干化學、尿流式儀及顯微鏡尿液沉渣檢查的關(guān)系

1、向兄弟單位學習,干化學、尿流式儀及顯微鏡尿沉渣檢查的關(guān)系,三零一醫(yī)院,叢玉隆,,尿液沉查鏡檢歷史,Ismail（1000年前），宏觀在對尿液進行分析Bright（1827年）首次發(fā)現(xiàn)管型Bird（1854年）Purdy（1900年）進一步證明了尿沉渣檢查的臨床價值A(chǔ)ddis（1948年）建立了尿沉渣物定量檢查法美國NCCLS（1991年）提出了“尿常規(guī)分析”的推薦標準（GP16-P）；經(jīng)過四年實踐以提出了“尿液分析和尿液標本采

2、集、轉(zhuǎn)運和保存”（1995年）的標準文件（GP-16A）日本JCCLS（1995年）制定了“尿沉渣檢查標準）中華醫(yī)學會第一次全國臨床檢驗學術(shù)會議（1983年會議）提出了尿常規(guī)檢查標準化問題中華醫(yī)學會檢驗分會臨床血液學檢驗與尿液分析專題研討會提出了我國尿沉渣的推薦標準（1995年武夷山會議）。,尿常規(guī)檢查的重要意義,泌尿系統(tǒng)疾病的診斷和療效觀察,其它系統(tǒng)疾病的診斷,職業(yè)病的輔助診斷,安全用藥的監(jiān)護,尿液常規(guī)檢查項目,沉渣顯微鏡檢,化

3、學成份分析,外觀檢查,尿液沉渣顯微鏡檢查,尿沉渣顯微鏡檢的重要意義,尿沉渣檢查標準化,標準化尿沉渣檢查方法,,,標準化尿沉渣檢查方法,標準沉渣檢查系統(tǒng),自動充液儀檢查,倒置顯微鏡檢查法,Censide 檢查系統(tǒng),,干化學紅、白細胞檢測與鏡檢的關(guān)系,,,干化學尿紅、白細胞檢查與鏡檢關(guān)系,尿沉渣顯微鏡檢查是診斷泌尿系統(tǒng)疾病的金標準，對診斷、鑒別、予后分析具有重要的意義，迄今為止，尚無一臺儀器能完全替代顯微鏡檢查。,,,,9,解放軍總醫(yī)院,,

4、,,10,解放軍總醫(yī)院,干化學尿紅、白細胞檢查與鏡檢關(guān)系,尿沉渣的標準化、規(guī)范化 操作規(guī)程為：尿液10ml，離心5分鐘，相對離心力（RCF）為400 g，剩余沉淀為0.2ml，混勻后吸沉淀物約20μl，滴入玻片上，用18mm×18mm蓋玻片覆蓋后鏡檢。先用低倍鏡（10×10）觀察全片，高倍鏡（10×40）仔細觀察，細胞檢查10個高倍視野（HP），管型檢查20個低倍視野（LP）。報告方式：個細胞

5、/HP，個管型/LP。 美國NCCLS文件，推薦使用一次性尿檢測板，并用XXul報告，國內(nèi)專家亦認為應(yīng)逐步在我國施行個/ul的報告。,,干化學尿紅、白細胞檢查與鏡檢關(guān)系,規(guī)范的尿沉渣鏡檢在常規(guī)工作的可行性與篩選規(guī)范的尿沉渣鏡檢是保證尿液分析結(jié)果準確的基礎(chǔ)，原則上每個尿液標本都采用這種方法檢查，但目前化驗室人員少，工作量大，每天有幾十甚至于幾百個標本需要及時報告，要使用規(guī)范的鏡檢及時地發(fā)出報告是困難的，最好尋找一個簡單、

6、快速的方法進行過篩，即將完全正常的標本篩去后，對異常的標本進行規(guī)范性檢查。干化學尿液分析儀提供了過篩的手段。,,,,11,解放軍總醫(yī)院,干化學尿紅、白細胞檢查與鏡檢關(guān)系,干化學尿紅、白細胞篩選的概念與原則 所謂過篩就是在儀器、試帶符合實驗要求，檢驗人員相對穩(wěn)定的條件下制定的一個標準，達到此標準可視為尿沉渣成份在正常范圍內(nèi)，可免去進一步顯微鏡檢查。如果一個標本經(jīng)過干化學、鏡檢兩種方法檢查，干化學結(jié)果符合過篩標準，鏡檢結(jié)果在正

7、常范圍內(nèi)，說明過篩是正確的。干化學結(jié)果不符合過篩標準，鏡檢結(jié)果也異常，也說明過篩標準是正確的。干化學結(jié)果異常，鏡檢結(jié)果正常視為假陽性，反之干化學結(jié)果正常，鏡檢結(jié)果異常視為假陰性。,,,,12,解放軍總醫(yī)院,,鏡檢與試條同時檢測尿RBC對比,試條,鏡檢,0 0~3 3~5 6~10 11~20 21~40 ＞40,,(個/ul) (個/ul),Neg 140

8、9 81 10 1124 577 425 94 671 198 8850 73 163 273 263 35 1150 1 46 68

9、 173 282 59 17 250 1 20 33 67 139 223 256,,,,13,解放總醫(yī)院,,,,13,解放軍總醫(yī)院,,,不同正常篩選標準的RBC測定結(jié)果對比,,,分析儀,篩選標準,鏡檢異常,鏡檢正常,RBC≥3~5/HP,RBC≤0~2/HP,敏感性(%) 特

10、異性(%) 假陽性(%) 假陰性(%),正常(RBC陰性),0 1490 100 35.8 55.1 0,異常(RBC≥u/l),2183 2676,正常(RBC≤10u/l),4 3191 99.8 76.6 30.9 0.13,異常

11、(RBC≥25u/l,2179 975,正常(RBC≤25u/l),294 3862 86.5 92.7 13.8 7.1,異常(RBC≥50u/l),1889 304,,,,14,解放軍總醫(yī)院,鏡檢與試 條同時檢測尿 WBC對比,,鏡檢 0 0-3 0-5 3-5

12、 6-10 11-20 >20,Neg 2638 614 112 51,25 346 1070 244 249 132 43 15,100 5* 32 30 85 104

13、 129 49,500 0 8* 5* 7 42 82 234,,23(蛋白陽性)9（RBC陽性）7（Nit陽性）3（單核,淋巴）,9(蛋白陽性)3(Nit陽性)5(RBC陽性)2(淋巴),2(蛋白陽性)1(Nit陽性),20,3,,,,,(個/ul),(個/ul),,試

14、 條,,以試條WBC neg為篩選標準,鏡 檢,,,異常(WBC≥5~10/HP) 正常(WBC為0~5/HP),,,試條,正常(WBC為陰性),74(10) 3364,異常(WBC≥25/ul）,1171 1740,,,,16,解放軍總醫(yī)院,,以WBC≥25/ul為標準篩選鏡下管型,WBC陰性

15、,WBC＞25/ul,,,0~1 2~5 6~10 ＞10 0~1 2~5 6~10 ＞10（個/LP）,,透明管型,108 40 8 11 53 15 5 8,顆粒管型 15 21 3 6 14 11 2 1,細胞管型 11 5

16、 12 4,臘樣管型 6 1,,,,,17,解放軍總醫(yī)院,,以RBC≥25/ul為標準篩選鏡下管型,RBC≤10/ul,RBC0≥25/ul,,,0~1 2~5 6~10 ＞10 0~1 2~5 6~10 ＞10（個/LP）,,透明管型,83 28 3 2 78 27 10 1

17、7,顆粒管型 9 7 2 20 25 5 5,細胞管型 5 2 18 7,臘樣管型 2 4 1,,,,,18,解放軍總醫(yī)院,,以蛋白≥75mg/dl為標準

18、篩選鏡下管型,蛋白≤25mg/dl,蛋白≥75mg/dl,,,0~1 2~5 6~10 ＞10 0~1 2~5 6~10 ＞10（個/LP）,,透明管型,106 13 4 55 42 9 19,顆粒管型 9 6 2 20 26 3 7,細胞管型 7 5

19、 16 4,臘樣管型,,,,,19,解放軍總醫(yī)院,,以WBC≥25/ul RBC≥25/ul 蛋白≥75mg/dl為標準篩選鏡下管型,WBC陰性,蛋白25≤mg/dl,,,0~1 2~5 6~10 ＞10（個/LP）,,透明管型,29 0 0

20、 0,顆粒管型 0 0 0 0,細胞管型 0 0 0 0,臘樣管型 0 0 0

21、 0,,RBC≤10/ul,,,,20,解放軍總醫(yī)院,干化學法檢測白細胞紅細胞存在的問題,干化學法檢查尿內(nèi)白細胞的原理是基于粒細胞漿內(nèi)有酯酶可作用于試帶中的吲哚酚酯，釋放吲哚酚與重氮鹽反應(yīng)形成縮合物，其顏色與細胞的多少成比例。此法只能測定粒細胞，不與淋巴細胞反應(yīng)。尿液中污染甲醛或高濃度膽紅質(zhì)或使用某些藥物（如呋喃咀啶），可產(chǎn)生假陽性；尿蛋白>5g/L或尿液中含有大劑量先鋒Ⅳ或慶大霉素等藥物時，可使結(jié)果出現(xiàn)假陰性。

22、 引起紅細胞試驗假陽性：肌紅蛋白，易熱酶 引起紅細胞試驗假陰性：維生素C,,,,21,解放軍總醫(yī)院,干化學尿紅、白細胞檢查與鏡檢關(guān)系,細胞破壞造成的“假陽性”現(xiàn)象：所謂“假陽性”、“假陰性”是以顯微鏡檢查為基礎(chǔ)的。由于干化學是檢測細胞胞漿內(nèi)涵物來確定細胞的有無.在實際工作中可能存在下列問題：⑴由于尿液在膀胱貯存時間過長，導致白細胞破壞，酯酶釋放到尿液中，造成干化學陽性，鏡檢陰性的所謂“假陽性”現(xiàn)象。⑵腎病患者，紅細胞在腎臟或

23、泌尿道破壞，或尿比重過低、尿PH偏高均易造成經(jīng)細胞破壞血紅蛋白釋放尿中，造成所謂紅細胞干化學檢查的“假陽性”現(xiàn)象。,690例標本尿干化學紅細胞檢查與統(tǒng)檢結(jié)果分析,,,,,23,解放軍總醫(yī)院,鏡檢,鏡檢,干化學檢查,單克隆潛血板,陽性105例(細胞破壞引起“假陽性”),加熱煮沸后干化學檢查,全部為陰性(易熱酶引起假陽性),,,,,,,,690例,陽性360例,陰性330例,陰性330例(符合),陽性0例,陽性142例(符合),陰

24、性218例,,,,,,,,陰性113例,干化學過篩應(yīng)用范圍的局限性(1),腎科及泌尿科病人尿液不適合于干化學過篩顯微鏡檢查。即無論干化學結(jié)果如何，均應(yīng)做顯微鏡檢查。鏡檢結(jié)石、結(jié)晶、腫瘤細胞作為診斷依據(jù)或觀察療效時，不宜用干化學方法過篩。由于干化學分析干擾因素較多，且不可避免的有一定的假陰性率，因此要結(jié)合臨床表現(xiàn)判斷結(jié)果，決不可只看干化學分析，忽視鏡檢。尿液的外觀（特別是顏色、濁度）與尿沉渣有一定相關(guān)關(guān)系，當尿液外觀異常時，應(yīng)注意顯

25、微鏡檢查。,,,,24,解放軍總醫(yī)院,干化學過篩應(yīng)用范圍的局限性(2),干化學試帶的質(zhì)量、穩(wěn)定性及質(zhì)量控制與過篩的準確性密切相關(guān)。儀器及干化學試帶一定要符合要求：儀器的正常運轉(zhuǎn)和試帶質(zhì)量合格取得是實驗結(jié)果的基本保證。筆者制定上述標準使用的是BM公司的Midiitron尿液分析儀及Combur10TestM配套試帶.每個實驗室使用過篩標準時，首先必須做對照觀察（所用干化學試帶與顯微鏡對比），確認儀器試帶的敏感性與特異性是否符合過篩標準的

26、要求。,,,,25,解放軍總醫(yī)院,尿流式細胞儀 與鏡檢關(guān)系,流式細胞儀的原理與分類,流式細胞儀,,通用型,專用型,,科研型,臨床型,,網(wǎng)織紅細胞分析儀,血細胞分析儀,尿沉渣分析儀,,導電率,尿?qū)щ娐?前向散射光,流式細胞測定法,熒光,電阻抗測定,電阻抗信號,前向散射光強度,熒光脈沖寬度,熒光強度,前向散射光脈沖寬度,細胞體積,細胞長度,染色部分長度,染色強度,細胞大小,電阻抗,紅細胞,散射圖,酵母細胞結(jié)晶小圓上皮

27、病理管型,細菌,白細胞,上皮細胞,管型,前向散射光直方圖,前向散射光直方圖,紅細胞參數(shù),白細胞參數(shù),,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,氬激光,尿樣品,,,,,,,,,,,,,,,,,,電極,電阻信號放大器,稀釋,導電率感應(yīng)器,熒光信號放大器,染色,鞘液,前向散射光信號放大器,,,,,,,,,流式細胞儀測定原理簡圖,,流式細胞儀原理,尿流式細胞儀與鏡檢的關(guān)系,UF可提供客觀的形態(tài)學指標，尤其對球性血尿和非球性血尿的鑒別,UF

28、可直接進行定量檢測，簡單、快速,尿流式細胞儀紅、白細胞檢查仍是鏡檢篩選,干化學尿與流式“篩選”之比較,尿流式較鏡檢的優(yōu)勢與局限性,再 見,尿沉渣檢查的重要意義,檢查內(nèi)容：上皮細胞、血細胞、管型及結(jié)晶臨床意義：,上皮細胞,,扁平上皮,大圓上皮,尾型上皮,小圓上皮,血細胞,,白細胞及膿細胞,紅細胞,尿沉渣檢查的重要意義,臨床意義：,管型,,透明管型,細胞管型,顆粒管型,蠟樣管型,,白細胞管型,紅細胞管型,上皮細胞管型,,細粒管型,粗粒管

29、型,脂肪管型,腎衰竭管型,尿沉渣檢查的重要意義,臨床意義：,結(jié)晶,,磺胺結(jié)晶,堿性結(jié)晶,酸性結(jié)晶,亮氨酸及絡(luò)氨酸結(jié)晶,,三價磷酸鹽,尿酸銨結(jié)晶,非晶型磷酸鹽,,尿酸結(jié)晶,草酸鈣結(jié)晶,非晶型磷酸鹽,尿沉渣鏡檢進展,1.采用干涉、相差、偏振光、掃描及透射電鏡鑒別管型,2.有用活體染色及細胞化學染色識別各種管型,3.應(yīng)用單克隆抗體技術(shù)識別各種細胞,尿沉渣鏡檢進展,尿中紅細胞形態(tài),尿中白細胞形態(tài),尿沉渣鏡檢進展,S 染色各種上皮細胞形態(tài),

30、尿沉渣鏡檢進展,S 染色各種管型形態(tài),尿沉渣鏡檢進展,S 染色各種管型形態(tài),復(fù)檢條件,一 REVIEW 標記,計數(shù)錯誤總數(shù) ? 40,000電導率錯誤電導率 ? 5ms/cm或 ? 38ms/cm界標錯誤RBC-Fl-DWSD ? 40 ch 或紅細胞數(shù) ? 2.5/?l且其 Fsc > 200ch 或紅細胞數(shù) ? 15 /?l時未溶解的RBC% ? 20%,二 菌尿,UF在鑒別血尿來源中的應(yīng)用,301

31、醫(yī)院用此儀器對隨機95例腎小球性和非腎小球性出血病人的尿紅細胞形態(tài)進行了觀察，以臨床診斷腎小球病變（腎活檢）為標準，以此儀器檢測尿非均一性紅細胞為腎小球病變診斷依據(jù)，結(jié)果：,敏感性：100％，特異性：78.2％,UF在鑒別血尿來源中的應(yīng)用,急性腎小球性腎炎病人尿液測定結(jié)果,UF在鑒別血尿來源中的應(yīng)用,慢性腎小球性腎炎病人尿液測定結(jié)果,UF在鑒別血尿來源中的應(yīng)用,前列腺癌病人尿液測定結(jié)果,UF在鑒別血尿來源中的應(yīng)用,腎結(jié)石病人尿液測定結(jié)果

32、,UF在鑒別血尿來源中的應(yīng)用,慢性膀胱炎病人尿液測定結(jié)果,尿沉渣成分 主要臨床意義 紅細胞 月經(jīng)、過度運動、各種腎，泌尿系統(tǒng)如外傷 、 腎 小管炎癥、結(jié)石、結(jié)核、腫瘤、急性腎小球腎炎 白細胞

33、 各種腎損害、泌尿道感染、腎盂腎炎 上皮細胞 腎小管上皮細胞 腎實質(zhì)腎小管受損 鱗狀上皮細胞 正常人或污染 管型 寬型 嚴重腎疾病 腎上皮細胞 腎小管退化、變性 脂肪 腎

34、病綜合征 顆?；蛳灅?腎實質(zhì)損害 透明 酸性尿-含高鹽，多為病理性 細菌 泌尿道感染 脂肪體(卵圓小體) 腎病綜合征,各種尿沉渣成分主要臨床意義,,,,,尿沉渣染色的臨床意義,SM染色： 管型的鑒別巴氏染色： 識別細胞甲苯胺蘭： 觀察管型與核結(jié)構(gòu)過氧

35、化酶： 鑒別粒細胞與上皮細胞管型非特異酯酶：識別單核細胞油紅O、蘇丹Ⅲ：脂肪變性細胞酸性磷酸酶：區(qū)分腎上皮細胞與前列腺細胞,,方法 白細胞 紅細胞普通載玻片不加蓋玻片法15.0 17.0載玻片加蓋玻片法 12.0 15.0改良Neubauer 10.2

36、 9.9Fast-Read-10R定量板法 9.3 7.0,四種常見尿沉渣檢查法CV%值比較,,,,,單克隆抗體免疫過氧化物酶染色檢查特異細胞,抗體名稱 對應(yīng)的特異細胞FMC 10 粒細胞FMC 32 單核細胞A

37、MDT 4 輔助/支持T淋巴細胞Huly-m8 細胞毒/抑制T淋巴細胞URO 1 腎小球/輸尿管上皮細胞URO 3 近曲小管上皮細胞URO 5 亨利襻/遠曲小管/集合管/輸尿管URO 7

38、 亨利襻URO 9 輸尿管,,,,,急性腎小管壞死、急性間質(zhì)性腎炎、新月形腎炎尿中各種細胞數(shù)量及鑒別,細胞數(shù)/ml 急性腎小管壞死 急性間質(zhì)性腎炎 新月形腎炎總細胞數(shù) 42500±6000 633300±28800 138400±61600粒細胞數(shù) 6600

39、7;1100 596700±2870046500±25000單核細胞 1500±800 6800±60016300±8400CD4淋巴細胞 40±30 2300±12007300±4700CD8淋巴細胞 100±100 2000±

40、11004100±1800腎小球上皮細胞 500±400 1500±90011800±3800近曲小管上皮細胞 17700±4200 12200±620029800±14000遠曲小管/集合管上皮細胞 7400±1700 15200±85008400±4200亨利襻

41、 4500±2300 1800±9004600±3200輸尿管上皮 3400±700 3600±16004100±1500,,,,操作規(guī)程為：尿液10ml，離心5分鐘，相對離心力（RCF）為400 g，剩余沉淀為0.2ml，混勻后吸沉淀物約20μl，滴入玻片上，用18mm×18mm蓋玻片覆蓋后鏡檢。先用低