硒缺乏對(duì)雞組織DNA甲基化水平的影響.pdf

1、DNA甲基化是已知最早被發(fā)現(xiàn)的與基因抑制相關(guān)的表觀遺傳機(jī)制。DNA的甲基化修飾參與基因表達(dá)調(diào)控、胚胎發(fā)育、細(xì)胞分化、基因組印跡、X染色體滅活和細(xì)胞記憶等諸多重要生物學(xué)過(guò)程。通常情況下，甲基化水平同基因表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，甲基化程度越高，基因表達(dá)活性越低，甲基化程度越低，基因表達(dá)越活躍。DNA異常甲基化可能導(dǎo)致基因的不穩(wěn)定性和疾病的發(fā)生。硒作為一種人和動(dòng)物必需微量元素，其含量高低也與DNA甲基化異常改變相關(guān)。有實(shí)驗(yàn)證明，飲食中硒的缺乏導(dǎo)致小鼠C

2、aco-2細(xì)胞系及肝和結(jié)腸組織的低甲基化。飼料硒含量對(duì)于禽類(lèi)組織DNA甲基化的影響還未見(jiàn)報(bào)道。
　　 本試驗(yàn)通過(guò)飼喂低硒日糧建立缺硒雞模型，應(yīng)用高效液相色譜法檢測(cè)硒缺乏時(shí)雞組織中DNA甲基化水平的改變情況，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)硒缺乏對(duì)雞組織中甲基轉(zhuǎn)移酶和去甲基化酶基因表達(dá)的影響，結(jié)果表明：
　　 1建立了雞組織中DNA甲基化水平的高效液相色譜檢測(cè)方法，優(yōu)化色譜條件如下：色譜柱為DIKMA SpursilC18-

3、EP(250 mm×4.6 mm5μm).紫外檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm；流動(dòng)相為0.05moL/L磷酸二氫鉀，磷酸調(diào)pH至3.5；流速為1mL/min，上樣量20μL。
　　 2低硒日糧組雞肌肉組織、腦組織、免疫組織及肝臟中DNA總甲基化水平與對(duì)照組比較整體呈降低趨勢(shì)。
　　 3低硒日糧組雞甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B基因mRNA表達(dá)水平呈降低趨勢(shì)。
　　 4低硒日糧組雞肌肉組織、腦組織、免疫組織