地中海貧血基因檢測的臨床應(yīng)用

1、一、地中海貧血,1,全球有3.5億人為地中海貧血基因攜帶者（占總?cè)丝诘?%） 中國南方高發(fā)地區(qū)人群攜帶率最高可達(dá)到24%,2,地中海貧血的地域分布,α-地貧分布,β-地貧分布,中國南方地貧基因攜帶率,Xu, et al. J Clin Pathol 2004, 57:517-22. Cai, et al. Chi J Epidemiol 2002,23:281-5.,在我國，地中海貧血主要在南方廣東、廣西、海南、四川、重慶等省市發(fā)病

2、率較高，以廣西、廣東最為嚴(yán)重。,3,遺傳性血紅蛋白病三大類?地中海貧血 (地貧)（Thalassemias ）常見為?-地貧 和? -地貧?異常血紅蛋白病珠蛋白結(jié)構(gòu)異常，絕大部分沒有或有輕度臨床診斷?遺傳性持續(xù)性胎兒血紅蛋白珠蛋白的合成不隨著胎兒的發(fā)育而發(fā)生改變，胎兒血紅蛋白持續(xù)表達(dá)。,地中海貧血定義及分類,地中海貧血（Thalassemia）簡稱地貧（Thal），是由于血紅蛋白的珠蛋白肽鏈基因突變或缺失，使某種珠蛋白肽

3、鏈合成障礙而致的一種遺傳性慢性溶血性貧血。血紅蛋白分子是由珠蛋白+血紅素組成，珠蛋白由兩對(duì)（4條）肽鏈構(gòu)成。,根據(jù)珠蛋白肽鏈基因（簡稱α基因或β基因）缺失、缺陷或基因突變和珠蛋白肽鏈合成障礙的不同，可將地貧分為α型、β型、δβ型和δ型四種，其中以α型和β型地貧較為常見。,地中海貧血定義及分類,人類血紅蛋白的合成和演變,地貧血紅蛋白的組成,正常成人血紅蛋白（Hb）有三種：HbA(α2β2)( 2.5—3.5%)、HbA2(α2δ2)(

4、96.5-97.5%)、HbF(α2γ2)(0-1.0%)。,α地中海貧血及基因型,靜止型：1個(gè) α缺失或突變,α地中海貧血的臨床特征,α-地貧血紅蛋白比較,β地中海貧血及基因型,,,純合子: 兩個(gè)基因正常,雜合子: 一個(gè)正常，另一個(gè)不正常,純合子: 兩個(gè)基因都不正常,X,X,X,β地中海貧血的基因型和臨床類型,β地中海貧血血紅蛋白組成,地貧的危害,輕度地貧患者無特別不良反應(yīng) 中、重度地貧患者有貧血癥狀，如渾身無力、 肝脾腫大等，隨

5、著年齡增長會(huì)越來越嚴(yán)重。 重型α地貧患兒在出生24－48小時(shí)之內(nèi)死亡，而且產(chǎn)婦因胎兒水腫、大胎盤，極易導(dǎo)致死產(chǎn)。 重型β地貧以及部分中間型α地貧患者在出生后半年左右出現(xiàn)進(jìn)行性貧血，只能靠輸血維持生命，多在童年夭折。,15,,,地貧患者的困境,4000元：重型地貧患兒平均每月需4000元的治療費(fèi)用以維持生命。成年人每月的治療費(fèi)用接近萬元，每年治療費(fèi)用至少10萬元，每例重癥地貧患兒出生給社會(huì)和家庭帶來的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)高達(dá)100-300萬元。,

6、20歲：重型β地貧患兒需要終生輸血治療，平均存活年齡僅10歲左右，得不有效治療的重型地貧患兒很難活到20歲。,造血干細(xì)胞：根治重型地貧患兒的唯一方法移植造血干細(xì)胞。費(fèi)用超過 40萬，且有90%的患者配對(duì)不成功。,16,地貧預(yù)防手段,17,地貧的病因決定了它難治卻可防,17,社會(huì)關(guān)注-世界地貧日,2013年5月8日 第20個(gè)“世界地貧日”中國宣傳主題：地貧防控從婚前孕前開始,18,地貧遺傳模式,若夫婦二人是同一種地貧基因的攜

7、帶者，那么他們每次懷孕都有1/4的概率懷有重度地貧患兒的可能。,若夫婦二人確診一方為地貧基因的攜帶者，而另一方完全正常，則每次懷孕，孩子有1/2幾率是地貧基因攜帶者1/2完全正常。,19,篩查對(duì)象,地中海貧血患者-病因診斷,孕前夫妻雙方-明確生育地中海貧血兒風(fēng)險(xiǎn),高危人群-已經(jīng)生育地中海貧血兒的夫妻雙方,新生兒篩查-盡早診斷、盡早治療,孕期夫妻雙方-防止生育地中海貧血兒,20,正常人群也需要進(jìn)行地貧基因檢測！,全民注重優(yōu)生優(yōu)育；,人口流

8、動(dòng)性大，地貧患者分散性高；,正常人群中地貧基因攜帶者約占2%；,21,病因探究找到方法,地中海貧血,α點(diǎn)突變/缺失,β地中海貧血基因,輕型β－地中海貧血、中間型β－地中海貧血、重型－β海貧血遺傳性胎兒血紅蛋白持續(xù)癥,,,,α地中海貧血基因,,靜止型、標(biāo)準(zhǔn)型、HbH病、Bart’s胎兒水腫綜合征,,β點(diǎn)突變,,22,地貧產(chǎn)品介紹,24,通量高—每次檢測可分析96個(gè)樣本品質(zhì)優(yōu)—陰、陽性符合率均為100%時(shí)間短—報(bào)告時(shí)間最短可

9、至5小時(shí)分型強(qiáng)—每個(gè)突變位點(diǎn)準(zhǔn)確分型覆蓋廣—可覆蓋中國人95%以上突變種類多—外周血、羊水、絨毛、臍帶血、足血片,本試劑盒適用于人DNA樣本的地中海貧血基因型（包含3種α突變、3種α缺失及17種β突變）中國常見的突變基因型的檢測，可用于人地中海貧血的輔助診斷及適用于大樣本量的攜帶者篩查和產(chǎn)前基因診斷。,覆蓋廣,25,品質(zhì)優(yōu)點(diǎn)突變與測序結(jié)果符合率高達(dá)100%,三家臨床醫(yī)院廣東省婦幼保健院、廣西省婦幼保健院及湖北省婦幼保健院結(jié)果匯總

10、見下表：,陽性符合率（臨床靈敏度）=711/（711+0）=100%；陰性符合率（臨床特異性）=709/（0+709）=100%；總符合率 =（711+709）/（711+0+0+709）=100%；,26,品質(zhì)優(yōu)缺失突變與Gap-PCR結(jié)果符合率高達(dá)100%,陽性符合率（臨床靈敏度）=428/（428+0）=100%；陰性符合率（臨床特異性）=217/（0+217）=100%；總符合率 =（428+217）/（428+0+0

11、+217）=100%；,時(shí)間短檢測流程,,,,樣本核酸提取20 min,多重PCR擴(kuò)增2.5hr,液相雜交15 min,結(jié)果檢測與判讀 1 min/test,28,分型強(qiáng)全新液相芯片技術(shù)簡介,二維數(shù)字編碼磁珠,29,藻,分型強(qiáng)全新液相芯片技術(shù)簡介,目前，國內(nèi)地貧分子診斷方法主要有Gap-PCR、反向斑點(diǎn)雜交、導(dǎo)流雜交、測序等。其中Gap-PCR只能檢測出α地貧中的缺失型，反向斑點(diǎn)雜交需要兩次檢測才能完整的檢出α、β-地貧；

12、導(dǎo)流雜交技術(shù)不能做到基因位點(diǎn)的準(zhǔn)確分型；而測序方法需要昂貴的儀器，復(fù)雜序列分析，人工經(jīng)驗(yàn)要求高，不利于大規(guī)模篩查。,國內(nèi)現(xiàn)有地中海貧血基因檢測技術(shù)及現(xiàn)狀,地中海貧血檢測試劑盒,同類產(chǎn)品操作流程對(duì)比,同類產(chǎn)品優(yōu)勢對(duì)比,通量高—采用自動(dòng)化檢測技術(shù)，每次可同時(shí)檢測96個(gè)樣本，分析樣本通量高； 品質(zhì)優(yōu)—結(jié)果為數(shù)字信號(hào)，由軟件自動(dòng)判讀，同時(shí)生成檢測報(bào)告單，結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定可靠，有效避免人為錯(cuò)誤，陰、陽性符合率均為100%；判讀易—采用電腦軟件自

13、動(dòng)判讀，減少人工誤差，結(jié)果穩(wěn)定性高；時(shí)間短—檢測速度快，報(bào)告時(shí)間最短可至5小時(shí)；效率高—實(shí)驗(yàn)室需求人員少，2個(gè)人1套儀器一天可完成500人份樣本檢測；分型強(qiáng)—能在一次實(shí)驗(yàn)針對(duì)突變和缺失同時(shí)進(jìn)行多個(gè)位點(diǎn)檢測，α突變、β突變和α缺失一次呈現(xiàn)；覆蓋廣—可覆蓋中國人群地貧基因變異的95%以上，準(zhǔn)確性高；種類多—樣本種類包括外周血、羊水、絨毛、臍帶血、足血片。,產(chǎn)品優(yōu)勢,產(chǎn)品應(yīng)用實(shí)例—廣東省婦幼保健院,廣東省婦幼保健院院長張小莊發(fā)布發(fā)布

14、了最新的廣東地貧防控項(xiàng)目基線調(diào)查結(jié)果,廣東省婦幼保健院地貧基因?qū)嶒?yàn)室內(nèi)，工作人員在使用液態(tài)芯片儀分析地貧基因,我公司與廣東省婦保院合作對(duì)廣東省21個(gè)地市的14332對(duì)戶籍住院分娩孕產(chǎn)婦夫婦進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)地貧基因攜帶率為16.8%；這些夫婦所分娩胎兒中，地貧基因攜帶率為16.0%。,36,與現(xiàn)有地貧篩查方案結(jié)合的產(chǎn)品定位,重慶市納入職工生育保險(xiǎn),凡符合我市職工生育保險(xiǎn)待遇享受條件的人員，按照《重慶市物價(jià)局重慶市衛(wèi)生局關(guān)于新增和修訂部分醫(yī)療