SO2脅迫對(duì)擬南芥DNA甲基化多態(tài)性的影響.pdf

1、二氧化硫(SO2)作為一種常見的大氣污染物，對(duì)于生物有很大的危害作用。SO2能影響植物的正常生理活動(dòng)，高濃度的SO2能造成植物葉片失綠或壞死，抑制細(xì)胞分裂，甚至導(dǎo)致部分細(xì)胞死亡。目前，植物抵御SO2脅迫的分子機(jī)制還不清楚。
　　本文以擬南芥(Arabidopsis thaliana.L)為研究對(duì)象，以擬南芥基因表達(dá)譜的分析結(jié)果為基礎(chǔ)，應(yīng)用甲基化敏感擴(kuò)增多態(tài)性(MSAP)技術(shù)分析了30mg·m-3SO2脅迫3d對(duì)擬南芥基因組DNA甲

2、基化多態(tài)性的影響。結(jié)果表明，選用EcoRⅠ和HpaⅡ/MspⅠ的13對(duì)引物組合共擴(kuò)增出760條帶，得到的帶型包括非甲基化、半甲基化和完全甲基化三種類型。對(duì)照組和SO2脅迫處理組中非甲基化（Ⅰ型帶）位點(diǎn)數(shù)最多，分別占總甲基化多態(tài)性擴(kuò)增位點(diǎn)數(shù)的55.66％和53.29％，半甲基化（Ⅲ型帶）率分別為18.02％和11.05％，全甲基化(Ⅱ和Ⅳ型帶)率分別為26.32％和35.66％，甲基化敏感擴(kuò)增多態(tài)性(MSAP)比率分別為44.34％和46

3、.71％。SO2脅迫后沒有發(fā)生變化的條帶是409條，即甲基化狀態(tài)未變化類型的位點(diǎn)數(shù)占總擴(kuò)增位點(diǎn)數(shù)的53.82％。SO2脅迫后，擬南芥基因組甲基化多態(tài)性位點(diǎn)占總擴(kuò)增位點(diǎn)數(shù)的46.18％，其中，發(fā)生甲基化的位點(diǎn)為220個(gè)，占總擴(kuò)增位點(diǎn)數(shù)的28.95％;發(fā)生去甲基化的位點(diǎn)為131個(gè)，占總擴(kuò)增位點(diǎn)數(shù)的17.23％。在所擴(kuò)增出的位點(diǎn)中，發(fā)生甲基化的位點(diǎn)數(shù)高于去甲基化的位點(diǎn)數(shù)，且發(fā)生超甲基化的位點(diǎn)數(shù)（137個(gè)）要比重新甲基化的位點(diǎn)數(shù)(68個(gè))多。研

4、究結(jié)果表明，在SO2處理過程中擬南芥基因組DNA存在基于DNA甲基化水平和模式改變的表觀遺傳變異，甲基化變異模式以甲基化為主。
　　本文還采用甲基化敏感的限制性內(nèi)切酶酶切-PCR法，檢測(cè)了擬南芥SO2脅迫應(yīng)答基因編碼區(qū)5'端第一個(gè)CCGG序列的胞嘧啶甲基化特征。結(jié)果表明，在檢測(cè)的4個(gè)脅迫應(yīng)答基因的特定序列中，對(duì)照和SO2熏氣組中MHL1和NIT2基因編碼區(qū)為全甲基化5mCCGG，MYB基因?yàn)榘爰谆?mCCGG，SO2脅迫未引起檢