短鏈氯化石蠟和磷系阻燃劑的內(nèi)分泌干擾效應(yīng)研究.pdf

1、內(nèi)分泌干擾物作為一種干擾生物體內(nèi)維持自穩(wěn)及調(diào)節(jié)發(fā)育過程中激素的產(chǎn)生、釋放、代謝、結(jié)合、排泄、交互作用的外源性物質(zhì)，是近年來環(huán)境科學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。但是，目前中國關(guān)于內(nèi)分泌干擾物潛在生態(tài)和健康風(fēng)險(xiǎn)的研究處于起步階段，也缺乏能夠快速、有效地對化合物內(nèi)分泌干擾效應(yīng)進(jìn)行高通量篩選的平臺。本論文以短鏈氯化石蠟(SCCPs)和磷系阻燃劑(OPFRs)為主要研究對象，通過構(gòu)建以中國倉鼠卵巢癌細(xì)胞(CHO)為宿主細(xì)胞的雌激素受體α(ERα)、甲狀腺

2、激素受體β(TRβ)、糖皮質(zhì)激素受體(GR)和鹽皮質(zhì)激素受體(MR)介導(dǎo)的雙熒光報(bào)告基因系統(tǒng)，并結(jié)合人腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞(H295R)類固醇實(shí)驗(yàn)和分子對接實(shí)驗(yàn)，評價了在環(huán)境中檢出率很高的三種SCCPs和九種OPFRs的內(nèi)分泌干擾效應(yīng)。主要的研究工作和成果分為以下兩部分:
　　(1)SCCPs的潛在內(nèi)分泌干擾效應(yīng)研究:本論文主要采用雙熒光報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)和H295R細(xì)胞類固醇實(shí)驗(yàn)兩種體外模型研究了三種SCCPs的雌激素、甲狀腺激素和糖皮質(zhì)

3、激素干擾效應(yīng)。報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果顯示，三種SCCPs均能產(chǎn)生ERα介導(dǎo)的雌激素激動效應(yīng)，效應(yīng)強(qiáng)弱順序?yàn)镃11-43.20％＞C10-66.10％＞C10-40.40％，相應(yīng)的REC20值分別為6.5×10-9mol/L(M)、2.7×10-8M和2.8×10-7M。C10-40.40％和C10-66.10％還具有ERα介導(dǎo)的雌激素拮抗效應(yīng)，相應(yīng)的R.IC20值為1.1×10-7M和5.4×10-7M。只有C11-43.20％表現(xiàn)出糖皮質(zhì)激

4、素拮抗效應(yīng)，RIC20為2.6×10-8M。在10-6M下，三種SCCPs均能引起雌二醇分泌量增加，C11-43.20％顯著促進(jìn)了可的松的分泌。實(shí)時定量熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)結(jié)果顯示SCCPs能顯著上調(diào)StAR、17βHSD、CYP11A1、CYP11B1、CYP19和CYP21等基因的表達(dá)。
　　(2)OPFRs的糖皮質(zhì)激素和鹽皮質(zhì)激素效應(yīng)研究:在本研究中，采用雙熒光報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)和H295R類固醇實(shí)驗(yàn)，并結(jié)合分子對接

5、模擬評價了九種OPFRs的糖皮質(zhì)激素和鹽皮質(zhì)激素干擾效應(yīng)。報(bào)告基因結(jié)果顯示，九種OPFRs均未產(chǎn)生糖皮質(zhì)激素或鹽皮質(zhì)激素激動效應(yīng)。TMPP、TPHP和TDBPP等三種OPFRs表現(xiàn)出了糖皮質(zhì)激素拮抗效應(yīng)，RIC20值分別為1.2×10-6M、2.6×10-6M和1.1×10-6M。TNBP、TMPP、TPHP、TDCIPP和口TDBPP等五種OPFRs產(chǎn)生了鹽皮質(zhì)激素拮抗效應(yīng)，效應(yīng)強(qiáng)弱順序?yàn)門DBPP＞TPHP＞TMPP＞TNBP＞TD

6、CIPP，RIC20值分別為7.5×10-7M、7.9×10-7M、9.5×10-7M、5.1×10-6M和5.2×10-6M。H295R類固醇實(shí)驗(yàn)顯示，在可的松和醛固酮形成通路上的八類基因（StAR、HMGR、3βHSD2、CYP11A1、CYP11B1、CYP11B2、CYP17和CYP21、）的表達(dá)倍數(shù)出現(xiàn)了不同程度變化。在2×10-6M濃度的TMPP、TPHP和TDBPP暴露下，CYP17、CYP21和CYP11B1均呈現(xiàn)顯著性