hOGG1基因甲基化、基因多態(tài)性與靶基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控在砷致肝損傷中的作用.pdf

1、目的：探討燃煤砷暴露致人群全血人8-羥基鳥嘌呤DNA糖苷酶（hOGG1）基因的表觀遺傳學(xué)改變，及基因多態(tài)性與靶基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控，和氧化損傷關(guān)系在肝病變過程中的作用，為砷中毒分子機制研究提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：以貴州省興仁縣燃煤型砷中毒病區(qū)207例砷暴露者為砷暴露組（包括病區(qū)非病人46例、無明顯肝病組49例、輕度肝病組65例、重度肝病組47例），非砷暴露村大果朵村選擇64例健康村民作為對照組。知情同意情況下，采集觀察對象的全血。①應(yīng)用

2、甲基化特異性PCR（MSP）法檢測其hOGG1基因甲基化水平，以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)一限制性片段長度多態(tài)性分析(PCR—RFLP)法檢測hOGG1Ser326Cys基因的多態(tài)性，以實施熒光定量PCR（RT-PCR）法檢測hOGG1、APE1、XRCC1 mRNA轉(zhuǎn)錄表達情況，化學(xué)法檢測血清超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活力、丙二醛（MDA）含量，尿8_羥基脫氧鳥嘌呤（8-OHdG）含量；②依據(jù)甲基化狀態(tài)將上述觀察

3、對象分為hOGG1基因甲基化組（34例）和hOGG1基因非甲基化組（237例），分析hOGG1基因甲基化及氧化應(yīng)激與砷致肝損傷的關(guān)系。③依據(jù)hOGG1基因多肽性檢測結(jié)果將觀察對象分為Ser/Ser組（野生型181例）和Ser/Cys＋Cys/Cys組（突變型90例），分析hOGG1基因多態(tài)性及基因甲基化與砷致肝損傷的關(guān)系。
　　結(jié)果：①病區(qū)非病人、無明顯肝病、輕度、中重度肝病組人群全血hOGG1基因甲基化陽性率分4.35、14.2

4、8、18.46、25.53％，顯著高于對照組1.56%（P<0.05），且隨著砷中毒程度的加重而增加（P<0.05）；②肝損傷組與非肝損傷組hOGG1Ser326 Cys多肽位點Ser/Ser、Ser/Cys+Cys/Cys基因型分布構(gòu)成分別為：54.60、45.40、69.77、30.23%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；③Ser/Ser組和Ser/Cys＋Cys/Cys組hOGG1基因甲基化陽性率分別為6.62%和24.44%，

5、差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；其中病區(qū)非病人病、無明顯肝病、輕度、中重度肝病人群中，基因型不同組hOGG1基因甲基化陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；⑤甲基化組hOGG1、APE1、XRCC1 mRNA轉(zhuǎn)錄表達顯著低于非甲基化，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；⑥Ser/Ser組和Ser/Cys＋Cys/Cys組hOGG1、APE1及XRCC1 mRNA轉(zhuǎn)錄水平無顯著性差異（P＞0.05）；⑦輕度和中重度肝病組hOGG1、A

6、PE1、XRCC1 mRNA轉(zhuǎn)錄表達明顯低于對照組（P＜0.05）；⑧甲基化組的血清SOD﹝（85±25）kU/L﹞、GSH-Px﹝（70±26） kU/L﹞活力、尿8-OHdG含量﹝（22.5±6.8）μg/L﹞明顯低于非甲基化組﹝(118±41)kU/L、(171±56) kU/L，（28±6.5）μg/L）﹞，甲基化組與非甲基化組血清MDA含量無顯著性差異；⑨輕度、中重度肝損傷，甲基化組的血清SOD、GSH-Px水平明顯低于非甲基

7、化組（P＜0.05），尿8-OHdG水平明顯升高（P＜0.05），其余組間無差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論：①燃煤砷導(dǎo)hOGG1基因高甲基化，進而抑制其mRNA轉(zhuǎn)錄表達，在砷致肝臟病變過程中起重要作用。②hOGG1mRNA轉(zhuǎn)錄水平降低，可能影響其DNA損傷識別功能，進而抑制APE1、XRCC1mRNA轉(zhuǎn)錄表達。③未發(fā)現(xiàn)hOGG1基因多態(tài)性影響其mRNA轉(zhuǎn)錄表達，故其不是砷中毒肝損傷的主要原因。④本研究發(fā)現(xiàn)，砷所致氧化與抗氧化失衡