維生素類藥物的分析

1、2024年3月4日,藥物分析,主講: 羅容珍,Pharmaceutical Analysis,第十四章 維生素類藥物的分析,2024年3月4日,維生素類藥物的分析,維生素,維持人類機(jī)體正常代謝功能所必須的一類活性物質(zhì),主要用于機(jī)體的能量轉(zhuǎn)移和代謝調(diào)節(jié),體內(nèi)不能合成,須從食物中攝取。,通俗來講，即維持生命的物質(zhì)，是維持人體生命活動(dòng)必須的一類有機(jī)物質(zhì)，也是保持人體健康的重要活性物質(zhì)。維生素在體內(nèi)的含量很少，但不可或缺。,2024年3月4日,

2、維生素類藥物的分析,維生素,醇,從化學(xué)結(jié)構(gòu)上來講，維生素類均屬于有機(jī)化合物，但并非同一類化合物。,酯,酸,胺,酚,醛,各具有不同的理化性質(zhì)和生理作用,2024年3月4日,按溶解度分,2024年3月4日,維生素類藥物的分析方法,生物法,微生物法,化學(xué)法,物理化學(xué)法,都是依據(jù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)與生物特性來進(jìn)行分析,2024年3月4日,,,A,B1,C,D,E,Vitamins,Contents,主要講解,2024年3月4日,維生素A的

3、分析,維生素A,是一種不飽和脂肪醇，在自然蜀中主要來源于鮫類海魚肝臟中提取的脂肪油（魚肝油）。,鮫類海魚？,具有多種異構(gòu)體，有不同的名稱，其中活性最好的是維生素A1，也是通常所指的維生素A,2024年3月4日,維生素A的分析,維生素A,具有一個(gè)共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)已烯，具有多個(gè)異構(gòu)體,2024年3月4日,維生素A的分析,維生素A,具有一個(gè)共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)已烯，具有多個(gè)異構(gòu)體,維生素A醇（Retinol),2024年3月4日,維生素A的分

4、析,維生素A,具有一個(gè)共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)已烯，具有多個(gè)異構(gòu)體,維生素A醋酸酯（Vitamin A Acetate),2024年3月4日,維生素A的分析,維生素A,具有一個(gè)共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)已烯，具有多個(gè)異構(gòu)體,維生素A棕櫚酸酯（Vitamin A Palmitate),2024年3月4日,維生素A的分析,維生素A,具有一個(gè)共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)已烯，具有多個(gè)異構(gòu)體,去氫維生素A（A2 dehydroretinol),2024年3月4日

5、,維生素A的分析,維生素A,具有一個(gè)共軛多烯醇側(cè)鏈的環(huán)已烯，具有多個(gè)異構(gòu)體,去水維生素A（A3 anhydroretinol),2024年3月4日,,第一節(jié) VitA,Retinol (Vit A alcohol),VA acetate,VA palmitate,2-Cis Neovitamin Aa 4-Cis Neovitamin Ab2,4-dicis Neovitamin Ac6-Cis Isovit

6、amin Aa,2024年3月4日,第一節(jié) VitA,二、主要性質(zhì),溶解性:與三氯甲烷、乙醚、環(huán)已烷或石油醚能任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。 不穩(wěn)定性：含有多個(gè)不飽和鍵，性質(zhì)不穩(wěn)定，易被被空氣中氧或氧化劑氧化，易被紫外光裂解，特別是在加熱和金屬離子存在時(shí)更易氧化變質(zhì)從而失活。 紫外吸收：共軛多烯醇側(cè)鏈結(jié)構(gòu)，在325-328nm之間有最大吸收，可用于鑒別 與三氯化銻呈色:三氯甲烷+三氯化銻=不穩(wěn)定的藍(lán)色,2024年3月4日,第

7、一節(jié) VitA,二、鑒別試驗(yàn),1.三氯化銻反應(yīng)(Carr-Price反應(yīng)),書上的有點(diǎn)小錯(cuò)誤,2024年3月4日,第一節(jié) VitA,二、鑒別試驗(yàn),反應(yīng)應(yīng)在無水無醇條件下進(jìn)行。因?yàn)樗墒谷然R水解，而乙醇可以使碳正離子作用而使反應(yīng)不能進(jìn)行,Notice,2024年3月4日,第一節(jié) VitA,2.UV,Vit A,Vit A3,,,,,維生素A在無水乙醇鹽酸溶液中溶解,立即進(jìn)行UV掃描,在360nm處有一最大吸收峰.如1.水浴加熱30s

8、,迅速冷卻,此過程發(fā)生脫水反應(yīng),掃描時(shí)出現(xiàn)三個(gè)吸收峰,2024年3月4日,第一節(jié) VitA,2.UV,Vit A,Vit A3,,,,,3.TLC：三氯化銻顯色，磷鉬酸顯色,維生素A,去水維生素A,最大吸收峰向長(zhǎng)波方向移動(dòng)：紅移,2024年3月4日,三、含量測(cè)定,維生素A的測(cè)定CHP收載三種,HPLC法,UV,三氯化銻法,2024年3月4日,三、含量測(cè)定,UV,維生素A?；煊须s質(zhì)，包括多種異構(gòu)體，氧化降解產(chǎn)物，合成中間體，副產(chǎn)物等以及常

9、用稀釋油類。都有紫外吸收，干擾測(cè)定。,咋辦呢？,請(qǐng)用三點(diǎn)校正法！,2024年3月4日,第一節(jié) VitA,維生素A在325-328nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)具有最大吸收，其最大吸收峰的位置隨溶劑的不同而異。如下：,應(yīng)用三點(diǎn)校正法時(shí)要注意,2024年3月4日,第一節(jié) VitA,,,,,A,nm,Vit A sample,pure VA acetate,impurities,測(cè)定原理,,雜質(zhì)的吸收在310~ 340 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)呈一條直線，且隨波長(zhǎng)的

10、增大吸收度減??；（假設(shè)） 物質(zhì)對(duì)光的吸收具有加和性。（真理）,,,2024年3月4日,第一節(jié) VitA,,第一法——等波長(zhǎng)差法,,,,λ2,λ1,λ3,328,340,316,A1,A2,A3,Aλ1,Aλ2,Aλ3,X1,X2,X3,設(shè)：,已知,Aλ1=A1-X1=A1-(mλ1+C),Aλ2=A2-X2=A2-(mλ2+C),Aλ3=A3-X3=A3-(mλ3+C),,VitA醋酸酯,Y=mX+C,2024年3月4日,第一節(jié) Vi

11、tA,,第一法——等波長(zhǎng)差法,,,,λ2,λ1,λ3,328,340,316,A1,A2,A3,Aλ1,Aλ2,Aλ3,X1,X2,X3,A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340),VitA醋酸酯,經(jīng)過一系列變換,得出下式,通過實(shí)驗(yàn)求出A1、A2、A3，再用純品求出K1、K2，再轉(zhuǎn)換,波長(zhǎng)為chp2010藥典規(guī)定,2024年3月4日,第二法——等吸收比法,第一節(jié) VitA,310,325,334,Aλ2=Aλ3=6/

12、7Aλ1,A1,A2,A3,Aλ2,Aλ1,Aλ3,F,L,D,M,E,A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334,VitA醇,波長(zhǎng)為chp2010藥典規(guī)定,2024年3月4日,測(cè)定方法,一、基本步驟,第一步：選擇A （A328 或A328(校正后)）,選擇依據(jù)——所選A值中雜質(zhì)的干擾已基本消除,第二步：求,,,,第三步：求效價(jià)（每克供試品所含維生素A的國(guó)際單位數(shù)）,規(guī)定,具體步驟,測(cè)定A,2024

13、年3月4日,測(cè)定方法,1IU=0.344μg Vit A 醋酸酯,1gVit A 醋酸酯=106 μg/0.344 (μg/IU) =2.907×106IU,Vit A 醋酸酯換算因子 =2.907×106 IU/1530 =1900,2024年3月4日,第四步：求標(biāo)示量(百分),測(cè)定方法,Why?,

14、2024年3月4日,第四步：求標(biāo)示量,測(cè)定方法,這是因?yàn)闃?biāo)示量是以效價(jià)的形式存在的,2024年3月4日,第四步：求標(biāo)示量,測(cè)定方法,測(cè)定含量,單位質(zhì)量1g對(duì)應(yīng)的效價(jià),效價(jià)占單位樣品質(zhì)量的百分比,效價(jià)占單位質(zhì)量的百分比,經(jīng)過變形可得下式,2024年3月4日,第四步：求標(biāo)示量,測(cè)定方法,這是因?yàn)闃?biāo)示量是以效價(jià)的形式存在的,2024年3月4日,二、第一法——純度高的VitA acetate,測(cè)定方法,①,②,λmax應(yīng)為328nm。,若λma

15、x不在326～329nm之間，則不能用本法測(cè)定，改為第二法,A值的選擇,測(cè)量吸光度,判斷,2024年3月4日,測(cè)定方法,A. 若【(Aλ/A328nm)-規(guī)定值】≤ (±0.02) —— A328不校正,B. 若【(Aλ/A328nm)-規(guī)定值】 有超過 (±0.02)者,A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340),2024年3月4日,測(cè)定方法,三、第二法——VitA alcohol,皂化法

16、6/7法,① 樣品前處理,酯 乙醚提取VA醇，洗滌，過濾異丙醇溶解殘?jiān)?在 300，310，325，334nm處分別測(cè)Ai,②,λmax應(yīng)為325nm。,若λmax不在323～327nm之間，則供試品中雜質(zhì)含量過高，改為色譜法將未皂化部分純化后進(jìn)行測(cè)定。,2024年3月4日,測(cè)定方法,A. 若(A300/A325)≤ 0.73,A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A3

17、34,B. 若(A300/A325)> 0.73色譜法純化后再測(cè),2024年3月4日,測(cè)定方法,應(yīng)用示例一,VitAD膠丸中VitA的含量測(cè)定,精密稱取本品(規(guī)格10,000VitAIU/丸)裝量差異項(xiàng)下（平均裝量0.07985g/丸）的內(nèi)容物 0.1287g 至50ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml，置另一50 ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻。以環(huán)己烷為空白，測(cè)定最大吸收波長(zhǎng)為328nm，并在下列波長(zhǎng)

18、處測(cè)得吸收度如下，計(jì)算Vit A的標(biāo)示量百分含量。,2024年3月4日,測(cè)定方法,,A=A328校正,2024年3月4日,測(cè)定方法,,2024年3月4日,測(cè)定方法,應(yīng)用示例二,稱取Vit A滴劑0.1082g(標(biāo)示量50 000I.U./g)，加環(huán)已烷至50.0ml，取出5.0ml置于另一50 ml量瓶中，加環(huán)已烷至刻度，搖勻后置石英比色皿中，以環(huán)已烷為空白，分別于以下波長(zhǎng)處測(cè)得相應(yīng)的吸收度值，試求此滴劑中Vit A的標(biāo)示量百分率：,2

19、024年3月4日,A=A328校正,測(cè)定方法,2024年3月4日,測(cè)定方法,2024年3月4日,第一節(jié) VitA,(二)HPLC,RF-HPLC同時(shí)測(cè)定人血清中Vit A和Vit E含量,色譜條件,色譜柱：C18 流動(dòng)相：甲醇-水 流速：1.2ml/min 檢測(cè)波長(zhǎng)與AUFS： 0～8min(330nm,0.25AUFS); 8min后(292nm,0.05AUFS) 內(nèi)標(biāo)：Vit A 酯,Vi

20、t A,Vit E,2024年3月4日,(三)三氯化銻比色法,第一節(jié) VitA,λmax 618nm～620nm,2024年3月4日,習(xí)題,1. 藥典中的雜質(zhì)檢查按照操作方法不同可分為下列三種類型 對(duì)照法 、 靈敏度法 、 比較法 。,2024年3月4日,習(xí)題,2. 藥物中存在的雜質(zhì)，主要來源于兩個(gè)方面，即 和 。,2024年3月4日,習(xí)題,3. 藥物中微量的氯化物在 酸性條件下與 反應(yīng)，生

21、成氯化銀的膠體微粒而顯白色渾濁，與一定量的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液（濃度為 ）在相同條件下產(chǎn)生的氯化銀渾濁程度比較，判斷供試品中氯化物是否符合限量規(guī)定。,2024年3月4日,習(xí)題,4.巴比妥類藥物具有的特性為：A. 弱堿性 B. 弱酸性 C. 易與重金屬離子絡(luò)合D. 易水解 E. 具有紫外特征吸收,2024年3月4日,習(xí)題,5. 苯巴比妥鈉與銅鹽的鑒別反應(yīng)生成物為:A. 紫色 B. 綠色 C. 藍(lán)色

22、D. 黃色 E. 紫堇色,2024年3月4日,習(xí)題,6．巴比妥類藥物在吡啶溶液中與銅吡啶試液作用，生成配位化合物，顯綠色的藥物是:A. 苯巴比妥 B. 異戊巴比妥 C. 司可巴比妥 D. 巴比妥 E. 硫噴妥鈉,2024年3月4日,習(xí)題,7. 巴比妥類藥物的鑒別方法有:A. 與鋇鹽反應(yīng)生成白色化合物B. 與鎂鹽反應(yīng)生成紅色化合物C. 與銀鹽反應(yīng)生成白色沉淀D. 與銅鹽反應(yīng)生成有色產(chǎn)物E. 與氫氧化鈉反應(yīng)

23、生成白色沉淀,2024年3月4日,習(xí)題,8. 于Na2CO3溶液中加AgNO3試液，開始生成白色沉淀經(jīng)振搖即溶解，繼續(xù)加AgNO3試液，生成的沉淀則不再溶解，該藥物應(yīng)是: A. 鹽酸可待因 B. 咖啡因 C. 新霉素 D. 維生素C E. 苯巴比妥,2024年3月4日,習(xí)題,9. 與NaNO2～H2SO4反應(yīng)生成橙黃至橙紅色產(chǎn)物的藥物是: A. 苯巴比妥 B. 司可巴比妥 C. 巴比妥 D.

24、 硫噴妥鈉 E. 硫酸奎寧,2024年3月4日,習(xí)題,10. 銀量法測(cè)定苯巴比妥鈉含量時(shí),若用自身指示法來判斷終點(diǎn),樣品消耗標(biāo)準(zhǔn)溶液的摩爾比應(yīng)為: A. 1:2 B. 2:1 C. 1:1 D. 1:4 E. 以上都不對(duì),2024年3月4日,習(xí)題,11. 用酸量法測(cè)定巴比妥類藥物含量時(shí)，適用的溶劑為: A. 堿性 B. 水 C. 酸水 D. 醇－水 E. 以上都不對(duì),20

25、24年3月4日,第二節(jié) VitB,亦稱鹽酸硫胺,具有維持糖代謝及神經(jīng)傳導(dǎo)與消化的正常功能，主要用于治療腳氣病、多發(fā)性神經(jīng)炎和胃腸道疾病,氨基嘧啶環(huán),噻唑環(huán),亞甲基,季銨,2024年3月4日,第二節(jié) VitB,性質(zhì),噻唑環(huán),溶解性,季銨,干燥品在空氣中迅速吸收4%的水分。在水中易溶，在乙醇中微溶，在乙醚中不溶，水溶液呈酸性,2024年3月4日,第二節(jié) VitB,性質(zhì),硫色素反應(yīng),噻唑環(huán)在堿性介質(zhì)中可開環(huán)，再與嘧啶環(huán)上的氨基環(huán)合，經(jīng)鐵氰化鉀

26、等氧化劑氧化成具有熒光的硫色素，后者溶于正丁醇中呈藍(lán)色熒光,2024年3月4日,第二節(jié) VitB,性質(zhì),分子中具有兩個(gè)雜環(huán)，可與某些生物堿沉淀試劑如碘化鉀、三硝基苯酚、碘溶液、硅鎢酸反應(yīng)生成恒定的沉淀,紫外吸收特性,2024年3月4日,第二節(jié) VitB,性質(zhì),維生素B1為鹽酸鹽，可呈氯化物的鑒別反應(yīng),氯化物的特征,2024年3月4日,第二節(jié) VitB,一、Identification,1.硫色素?zé)晒夥磻?yīng)——為維生素B1所特有,,－H2O

27、,2024年3月4日,,溶于丁醇，顯藍(lán)色熒光,第二節(jié) VitB,2024年3月4日,第二節(jié) VitB,取本品約5mg，加NaOH T.S. 2.5ml溶解后，加鐵氰化鉀 T.S. 0.5ml與正丁醇5ml，強(qiáng)力振搖2min，放置使分層，上層顯強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光；加酸使呈酸性，熒光即消失；再加堿使呈堿性，熒光又重現(xiàn)。,方法,2024年3月4日,第二節(jié) VitB,沉淀反應(yīng),維生素B1與碘化汞鉀生成淡黃色沉淀[B].H2HgI4,維生素B1與苦酮

28、酸生成扇形白色結(jié)晶,維生素B1與碘生成紅色沉淀[B].HI.I2,維生素B1與硅鎢酸反應(yīng)生成白色沉淀[B]2.SiO2(OH)2.12WO3.4H2O,2024年3月4日,,氯化物反應(yīng),本品是鹽酸鹽,水溶液呈氯化物的鑒別反應(yīng),硫元素反應(yīng),2024年3月4日,,紅外分光光度法,本品,對(duì)照品,對(duì)照,2024年3月4日,第二節(jié) VitB,三、含量測(cè)定,非水溶液滴定法 (Non-aqueous Titrimetry) 紫外分光光度法 (UV)

29、 硫色素?zé)晒夥?(Thiochrone Fluoremetry),2024年3月4日,第二節(jié) VitB,三、含量測(cè)定,非水滴定法原理,維生素B1分子中含有兩個(gè)堿性的已成鹽的伯胺和季銨基團(tuán),在非水溶液中均可與高氯酸作用,以電位指示終點(diǎn).根據(jù)消耗的高氯酸量即可算出維生素B1的含量.,2024年3月4日,第二節(jié) VitB,1. Non-aqueous Titrimetry,喹那啶紅－亞甲藍(lán) （紫紅→天藍(lán)）,2024年3月4日,第二節(jié)

30、 VitB,紫外分光光度法原理,維生素B1分子中含有共軛雙鍵結(jié)構(gòu),在紫外區(qū)有吸收,根據(jù)最大吸收波長(zhǎng)處的吸光度即可以計(jì)算含量.,2024年3月4日,第二節(jié) VitB,2. UV,1——0.1M HCl2——H203——H3PO4 buffer4——alcohol,,246,,,232,255,2024年3月4日,第二節(jié) VitB,3. Thiochrone Fluoremetry,硫色素?zé)晒夥?2024年3月4日,第三節(jié) VitC,

31、烯二醇結(jié)構(gòu),,,共軛酸性強(qiáng),酸性弱,﹡,﹡,,,內(nèi)酯結(jié)構(gòu),2024年3月4日,第三節(jié) VitC,一、主要性質(zhì),溶解性 酸性 旋光性 還原性,L-抗壞血酸,,,,(有生物活性),L-二酮古羅糖酸,L-去氫抗壞血酸,無生物活性,2024年3月4日,第三節(jié) VitC,水解性,糖類性質(zhì),50℃,UV,,2024年3月4日,第三節(jié) VitC,二、鑒別,1.與AgNO3反應(yīng),2.與2,6-二氯靛酚反應(yīng),氧化型,還原型,酸式色堿式色,,,3

32、.與氧化劑反應(yīng),2024年3月4日,第三節(jié) VitC,4.與糖類反應(yīng),H2O,,其它還有薄層色譜法,百分吸收系數(shù)法,2024年3月4日,雜質(zhì)檢查,溶液的澄清度與顏色檢查維生素C長(zhǎng)期貯存會(huì)被氧化變色,因而應(yīng)通過此項(xiàng)檢查控制其純度.鐵與銅離子的檢查維生素C中可能存在一些鐵與銅離子,因而可以采用標(biāo)準(zhǔn)添加對(duì)照法進(jìn)行檢查.草酸的檢查一般加CaCl2形成草酸鈣對(duì)測(cè)定其濁度.,2024年3月4日,三、含量測(cè)定(強(qiáng)還原性),第三節(jié) VitC,

33、1.碘量法,取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.05mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán)色，在30秒內(nèi)不褪。每1ml碘滴定液(0.05mol/L)相當(dāng)于8.806mg的C6H8O6,2024年3月4日,2. 2,6-二氯靛酚滴定法,第三節(jié) VitC,快速滴定，用于含Vit C的制劑與食品分析,3.HPLC,人血漿中Vit C濃度的HPLC法測(cè)定,2024年3月4日,

34、第三節(jié) VitC,標(biāo)準(zhǔn)溶液制備：取V C對(duì)照品約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加10%偏磷酸稀釋至刻度，得維生素C儲(chǔ)備液濃度為1mg/ml，置冰箱中2℃保存，3日內(nèi)可用。血漿樣品預(yù)處理：取受試者靜脈血，立即置肝素化的離心試管中，3000rpm離心5min；取血漿0.5ml，加入0.5ml 10%偏磷酸溶液，渦旋混合0.5min，離心，分取上清液，置冰箱2℃貯存，直至測(cè)定。穩(wěn)定性考察：V C在血漿中不穩(wěn)定，在5%偏磷酸溶液中也

35、難以保持長(zhǎng)期穩(wěn)定，應(yīng)盡可能縮短藥物分離和處理時(shí)間。樣品測(cè)定：每天抽取的血樣應(yīng)當(dāng)日測(cè)定，每天建立一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，并隨行測(cè)定高、中、低濃度的雙樣本質(zhì)控樣品。,2024年3月4日,第四節(jié) Vit D,膽甾醇,7-脫氫膽甾醇,維生素 D3,維生素 D2,麥角甾醇,甾醇衍生物,2024年3月4日,第四節(jié) Vit D,維生素D2 維生素D3,,溶解性:在三氯甲烷中極易溶解,在丙酮乙醇乙醚

36、中易溶. 不穩(wěn)定性:雙鍵極不穩(wěn)定,易氧化變色,毒性增強(qiáng). 旋光性:有五到六個(gè)手性碳原子,均具有旋光性. 顯色反應(yīng):在三氯甲烷+醋酐+硫酸會(huì)從黃到紫再到綠色. 紫外吸收:具有吸收基團(tuán),2024年3月4日,第四節(jié) Vit D,二、鑒別,顯色反應(yīng):,三氯甲烷+醋酐+硫酸,三氯甲烷+三氯化銻,三氯化鐵=橙黃色,初顯黃色逐漸變紅迅即變紫最后變綠,溶液顯橙紅色,逐漸變粉紅色,二氯丙醇和乙酰氯=綠色,2024年3月4日,第四節(jié) Vit

37、 D,二、鑒別,比旋度鑒別,測(cè)定比旋度進(jìn)行鑒別,其它鑒別法,TLC\HPLC\熔點(diǎn)\UV\IR等,2024年3月4日,第四節(jié) Vit D,三、雜質(zhì)檢查,1、麥角醇的檢查　　　　　　90％乙醇溶解后，加洋地黃皂苷溶液，放置18h，不得發(fā)生渾濁。2、前維生素D的光照產(chǎn)物　　　　λ＝280nm~320nm,2024年3月4日,第四節(jié) Vit D,Ch.P 2010——NP-HPLC,含量測(cè)定,USP34-NF29,化學(xué)法,色譜法,微生物

38、法,BP2010,化學(xué)法,色譜法,光譜法,2024年3月4日,固定相：硅膠 流動(dòng)相：正己烷－正戊醇（997：3） 檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm,第一法：用于無維生素A醇及其他干擾的供試品第二法：(1)皂化提取 ;(2)凈化用色譜柱系統(tǒng)分離收集維生素D，得供試品溶液B;(3)按第一法進(jìn)行測(cè)定。第三法：當(dāng)樣品經(jīng)皂化提取及凈化用色譜系統(tǒng)分離收集后，前維生素D峰仍受干擾時(shí)，采用此法。,第四節(jié) Vit D,2024年3月4日,第五節(jié) Vit E,

39、,苯并二氫吡喃醇,Vit E (dl-α-Tocopheryl Acetate),Synthetic Natural,,2024年3月4日,苯并二氫吡喃環(huán) + 飽和烴鏈,第五節(jié) Vit E,溶解性 水解性 氧化性 紫外吸收,二、鑒別,1.硝酸反應(yīng),2024年3月4日,第五節(jié) Vit E,2.三氯化鐵反應(yīng),2024年3月4日,第五節(jié) Vit E,4.三氯化鐵反應(yīng),薄層板 硅膠G,展開劑 環(huán)己烷 -乙醚

40、（4 ：1）,顯色劑 硫酸（105℃ 5′）,VitE Rf = 0.7,,,2024年3月4日,第五節(jié) Vit E,三、雜質(zhì)檢查,1.酸度2.生育酚,取Vit E 0.1g，加無水乙醇5ml溶解后，加二苯胺T.S.1滴，用硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)滴定，消耗硫酸鈰滴定液(0.01mol/L)不得過1.0ml,2024年3月4日,第五節(jié) Vit E,四、含量測(cè)定,載氣→N2固定液→硅酮（OV-

41、17）擔(dān)體→硅藻土或高分子多孔小球柱溫→265℃檢測(cè)器→氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)內(nèi)標(biāo)→正三十二烷 n ≥ 500 R≥2,1.GC——Ch.P,USP 內(nèi)標(biāo) 十六酸十六醇酯 R≥1.0,2024年3月4日,內(nèi)標(biāo)液 取正三十二烷加正己烷溶解并稀釋成1.0mg/ml溶液,對(duì)照液 精密稱取VitE對(duì)照品0.2011g置棕色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)液10ml，密塞，振搖使溶解，取 1

42、~3μl注入GC儀，測(cè)定，計(jì)算校正因子,供試液 精密稱取供試品0.1998g置棕色具塞錐形瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)液10ml，密塞，振搖使溶解，取1~3μl注入GC儀，測(cè)定，計(jì)算含量。,已知：對(duì)照液測(cè)得A對(duì)=297456，A內(nèi)=797469； 供試液測(cè)得A樣=296513，A內(nèi)=805741;,第五節(jié) Vit E,本品含C31H52O3應(yīng)為96.0 ~ 102.0%,2024年3月4日,第五節(jié) Vit E,,2

43、024年3月4日,第五節(jié) Vit E,2.HPLC——JP,樣品→ dl－α－生育酚固定相→十八烷基硅烷鍵合硅膠流動(dòng)相→甲醇-水（49 ：1）檢測(cè)波長(zhǎng)→292nm R＞2.6 RSD≤0.8%,3.FLD——同步熒光掃描法,2024年3月4日,第六節(jié) 復(fù)方制劑中維生素的分析,一、離子對(duì)HPLC測(cè)定維生素,色譜柱→ODS流動(dòng)相→A: MeOH:H2O=(200:800)[含1.1615g樟腦磺酸]

44、 B: MeOH檢測(cè)波長(zhǎng)→脂溶性:280nm；水溶性:272nm內(nèi)標(biāo)→苯酚水溶性維生素供試液配制 取維生素片粉，精密稱定，置棕色量瓶中，加DMPS 100μl，內(nèi)標(biāo)液5ml，流動(dòng)相A溶解稀釋至刻度，搖勻，過濾，備用。水溶性維生素供試液配制 取維生素片粉，精密稱定，置棕色量瓶中，加DMPS 100μl，甲醇溶解稀釋至刻度，搖勻，過濾，備用,離子對(duì)試劑,水溶性,脂溶性,抗氧劑,2024年

45、3月4日,第六節(jié) 復(fù)方制劑中維生素的分析,二、RP-HPLC測(cè)定水溶性維生素,色譜柱→ODS流動(dòng)相→A: buffer(0.05M KH2PO4,0.2% 三乙胺,pH6.0):ACN =(97:3) B: MeOH梯度洗脫程序→(0min)A:B(90:10)→ (20min)A:B(60:40) → (30min)A:B(90:10)流速→1.0ml/min檢測(cè)波長(zhǎng)→210nm柱溫