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文檔簡介
1、背景和目的:
卵巢惡性腫瘤是婦科三大惡性腫瘤之一,卵巢癌在全球婦女癌癥死亡率中位居第一,嚴重威脅著人們的生命和健康,而且發(fā)病率居高不下,尤其是在發(fā)展中國家。卵巢癌的早期診斷及治療成為人類亟待解決的難題?;虻谋磉_調控主要通過遺傳學(genetics)和表觀遺傳學(epigenetics)兩種機制實現。遺傳學改變是涉及核苷酸序列改變的機制,但是就現在的科學技術水平來說也只是能解釋腫瘤發(fā)生機制中的一部分原因,表觀遺傳學機制是一種不
2、涉及DNA序列變化的可遺傳的基因表達方式的改變,目前認為表觀遺傳學是較遺傳學更為常見的基因表達調控機制,許多具有重要功能的基因是通過表觀遺傳學機制參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。DNA甲基化表觀遺傳的主要方式,是研究得最深入的作用方式,與抑制基因的表達有關,其在腫瘤發(fā)生中的作用是近年來的研究熱點。即刻早期反應基因(immediate early response gene X-1,IEX-1)在細胞凋亡、增殖、分化中起著關鍵的作用,在人類的多種腫
3、瘤中已經證實,根據腫瘤類型和發(fā)展階段的不同,IEX-1的異常表達和腫瘤的預后密切相關。本課題組前期研究發(fā)現:卵巢癌的發(fā)生發(fā)展與IEX-1的低表達有關。哺乳動物包括人類體內的DNA甲基化90%發(fā)生在二核苷酸胞嘧啶(CpG)序列,而IEX-1基因啟動子區(qū)含有豐富的易甲基化的CpG島。因此認為,IEX-1基因DNA甲基化可能與卵巢癌組織中IEX-1基因功能失活有關。本研究將對43例卵巢癌組織和3株卵巢癌細胞,采用甲基化特異性聚合酶鏈反應(me
4、thylation-specific pCR,MsP)技術、RT-PCR技術和免疫組化法檢測IEX-1基因的DNA甲基化程度和其mRNA及蛋白的表達,探討不同病理類型的卵巢癌組織中IEX-1基因的DNA甲基化程度及其與IEX-1 mRNA和蛋白表達的關系。
方法:
1.采用甲基化特異性聚合酶鏈反應(methylation-specific pCR,MsP)技術檢測不同卵巢組織和3株卵巢癌細胞中IEX-1基因的DNA甲
5、基化程度;
2.采用RT-PCR技術檢測不同卵巢組織和3株卵巢癌細胞中IEX-1基因mRNA的表達情況;
3.采用免疫組化法檢測不同卵巢組織和3株卵巢癌細胞中IEX-1基因蛋白的表達;
4.采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析。IEX-1基因的DNA甲基化程度及其mRNA和蛋白表達水平分別在不同病理類型和手術病理分期間的比較,采用Fisher精確概率法檢驗;IEX-1基因的DNA甲基化程度與其mRNA和蛋白
6、表達水平的關系,采用χ2檢驗,檢驗水準α=0.05。
結果:
1.卵巢癌組織中IEX-1基因甲基化的陽性率明顯高于對照組(44.2%;28.6%;均P
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