hla基因檢測(cè)修改稿

1、長(zhǎng)沙能潤(rùn)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所鄧鵬,HLA 基因檢測(cè),Table of Contents,Table of Contents,什么是HLAMHC、HLA、亞型、關(guān)聯(lián)什么是HLA分型 I型，II型，III型，IV型HLA分型與疾病檢測(cè)骨髓與器官移植，免疫性疾病，代謝性疾病，神經(jīng)內(nèi)科疾病，骨科疾病等,基本概念,人類(lèi)白細(xì)胞抗原h(huán)uman leukocyte antigen , HLA,MHC,Major h

2、istocompatibility complex，,主要組織相容性復(fù)合體,（包括HLA、H-2、ChLA、RhLA、DLA、 SLA、RLA、GpLA、B等）,1940年代，Snell和Gorer小鼠間的腫瘤及皮膚移植試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：決定小鼠間移植排斥與否（即組織相容性）的基因位于17號(hào)染色體短臂命名為組織相容性-2（H-2）,H-2是一個(gè)由許多緊密連鎖的基因位點(diǎn)構(gòu)成的復(fù)雜系統(tǒng),1950年代Dausset經(jīng)

3、產(chǎn)婦血清進(jìn)行個(gè)體之間抗體與白細(xì)胞凝集和細(xì)胞毒試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)人的MHC，命名為HLA 基因位于第6號(hào)染色體短臂,1960年代，Benacerraf 不同品系的豚鼠對(duì)一些抗原的免疫應(yīng)答能力比較發(fā)現(xiàn)：控制機(jī)體對(duì)不同抗原的免疫應(yīng)答能力的基因（Ir基因）位于MHC基因復(fù)合體內(nèi)。,Benacerraf、Dausset和Snell三位科學(xué)家分別從不同角度對(duì)MHC的免疫遺傳學(xué)進(jìn)行的開(kāi)拓性研究，榮膺1980年的諾貝爾醫(yī)學(xué)和生理獎(jiǎng)。,HLA共

4、分為4型：I型分子包括HLA-A、HLA-B和HLA-C，廣泛存在與各種組織細(xì)胞中；II型分子包括HLA-DP、HLA-DQ和HLA-DR，存在于B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和活化T細(xì)胞中；III型分子為補(bǔ)體系統(tǒng)，包括C2和C4位點(diǎn)，存在于血清中；IV型分子可能是一些分化抗原，只存在于淋巴細(xì)胞、某些細(xì)胞毒性T細(xì)胞和白細(xì)胞中。,HLA分型,HLA基因系統(tǒng)的多態(tài)性及一些主要基因座位的等位基因數(shù)正式命名顯示多態(tài)性的HLA基因座位有31個(gè)，共

5、2 320個(gè)等位基因。  圖中所示為常見(jiàn)基因座位的等位基因數(shù)。及一些主要基因座位的等位基因數(shù)正式命名顯示多態(tài)性的HLA基因座位有31個(gè)，共2 320個(gè)等位基因。  圖中所示為常見(jiàn)基因座位的等位基因數(shù)。,HLA分型的基本檢測(cè)方法： 細(xì)胞學(xué)方法測(cè)抗原特異性（型） 血清學(xué)方法測(cè)抗原特異性（型） （微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)）

6、 分子生物學(xué)方法測(cè)等位基因 PCR/SSP PCR/Luminex PCR/SBT PCR/二代測(cè)序 PCR/流式細(xì)胞儀,HLA抗原和等位基因命名:,

7、用血清學(xué)及細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)抗原特異性: HLA-B27, HLA-DR4（血清學(xué)方法） HLA-DPw2（細(xì)胞學(xué)方法）用分子生物學(xué)方法檢測(cè)等位基因： HLA-DRB1*04 05,HLA-B*27 07,例如HLA-B27,HLA-B*2701HLA-B*2702HLA-B*2703HLA-B*2704HLA-B*27051HLA-B*27052HLA-B

8、*2706HLA-B*2707,HLA-B*2708HLA-B*2709HLA-B*2710HLA-B*2711...HLA-B*2723,Loci Considered to be Matched,,,,,,,,,,,,,,,A,C,B,DR,DQ,DP,4 M bp,Father’s,Mother’s,HLA: 無(wú)血源相關(guān) 10/10

9、 同胞兄妹 單倍型全相合，半相合 父母親 半相合,17,臍血干細(xì)胞移植,,外周血干細(xì)胞移植,,骨髓干細(xì)胞移植,,常見(jiàn)HLA與疾病關(guān)聯(lián)疾病 HLA抗原 相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)—————————————————————————強(qiáng)直性脊椎炎

10、 B27 89.8Behcet綜合征 B51 10-15多發(fā)性硬化癥 DR2 4.8乳糜瀉 DR3 10.8Grave’s病 DR3 3.7系統(tǒng)性紅斑狼瘡 DR3

11、 5.8類(lèi)風(fēng)關(guān) DR4 4.2胰島素依賴(lài)型糖尿病 DR3/DR4 25.0重癥肌無(wú)力 DR3 2.5,小結(jié),HLA的三個(gè)特性使其成為熱點(diǎn)：決定組織相容性 高度多態(tài)性與疾病關(guān)聯(lián),Table of Contents,HLA 基因分型,低分辨: SSP,rSSO Luminex bead

12、 for class I & class II,中等分辨HLA分型,24,Next generation sequencing,高分辨高通量HLA分型,Illumina Sequencing by Synthesis (SBS) chemistry,MiSeq,Pacific Biosciences - Single-molecule real-time sequencing,27,Sequencing based typing

13、 (SBT),高等分辨HLA分型,Sanger 測(cè)序原理,Sanger 測(cè)序原理,A,T,A,G,C,T,A,G,T,G,A,A,C,G,T,C,A,G,T,,3’,,5’,T,A,T,C,G,A,,5’,,3’,A,C,G,T,A,C,G,dNTP,ddNTP- Dyes,A,T,A,G,C,T,A,G,T,G,A,A,C,G,T,C,A,G,T,,3’,,5’,T,A,T,C,G,C,A,,5’,,3’,T,A,T,A,G,

14、C,T,A,G,T,G,A,A,C,G,T,C,A,G,T,,3’,,5’,T,A,T,C,G,C,A,,5’,,3’,T,T,G,A,T,A,G,C,T,A,G,T,G,A,A,C,G,T,C,A,G,T,,3’,,5’,T,A,T,C,G,C,A,,5’,,3’,T,G,C,T,G,A,A,C,A,C,G,T,A,C,G,T,,,Sanger 測(cè)序原理,A,T,A,G,C,T,A,G,T,G,A,A,C,G,T,C,A,G,T,,3

15、’,,5’,T,A,T,C,G,A,,5’,,3’,A,T,A,G,C,T,A,G,T,G,A,A,C,G,T,C,A,G,T,,3’,,5’,T,A,T,C,G,C,A,,5’,,3’,T,A,T,A,G,C,T,A,G,T,G,A,A,C,G,T,C,A,G,T,,3’,,5’,T,A,T,C,G,C,A,,5’,,3’,T,G,A,T,A,G,C,T,A,G,T,G,A,A,C,G,T,C,A,G,T,,3’,,5’,T,A,T,

16、C,G,C,A,,5’,,3’,T,G,C,T,G,A,A,C,,,,,,HLA分型模板的擴(kuò)增,Long PCR (each: HLA-A, -B, -C, -DR, -DQ, DP, MICA)2. Amplicons (PCR: exon + loci),Long PCR to amplify the target gene,www.pnas.org/cgi/doi/10.1073/pnas.120661

17、4109,Assembly and Alignment,Problems in sequence assembly,Amplicons - HLA Coverage,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,HLA-A,HLA-B,HLA-C,HLA-DQB1,HLA-DPB1,HLA-DQA1,HLA-DRB1,HLA-DRB3,HLA-DRB4,HLA

18、-DRB5,,,,,,,,,,,,,,,HLA-DPA1,,,,,,,,,,,,,,,,,,,4.1kb,2.6kb,4.2kb,10.3kb,9.7kb,7.3kb,7.1kb,4.1kb,Table of Contents,AS的病因,基因有關(guān)：HLA-B27的轉(zhuǎn)基因大鼠成功地培育出強(qiáng)直性脊柱炎的動(dòng)物模型。目前已發(fā)現(xiàn)包括B27在內(nèi)的3種基因與此病相關(guān)；并且有明顯家族發(fā)病傾向。免疫有關(guān)：MHC，T-Cells感染有關(guān)：相關(guān)學(xué)說(shuō)認(rèn)為

19、，來(lái)自尿道、前列腺、精囊的抗原經(jīng)Batson循環(huán)到達(dá)骶髂關(guān)節(jié)、脊柱和眼睛等部位而發(fā)生相關(guān)病變，解釋了男性好發(fā)的原因。,AS的經(jīng)典檢查,體征： 骶髂關(guān)節(jié)炎檢查：“4”字試驗(yàn)、骶髂關(guān)節(jié)壓迫試驗(yàn)、髂棘推壓試驗(yàn)、骨盆擠壓試驗(yàn)附著點(diǎn)炎檢查：坐骨結(jié)節(jié)、肋軟骨、肋胸關(guān)節(jié)、恥骨聯(lián)合等壓痛脊柱和胸廓檢查：Schober試驗(yàn)、指地距、枕墻距、胸廓活動(dòng)度等,骶髂關(guān)節(jié),AS的經(jīng)典檢查,B27測(cè)序的AS檢查,HLA-B27與AS,患病率：0.3%，

20、20-30歲，男女比例 10:1，有家族傾向；主要侵犯：中軸關(guān)節(jié)（骶髂關(guān)節(jié)、脊柱骨突、脊柱旁軟組織）可伴發(fā)外周關(guān)節(jié)及關(guān)節(jié)外表現(xiàn)，嚴(yán)重者發(fā)生脊柱畸形和關(guān)節(jié)強(qiáng)直B27檢測(cè)可作為有相關(guān)癥狀或高危人群AS早期的篩選方法！AS不是RA的一種特殊類(lèi)型！,HLA基因座位的等位基因和真正的疾病易感基因處于緊密連鎖不平衡，而HLA基因本身并不是引起疾病的真正基因，僅僅是遺傳標(biāo)志。,連鎖不平衡學(xué)說(shuō)分子模擬學(xué)說(shuō)關(guān)節(jié)源性肽假說(shuō)其他：T細(xì)胞受體庫(kù)

21、假說(shuō)超抗原假說(shuō)B27修飾因子假說(shuō)Cys67模型,B27抗原與某些G（-）菌之間存在類(lèi)似的分子結(jié)構(gòu)，能發(fā)生分子模擬或交叉反應(yīng)，機(jī)體免疫系統(tǒng)把B27當(dāng)作病原體抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生免疫損害。,認(rèn)為關(guān)節(jié)源性肽只存在于關(guān)節(jié)組織中，特異性地由HLA—B27提呈，正常情況下遞呈水平低，反應(yīng)T細(xì)胞處于耐受狀態(tài)；當(dāng)某些具有同源結(jié)構(gòu)蛋白的病毒或細(xì)菌感染時(shí)，則可致敏耐受的T細(xì)胞，從而識(shí)別以低水平遞呈的關(guān)節(jié)源性肽，引起自身免疫反應(yīng)而損傷組織。,長(zhǎng)

22、沙能潤(rùn)醫(yī)學(xué)公司的優(yōu)勢(shì),長(zhǎng)沙能潤(rùn)醫(yī)學(xué)成立于2010年，專(zhuān)注于：基因資源與基因檢測(cè)、腫瘤基因研究與轉(zhuǎn)化、免疫細(xì)胞治療和存儲(chǔ)。為醫(yī)療機(jī)構(gòu)、制藥與健康體檢公司提供特色精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)解決方案。 集團(tuán)旗下?lián)碛幸韵聵I(yè)務(wù)版塊：基因檢測(cè)、細(xì)胞治療、生物培訓(xùn)、生物雙創(chuàng)項(xiàng)目投資、精準(zhǔn)醫(yī)療科研。集團(tuán)還參股投資了免疫診斷試劑國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室、國(guó)家基因檢測(cè)技術(shù)示范中心、智慧醫(yī)院工程建設(shè)公司燕通生物、海南樂(lè)城合家精準(zhǔn)醫(yī)療醫(yī)院等機(jī)構(gòu)。與中科院、中南大學(xué)湘雅醫(yī)

23、學(xué)院、湖南師大醫(yī)學(xué)院及斯坦福、猶他、華盛頓、UAB、耶魯?shù)却髮W(xué)教授合作共建實(shí)驗(yàn)室。 在未來(lái)，集團(tuán)將以“基因科技服務(wù)健康”為宗旨，以雙創(chuàng)平臺(tái)為基礎(chǔ)，以基因細(xì)胞技術(shù)系統(tǒng)為主導(dǎo)，系統(tǒng)模塊化，模塊產(chǎn)品化為策略，整合產(chǎn)、學(xué)、研、金、用資源，努力成為杰出的精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)服務(wù)提供商。,公司基因檢測(cè)實(shí)力雄厚，與中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院百人計(jì)劃鄒義洲教授長(zhǎng)期合作，有3臺(tái)ABI3730測(cè)序儀，1臺(tái)Luminex, 公司員工80%具有碩士及碩士以上學(xué)