馬尾松胚性愈傷組織誘導(dǎo)與增殖研究.pdf

1、馬尾松(Pinus massoniana)是我國南方分布面積最大的造林樹種之一，具有用材、采脂、造紙等經(jīng)濟(jì)用途。然而，馬尾松的良種繁育技術(shù)相對滯后，因此制約著馬尾松良種的廣泛應(yīng)用。本研究以馬尾松不同采種時(shí)間的未成熟種子為材料，探討采種時(shí)間、母樹基因型、培養(yǎng)基類型、激素濃度、蔗糖濃度等對胚性愈傷組織誘導(dǎo)的影響，并進(jìn)一步研究胚性愈傷組織在增殖階段的增殖倍數(shù)以及胚性愈傷組織的形態(tài)變化和細(xì)胞變化。旨在為后期進(jìn)行體胚成熟提供大量材料和理論指導(dǎo)，為

2、建立高效穩(wěn)定的馬尾松體細(xì)胞胚胎發(fā)生技術(shù)奠定扎實(shí)的基礎(chǔ)和提供一定的技術(shù)指導(dǎo)。本文主要的研究內(nèi)容與結(jié)果如下：
　　 1.馬尾松合子胚在湖南的發(fā)育過程與其它松屬樹種的合子胚發(fā)育過程基本一致。5月下旬至6月下旬的馬尾松種子幼胚中合子胚還未形成雛形，還以液態(tài)狀存留在馬尾松種子幼胚的胚乳中，此時(shí)的種子胚乳與種皮很難分離；7月份的馬尾松種子幼胚中合子胚已漸成形，胚頭開始膨大，胚柄逐漸開始退化，胚軸伸長，合子胚處于子葉前期，此時(shí)胚乳與種皮很容易

3、分離，8月份的馬尾松種子幼胚合子胚已趨于成熟，胚軸伸長，胚柄退化，胚頭頂端出現(xiàn)分生組織，胚乳已固化，種皮與胚乳較易分開，合子胚逐漸成熟。
　　 2.馬尾松胚性愈傷組織誘導(dǎo)的最佳采種時(shí)間為7月25日，胚性愈傷誘導(dǎo)率最高可達(dá)到15％，而此時(shí)的合子胚處在子葉前期。5月下旬至6月下旬采集的外植體接種后誘導(dǎo)產(chǎn)生的多為非胚性愈傷組織，外植體接種后很容易褐化，褐化率最高，達(dá)到了85％；7月份采集的外植體接種后較易誘導(dǎo)產(chǎn)生胚性愈傷組織，胚性愈傷

4、誘導(dǎo)率最高達(dá)到15％，外植體褐化數(shù)量較少；8月份采集的外植體體接種后誘導(dǎo)產(chǎn)生少量的胚性愈傷組織，較多的非胚性愈傷組織，大量的外植體接種后不發(fā)生啟動(dòng)反應(yīng)。對不同采種期的胚性愈傷組織誘導(dǎo)率進(jìn)行單因素方差分析，發(fā)現(xiàn)采種時(shí)間(合子胚的發(fā)育階段)對胚性愈傷誘導(dǎo)率和非胚性愈傷誘導(dǎo)率均呈顯著性影響。
　　 3.不同母樹基因型的胚性愈傷組織誘導(dǎo)率有差異，但差異不顯著。7月25日采集的3個(gè)母樹基因型的外植體接種后，胚性愈傷誘導(dǎo)率由高到低分別為A樹

5、15％，B樹6.7％，C樹3.3％。對不同母樹基因型的胚性愈傷組織誘導(dǎo)率進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果顯示，母樹基因型對胚性愈傷誘導(dǎo)率影響不顯著，但母樹基因型對非胚性愈傷組織誘導(dǎo)率成顯著影響。
　　 4.誘導(dǎo)馬尾松胚性愈傷組織的最佳培養(yǎng)基為LP。實(shí)驗(yàn)所用的三種培養(yǎng)基，其誘導(dǎo)馬尾松胚性愈傷組織的誘導(dǎo)率分別為DCR10％，LPGR13.3％，LM1.7％。LP培養(yǎng)基與DCR培養(yǎng)基對胚性愈傷組織誘導(dǎo)率相差不大，但在后期的增殖培養(yǎng)中DCR培養(yǎng)

6、基上誘導(dǎo)產(chǎn)生的胚性愈傷組織在增殖過程中水化現(xiàn)象嚴(yán)重，胚性愈傷組織增殖倍數(shù)小，2次繼代后基本死亡，LP培養(yǎng)基上誘導(dǎo)產(chǎn)生的胚性愈傷組織在后期的增殖過程中增殖倍數(shù)和愈傷狀態(tài)以及繼代次數(shù)均高于DCR培養(yǎng)基。LM培養(yǎng)基上誘導(dǎo)產(chǎn)生極少量的胚性愈傷組織，在后期增殖過程中死亡。單因素方差分析顯示，培養(yǎng)基類型對誘導(dǎo)胚性愈傷組織有顯著的影響。
　　 5.誘導(dǎo)馬尾松胚性愈傷組織的最佳激素組合為：1.5mg/L2，4-D+1.0 mg/L6-BA該激素

7、濃度的處理，胚性愈傷組織誘導(dǎo)率最高可達(dá)8.33％：蔗糖對胚性愈傷組織的誘導(dǎo)影響不顯著，但是在含有高濃度蔗糖的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)產(chǎn)生的胚性愈傷組織在后期的增殖培養(yǎng)中增殖倍數(shù)較大，且增殖能力很強(qiáng)。不同激素水平下誘導(dǎo)出的胚性愈傷組織在后期的增殖過程中增殖倍數(shù)不同和愈傷質(zhì)量有顯著差異；同一激素水平下誘導(dǎo)產(chǎn)生的不同細(xì)胞系的胚性愈傷組織在后期的增殖過程中增殖倍數(shù)和愈傷質(zhì)量有亦較大的差異，但差異不顯著。
　　 6.本文還對誘導(dǎo)產(chǎn)生的兩類不同的愈傷組