,用非線性最小二乘法擬合得到濃度-效應(yīng)曲線(CRC),以濃度加和模型(CA)和獨(dú)立作用模型(LA)為參考模型,研究混合物的相互作用規(guī)律。通過(guò)2,4一二硝基苯肼法檢測(cè)8種

5、雙酚A類化合物對(duì)MCF-7(ER-)細(xì)胞乳酸脫氫酶(LDH)露出率的影響,單細(xì)胞凝膠電泳(SCGE)檢測(cè)了5種雙酚A類化合物對(duì)MCF-7(ER-)細(xì)胞DNA損傷。
　　 結(jié)果發(fā)現(xiàn)所有的劑量.效應(yīng)曲線(CRC)均能用Weibull或者Logit函數(shù)有效表征,以模型估算的半數(shù)效應(yīng)濃度負(fù)對(duì)數(shù)值(pEC50)評(píng)估8種化合物的毒性大小依次為:BPQ＞BPAF＞BPAP＞BPB＞BPC＞TDP＞BPE＞BPA;應(yīng)用劑量加和(CA)模型和獨(dú)立

6、作用(IA)模型對(duì)混合物毒性進(jìn)行評(píng)估與預(yù)測(cè),結(jié)果8種BPA類化合物各種濃度組合的混合物毒性均可用CA模型有效預(yù)測(cè);LDH檢測(cè)以及SCGE檢測(cè)BPA類化合物對(duì)MCF-7(ER-)的損傷作用,首先是干擾酶活性及微量元素代謝,抑制細(xì)胞增殖,然后是對(duì)細(xì)胞核DNA造成損傷,同時(shí)細(xì)胞膜也受到損傷,細(xì)胞開始出現(xiàn)大量壞死。
　　 實(shí)驗(yàn)最后對(duì)構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)Metridia熒光素酶的MCF-7(ER-)細(xì)胞毒性檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行探索,旨在通過(guò)測(cè)定熒光素酶活