胡蘿卜根的培養(yǎng)賽課

1、胡蘿卜根的離體培養(yǎng),成 都 師 范 學(xué) 院,,外植體的取材、消毒和培養(yǎng)技術(shù),,無籽西瓜,成 都 師 范 學(xué) 院,如 何 繁 殖？,,成 都 師 范 學(xué) 院,植物組織,,愈傷組織,,長出叢芽,,,,長根,,完整植株,,,成 都 師 范 學(xué) 院,在 下，把植物體的器官或組織片段切下來，接種在適當(dāng)?shù)?上進行離體培養(yǎng)，這些器官或組織的細胞就會經(jīng)過 和

2、 的過程，逐漸產(chǎn)生出植物的各種組織和器官，進而發(fā)育成 。,無菌條件,人工培養(yǎng)基,脫分化,再分化,一顆完整的植株,植物細胞的全能性,,,成 都 師 范 學(xué) 院,用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段，叫做外植體,選擇外植體的原則,分生能力強無病毒苗,成 都 師 范 學(xué) 院,外植體必須使用無菌材料整個組培流程也必須無菌,如何創(chuàng)造組織培養(yǎng)無菌的條件,成 都 師 范 學(xué)

3、院,1、操作房間、操作流程的無菌,2、操作人員的消毒,3、接種器械的消毒滅菌,4、外植體消毒滅菌,1、操作房間、操作流程的無菌,接種室的消毒超凈工作臺的消毒,成 都 師 范 學(xué) 院,甲醛高錳酸鉀熏蒸,高錳酸鉀與甲醛反應(yīng)，緩慢放熱，促進甲醛揮發(fā)，殺滅物體表面和空氣中的細菌繁殖體,紫外線殺菌,使細菌核酸突變，生產(chǎn)蛋白質(zhì)能力丟失，導(dǎo)致細菌死亡。,,成 都 師 范 學(xué) 院,紫外燈開啟殺菌,殺菌結(jié)束，白熾燈開啟工作,2、操作人員的消

4、毒,a.操作人員進入無菌接種室需要穿白大褂，在無菌室禁止交談b.接種前，操作者要用肥皂清洗雙手，擦干,成 都 師 范 學(xué) 院,c.操作者進入接種室后，用酒精棉球擦拭雙手及操作臺面,成 都 師 范 學(xué) 院,3、接種器械的消毒滅菌,灼燒滅菌 鑷子、剪刀、解剖刀等侵入95%的酒精中，使用之前取出在酒精燈上灼燒滅菌,成 都 師 范 學(xué) 院,使用注意：通過高溫殺滅細菌，冷卻后立即使用，每次接觸外植體后需要重新灼燒。,利用酒精

5、燈的外焰,,常用消毒劑：75%的乙醇及10%的次氯酸鈉消毒的原則：,成 都 師 范 學(xué) 院,4、外植體消毒滅菌,1）消毒劑與外植體應(yīng)該接觸足夠長的時間以除去外植體表面的微生物，但應(yīng)盡量減少對外植體細胞的破壞。,2）滅菌時間從倒入消毒液開始計時，至倒入無菌水為止,3）滅菌液要充分侵沒材料。,胡蘿卜根的離體培養(yǎng),選取對象： P-木質(zhì)部、C-形成層、 X-韌皮部,

6、成 都 師 范 學(xué) 院,C-形成層,為什么選取形成層？,成 都 師 范 學(xué) 院,形成層的細胞分裂能力強，且基本不攜帶病毒.全能性也相對比較高。,1.清洗清水洗凈胡蘿卜去掉表皮把胡蘿卜切成3cm的段,成 都 師 范 學(xué) 院,（一）胡蘿卜根的消毒滅菌,2.消毒向帶有螺口蓋的玻璃瓶中倒入適量的75%的酒精，取胡蘿卜條，侵入75%的酒精中，30s后倒出酒精。,成 都 師 范 學(xué) 院,（一）胡蘿卜根的消毒滅菌,75%酒精,3.滅菌向玻璃

7、瓶中倒入10%的次氯酸鈉溶液，擰上瓶蓋，消毒5-10min。,成 都 師 范 學(xué) 院,消毒期間，要將玻璃瓶搖動2-3次。,（一）胡蘿卜根的消毒滅菌,10%次氯酸鈉,4.洗掉消毒劑消毒后，打開瓶蓋，將消毒液倒入燒杯中，在玻璃瓶中加入適量的無菌水，蓋上瓶蓋，搖動數(shù)次，將水倒去。重復(fù)3-4次，用無菌濾紙將胡蘿卜段表面的水吸干。,成 都 師 范 學(xué) 院,（一）胡蘿卜根的消毒滅菌,1. 打孔將消毒的胡蘿卜段放入無菌培養(yǎng)皿中，用滅過菌的打孔

8、器沿著形成層穿入胡蘿卜中，取得一段含有形成層的3cm的圓柱體。,成 都 師 范 學(xué) 院,（二）接 種,（二）接 種,2. 切割用消毒后的解剖刀截去兩頭越1cm長度的與消毒劑接觸的胡蘿卜段，余下部分沿截面將其橫切成1mm左右的小圓片。,成 都 師 范 學(xué) 院,3. 接種到培養(yǎng)基將切好的胡蘿卜的外植體迅速接種在MS+0.5mg/L 6-BA+1.0mg/L NAA的固體培養(yǎng)基上。,成 都 師 范 學(xué) 院,（二）接 種,,3.

9、 接種每個培養(yǎng)瓶可接種4-6塊外植體，注意培養(yǎng)瓶口應(yīng)斜向火焰。,成 都 師 范 學(xué) 院,（二）接 種,,（三）接 種,成 都 師 范 學(xué) 院,,3. 接種材料接種好后，將培養(yǎng)瓶的瓶口在酒精燈火焰上轉(zhuǎn)動灼燒一遍，擰緊瓶蓋，以免微生物進入，造成污染，導(dǎo)致培養(yǎng)失敗，,,,（三）接 種,成 都 師 范 學(xué) 院,,4.標記接種完成后，在瓶壁上貼上標簽，注明接種材料的名稱、編號和接種日期。,,,操 作 示 例,,成 都 師 范

10、學(xué) 院,,,成 都 師 范 學(xué) 院,,,成 都 師 范 學(xué) 院,,成 都 師 范 學(xué) 院,,,成 都 師 范 學(xué) 院,,,成 都 師 范 學(xué) 院,,,成 都 師 范 學(xué) 院,,,成 都 師 范 學(xué) 院,,,成 都 師 范 學(xué) 院,,,成 都 師 范 學(xué) 院,,,成 都 師 范 學(xué) 院,,,成 都 師 范 學(xué) 院,,,成 都 師 范 學(xué) 院,,,成 都 師 范 學(xué) 院,,,成 都 師 范 學(xué) 院,,,成 都 師 范 學(xué) 院,,,成 都 師