馬尾松胚性培養(yǎng)物增殖與成熟DNA甲基化多態(tài)性研究.pdf

1、DNAMethylationAnalysisDuringProliferationandDifferentiationofPinusmassonianaLambEmbryogenicculturesbyWANGqianAthesissubmittedinpartialsatisfactionoftheRequirementsforthedegreeofMasterofSciencelnForestCultivationinCentral

2、SouthUniversityofForestryandTechnology498ShaoshanSouthRoad，TianxinDistrictChangshaHunan410004，PRCHINASupervisorProfessorZHANGDonglinApril，2014摘要馬尾松體細胞胚胎發(fā)生體系雖已經(jīng)建立，但仍存在胚性培養(yǎng)物胚性難以保持、成熟分化率低等諸多問題。本試驗針對馬尾松胚性培養(yǎng)物在增殖過程中出現(xiàn)的生長衰弱現(xiàn)象，通

3、過復生調(diào)控處理使胚性培養(yǎng)物重獲增殖能力，胚性細胞生長狀態(tài)的轉變與其基因表達的表觀遺傳調(diào)控密切相關，DNA甲基化作為表觀遺傳調(diào)控的重要方式可能參與了馬尾松體細胞胚胎發(fā)生的各個階段。本論文利用MSAP技術檢測馬尾松胚性培養(yǎng)物增殖和成熟分化過程中的DNA甲基化多樣性變異模式，以復生調(diào)控過程的胚性培養(yǎng)物增殖初期、增殖旺盛期、衰亡期、復生調(diào)控期及穩(wěn)定增殖期這5個時期和ABA處理后不同時間(Oh、O5h、6h、20h、2d、3d、5d、7d、15d

4、、35d和50d)的馬尾松胚性培養(yǎng)物為實驗材料，研究增殖期的5個時期和分化期的11個時期的DNA甲基化水平及其變異模式，結果表明，馬尾松胚性培養(yǎng)物在增殖和成熟過程中都存在著DNA甲基化水平及模式的變化，這為進一步揭示馬尾松體胚發(fā)生過程中的分子機制提供理論依據(jù)。主要研究結果如下：1在胚性培養(yǎng)物復生調(diào)控的5個時期中，DNA甲基化變異模式表現(xiàn)豐富。總甲基化率最高的是復生調(diào)控期：全甲基化水平最高的是復生調(diào)控期；半甲基化率最高的是增殖初期和增殖旺

5、盛期。而復生調(diào)控期和穩(wěn)定增殖期的處理l比處理2在總甲基化水平略高。對復生調(diào)控兩相鄰時期的DNA胞嘧啶甲基化變異模式進行分析，結果發(fā)現(xiàn)衰亡期至復生調(diào)控期超甲基化模式變化最大，發(fā)生的超甲基化事件最多：而復生調(diào)控期至穩(wěn)定增殖期的去甲基化事件發(fā)生的最多。兩個處理間不同時期的超甲基化變異模式與去甲基化變異模式均有所差異。2成熟分化期的胚性培養(yǎng)物的體胚發(fā)生時間與其總甲基化率負對數(shù)有顯著性的相關性，不同ABA處理時間，其DNA甲基化變異模式發(fā)生變化。

6、經(jīng)ABA處理后不同時間(3d50d)每個時期總甲基化率的負對數(shù)值與處理天數(shù)之間的擬合函數(shù)為Y=38E6x400004x300143x201901x08321，R2=09545，接近1。利用MSAP技術結馬尾松胚性培養(yǎng)物經(jīng)ABA處理后的不同時間(0h、05h、6h、20h、2d、3d、5d、7d、15d、35d和50d)的DNA甲基化的水平及變化模式進行檢測，發(fā)現(xiàn)各時期總甲基化水平最高的是ABA處理后的50d，最低的是ABA處理后的2d；