PCOS患者FSHR基因多態(tài)性及INSR和TOx-3基因甲基化研究.pdf

1、多囊卵巢綜合癥(Polycystic Ovarian Syndrome，PCOS)是一種非常常見的女性內(nèi)分泌紊亂疾病，在育齡婦女人群中發(fā)病率約6％～12％，約75％的PCOS患者不孕，成為威脅女性生殖健康的頑疾。PCOS主要表現(xiàn)為下丘腦-垂體-卵巢軸平衡的失調(diào)及全身的代謝紊亂。其典型臨床特征為月經(jīng)不規(guī)則、慢性不排卵、肥胖、多毛、高雄激素血癥，部分伴隨代謝異常。同時(shí)PCOS表現(xiàn)出臨床異質(zhì)性，其不但影響生殖健康，而且還引起糖尿病、高血壓、子

2、宮內(nèi)膜癌等遠(yuǎn)期并發(fā)癥，對(duì)健康的危害很大。
　　基于PCOS患者具有家族遺傳性和異質(zhì)性的特點(diǎn)，強(qiáng)烈提示PCOS是由遺傳和環(huán)境兩方面共同作用產(chǎn)生的。但是，由于技術(shù)手段和PCOS低生育率、臨床異質(zhì)性等客觀因素的限制，一直以來使得PCOS的病因?qū)W研究進(jìn)展緩慢。
　　PCOS有明顯的家族聚集性，且易在一級(jí)親屬中發(fā)生，提示遺傳因素為其病因?qū)W上的一個(gè)重要因素。尋找PCOS相關(guān)候選基因的成為研究熱點(diǎn)。經(jīng)過幾十年的研究，相繼有100多個(gè)相關(guān)功

3、能候選基因被篩查和報(bào)導(dǎo)。同時(shí)全基因組關(guān)聯(lián)分析(GWAS)也已經(jīng)用于PCOS的研究。至今還沒有發(fā)現(xiàn)與PCOS確切相關(guān)的一個(gè)或幾個(gè)特異基因，也很少有可重復(fù)性的結(jié)論。
　　表觀遺傳學(xué)沒有改變DNA序列卻可以改變基因的表達(dá)，異常的表觀遺傳學(xué)修飾參與了多種疾病的發(fā)生和遺傳，可能是環(huán)境因素影響疾病發(fā)生的中間介質(zhì)。與DNA改變不同的是，許多表觀遺傳的改變是可逆的，這就為疾病的治療提供了樂觀的前景。目前關(guān)于PCOS和DNA甲基化之間直接聯(lián)系的報(bào)道

4、還不多，研究潛力很大。
　　在本研究中，我們分別從基因多態(tài)性和表觀遺傳學(xué)角度分別對(duì)PCOS進(jìn)行研究，試圖探索PCOS病因的。期望能夠打破PCOS遺傳學(xué)研究的瓶頸，在PCOS發(fā)病機(jī)制的研究中有所突破。
　　第一部分:FSHR基因Ala307Thr和Ser680AsnSNP(rs6165，rs6166)與PCOS相關(guān)性研究
　　PCOS的重要表現(xiàn)之一就是下丘腦—垂體—卵巢軸功能紊亂。卵泡刺激素(FSH)是男女兩性體內(nèi)都很重

5、要的激素之一，調(diào)控著發(fā)育、生長(zhǎng)、青春期性成熟、以及生殖相關(guān)的一系列生理過程，是下丘腦—垂體—卵巢軸系統(tǒng)中重要的一種激素。FSH的生理功能是通過靶細(xì)胞膜上的卵泡刺激素受體(FSHR)介導(dǎo)的，因此，F(xiàn)SHR蛋白功能的穩(wěn)定對(duì)于FSH生物功能的發(fā)揮有著密切的關(guān)系，F(xiàn)SHR基因的突變和單核苷酸多態(tài)性勢(shì)必極大程度地影響性腺功能。
　　基于此，我們分析比較了FSHR基因中兩個(gè)最常見的單核苷酸多態(tài)性(SNP)(rs6165，rs6166)的基因型

6、頻率和等位基因頻率在PCOS病例組與對(duì)照組中分布的差異，并做了單倍型分析，以此來驗(yàn)證FSHR上這兩個(gè)SNP是否為PCOS的易感位點(diǎn)。
　　我們收集了無關(guān)聯(lián)的中國(guó)北方漢族384例PCOS患者和768名健康人血液樣本，通過DNA提取試劑盒提取外周血DNA樣本。利用ABI PRISM3130型基因分析平臺(tái)對(duì)FSHR中這兩個(gè)SNP進(jìn)行基因分型，并做了單倍型分析。
　　結(jié)果顯示，F(xiàn)SHR基因的這兩個(gè)位點(diǎn)為高頻率位點(diǎn)，其基因頻率在PCO

7、S病例和對(duì)照中無顯著性差異，并且單倍型頻率在病例和對(duì)照中也無顯著性差異。因此在中國(guó)北方漢族婦女中，F(xiàn)SHR基因的這兩個(gè)SNP可能不是PCOS的主要致病因素。
　　第二部分:INSR基因、TOX-3基因啟動(dòng)子甲基化與PCOS相關(guān)性研究
　　表觀遺傳學(xué)是研究基因的核苷酸序列不發(fā)生改變的情況下，基因表達(dá)了可遺傳的變化，并最終導(dǎo)致基因表型的改變的一門學(xué)科，可能是環(huán)境因素影響疾病發(fā)生的中間介質(zhì)[6]。DNA甲基化是最常見、最主要的一種

8、表觀遺傳學(xué)修飾方式，是DNA復(fù)制后發(fā)生的共價(jià)修飾作用，且和多種復(fù)雜的綜合征、多因素疾病都有密切關(guān)系[7]。
　　表觀遺傳學(xué)或許是解答PCOS病因的答案，但目前關(guān)于PCOS和DNA甲基化之間直接聯(lián)系的報(bào)道還不多，一般是根據(jù)PCOS的臨床特征來尋找候選基因。我們將INSR基因和TOX-3基因作為研究對(duì)象，在無關(guān)聯(lián)的中國(guó)北方漢族32例PCOS患者和32名健康人血液樣本中，利用MassARRAY EpiTYPER DNA甲基化定量分析技術(shù)