生物傳感技術(shù)檢測(cè)堆肥體系中木質(zhì)纖維素功能編碼基因的研究.pdf

1、堆肥化技術(shù)在城市生活垃圾處理中已經(jīng)得到越來越廣泛地應(yīng)用。堆肥系統(tǒng)中，微生物降解木質(zhì)素的代謝過程由一系列酶共同完成，而錳過氧化物酶(MnP)和纖維二糖水解酶(CBH)在其中起了關(guān)鍵性作用。用DNA及酶生物傳感器檢測(cè)其編碼基因，能更好地了解這兩種酶的協(xié)同作用。本研究擬制備固定化核酸探針傳感器用于檢測(cè)黃孢原毛平革菌錳過氧化物酶和里氏木酶纖維二糖水解酶的編碼基因，探討DNA傳感器用于同時(shí)檢測(cè)堆肥高效降解菌產(chǎn)酶基因的可行性。同時(shí)運(yùn)用漆酶?jìng)鞲衅骷夹g(shù)

2、對(duì)環(huán)境中污染物對(duì)苯二酚進(jìn)行了檢測(cè)。
　　首先研究了DNA生物傳感器檢測(cè)黃孢原毛平革菌錳過氧化物酶編碼基因。利用液態(tài)搖床和固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)了黃孢原毛平革菌，對(duì)基因組DNA進(jìn)行提取，同時(shí)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增獲得所需要的目標(biāo)基因段列。利用自組裝單分子膜技術(shù)，將疏基修飾的探針固定在金殼磁性納米顆粒表面。采用交流阻抗法和循環(huán)伏安法，表征基修飾的ssDNA在碳糊電極上的固定及雜交過程。再用計(jì)時(shí)電流法掃描，得出電化學(xué)信號(hào)與目標(biāo)鏈濃度間的線性關(guān)系。研究

3、了目標(biāo)序列的線性檢測(cè)范圍、特異性以及各種影響因素。該傳感器的線性范圍為1×109～1×10-15M，檢測(cè)限為1.0×10-17M。
　　接著，DNA生物傳感器單獨(dú)檢測(cè)里氏木酶纖維二糖水解酶編碼基因。利用液態(tài)發(fā)酵法培養(yǎng)了里氏木酶，對(duì)基因組DNA進(jìn)行提取，同時(shí)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增獲得所需要的目標(biāo)基因段列。利用自組裝單分子膜技術(shù)，將氨基修飾的探針固定在金殼磁性納米顆粒表面。采用交流阻抗法和循環(huán)伏安法，表征基修飾的ssDNA在碳糊電極上的固

4、定及雜交過程。再用計(jì)時(shí)電流法掃描，得出電化學(xué)信號(hào)與目標(biāo)鏈濃度間的線性關(guān)系。研究了目標(biāo)序列的線性檢測(cè)范圍、特異性以及各種影響因素。該傳感器的線性范圍為1×10-9～1×10-13M，檢測(cè)限為1.2×10-14M。同一目標(biāo)鏈濃度均平行測(cè)定三次，其RSD為2.28％。該傳感器特異性強(qiáng)，靈敏度高，重復(fù)性和穩(wěn)定性也較好。
　　最后，通過構(gòu)建基于納米金/碳納米管修飾的漆酶?jìng)鞲衅?，?shí)現(xiàn)對(duì)環(huán)境中對(duì)苯二酚含量的檢測(cè)。通過化學(xué)及物理方法制備了羧基化可