沒有幻燈片標(biāo)題-醫(yī)學(xué)全在線-國家醫(yī)學(xué)考試網(wǎng)國家醫(yī)學(xué)教育

1、組織學(xué)與胚胎學(xué),(臨床醫(yī)學(xué)專業(yè))組胚教研室制作,實(shí)驗(yàn)一,目的1、掌握光學(xué)顯微鏡正確使用方法 了解石蠟包埋術(shù)的基本程序2、脊神經(jīng)節(jié)細(xì)胞光鏡結(jié)構(gòu),緒 論,組織學(xué)教學(xué)過程包括理論課和實(shí)驗(yàn)課兩部分。實(shí)驗(yàn)課的目的主要是通過顯微鏡觀察組織切片的經(jīng)典技術(shù)方法，驗(yàn)證和鞏固所學(xué)的理論知識；加深、擴(kuò)大對所學(xué)知識的理解；掌握正確使用光學(xué)顯微鏡的方法，并培養(yǎng)同學(xué)們觀察、比較、分析、綜合各種客觀現(xiàn)象的思維方法和獨(dú)立思考的能力。,實(shí)驗(yàn)室規(guī)則

2、(1)上實(shí)驗(yàn)課時(shí)，不得遲到或早退，有事須向任課老師請假。(2)保持實(shí)驗(yàn)室清潔，不得隨地吐痰、亂仍果皮、紙屑等污物。(3)保持實(shí)驗(yàn)室安靜，不得大聲喧嘩，有問題時(shí)可以與鄰近同學(xué)小聲討論或舉手請教老師。(4)愛護(hù)室內(nèi)公共財(cái)務(wù)，如有損壞，照價(jià)賠償。(5)實(shí)驗(yàn)完畢，必須整理好切片，將顯微鏡及切片盒放回原處；值日生要整理好衛(wèi)生，關(guān)好門窗及日光燈。,一、一般光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造及其使用方法 和保護(hù)（一）光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造

3、 一般光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)包括兩部分：機(jī)械部分和光學(xué)部分。 機(jī)械部分主要包括下列部件：,１.鏡座２.鏡臂３.載物臺４.鏡筒５.物鏡轉(zhuǎn)換器６.粗調(diào)螺旋7.微調(diào)螺旋,1,2,3,4,5,6,,7,,光學(xué)部分主要包括：反光鏡、聚光鏡、目鏡和物鏡。1.反光鏡2.聚光鏡3.物鏡4.目鏡,1,2,3,4,(二)光學(xué)顯微鏡的使用方法低倍鏡的使用：1.對光：轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)螺旋，降低

4、載物臺；旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器，使10倍物鏡頭對準(zhǔn)鏡臺孔；然后升高聚光鏡，打開光圈，將反光鏡的凹面對準(zhǔn)光源，直至視野明亮為止。2.將要觀察的切片放在載物臺上，固定好，并將要觀察的部位移至中央。3.調(diào)焦距：旋轉(zhuǎn)粗調(diào)螺旋，升高載物臺，至物鏡距玻片約0.5cm時(shí)，再緩慢降低鏡臺，直到看清圖像為止。4.調(diào)節(jié)兩瞳孔間的距離：一邊用雙眼自目鏡中觀察，一邊用雙手握住兩個(gè)目鏡管，前后或左右移動，直到雙眼看到一共同視野為止。5.為使右眼圖像更清晰，可輕輕

5、轉(zhuǎn)動微調(diào)螺旋，欲使左眼圖像清晰，需旋轉(zhuǎn)鏡管長度調(diào)節(jié)環(huán)。,高倍鏡的使用： 用低倍鏡看清圖像后，將要進(jìn)一步放大的結(jié)構(gòu)移至視野中央，一邊從側(cè)面觀察，一邊旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器，將高倍鏡頭對準(zhǔn)鏡臺孔；升高聚光鏡，將光線調(diào)節(jié)到最亮的程度；然后，稍微轉(zhuǎn)動微調(diào)螺旋，即可觀察到清晰的圖像。油鏡的使用： 用低倍鏡看清圖像后，將所要觀察的結(jié)構(gòu)移至視野中央，在標(biāo)本所要觀察的部位滴一滴鏡油，旋轉(zhuǎn)物鏡轉(zhuǎn)換器，將油鏡頭對準(zhǔn)鏡臺孔，使油鏡頭下端與鏡油接觸，然后，

6、輕輕轉(zhuǎn)動微調(diào)螺旋，即可看清物像。使用油鏡時(shí)，應(yīng)把聚光鏡的光圈充分開大。 用完油鏡后，必須用擦鏡紙蘸清洗劑，將鏡頭和玻片擦凈。,（三）顯微鏡的保護(hù)1.搬動顯微鏡時(shí)，應(yīng)該用右手握鏡臂,左手托鏡座，平貼胸前，以防撞碰。切勿用一只手斜提，前后搖擺。2.每次使用顯微鏡前，要檢查顯微鏡的主要部件有無缺損，發(fā)現(xiàn)問題，及時(shí)報(bào)告。使用時(shí)，要嚴(yán)格按操作程序，正確地緩慢移動有關(guān)機(jī)械部分。3.禁止拆卸顯微鏡的各個(gè)部件，更不允許與其它顯微鏡對換，以免安裝

7、不當(dāng)影響觀察效果。4.如鏡頭表面有灰塵，應(yīng)該用擦鏡紙擦，不允許用口吹、手指抹，或用其它紙、布擦。 5.顯微鏡用完后，將4倍鏡頭對準(zhǔn)鏡臺孔，升高鏡臺，降下聚光器，打開光圈，蓋好防塵罩，放回原處。,（四）標(biāo)本觀察注意事項(xiàng)1.取切片標(biāo)本時(shí)，一定要認(rèn)清標(biāo)本盒的反正，其正面（有字的一面）朝上，方能打開盒蓋。按號取出標(biāo)本，用完后，按號放回，損壞要賠償。2.觀察標(biāo)本時(shí)，先用肉眼觀其大體形態(tài)，再用低倍鏡觀其一般結(jié)構(gòu)，需要進(jìn)一步觀察的部位，換用高

8、倍鏡，一般不用油鏡。放標(biāo)本時(shí)，一定要使有蓋玻片的一面向上。旋轉(zhuǎn)調(diào)節(jié)螺旋時(shí)，動作要輕;低倍鏡換高倍鏡時(shí)，注意不要使鏡頭碰到切片。3.觀察切片時(shí)，注意力要集中，密切聯(lián)系課堂所學(xué)理論，有步驟地進(jìn)行觀察。要求課前復(fù)習(xí)有關(guān)理論，預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)，以便在課堂上作到主動。,4.繪圖時(shí)，要選擇結(jié)構(gòu)清楚的部位，不要抄畫，也不要亂畫。圖上的注字要清楚、端正(使用紅藍(lán)鉛筆)。圖的布局：,中等動脈橫切片，HE 染色，X100,5.觀察標(biāo)本時(shí)，要注意組織細(xì)胞的斷面

9、形態(tài)與立體形態(tài)的關(guān)系。同一細(xì)胞或組織，在不同的斷面上，其形態(tài)不一樣。,石蠟切片術(shù),目的：了解組織學(xué)標(biāo)本制作的程序和各步驟的作用。標(biāo)本制作的要求：為了在光學(xué)顯微鏡下觀察機(jī)體的正常微細(xì)結(jié)構(gòu)，一定要把組織制成適合于在顯微鏡下觀察的標(biāo)本。 ①盡可能保存組織生前結(jié)構(gòu)；②標(biāo)本要透明，可容顯微鏡下的光線通過；③不同的結(jié)構(gòu)在顯微鏡下必須能顯出不同影像；④標(biāo)本可長期保存以供長期觀察。,石蠟切片標(biāo)本制作法,基本程序：取 固 脫

10、 包 切 染 封 材 定 水 埋 片 色 片,,,,,,,取材/固定：,殺死后，應(yīng)立即進(jìn)行取材和固定，以停止其分解作用。盡可能保存細(xì)胞組織生前結(jié)構(gòu)和成分。1.    取材：即從動物體內(nèi)取下器官或組織材料的過程。以取肝臟為例，取材的步驟為：將動物麻醉或殺死后，腹部向上固著在蠟盤上，打開腹部，暴露肝臟，用鋒銳

11、的解剖剪或手術(shù)刀細(xì)致而又迅速地取下一塊大小適宜（0.5cm3）的肝臟組織塊，立即投入固定液內(nèi)。2.    固定：固定是將組織用化學(xué)試劑浸泡，使其蛋白質(zhì)等成分迅速凝固，盡量保持其生前形態(tài)結(jié)構(gòu)而不發(fā)生死后的變化。固定時(shí)所使用的化學(xué)溶液，稱為固定液。常用的固定液配方：(1)Susa液：Ⅰ液氯化汞(升汞)飽和水溶液50.0mlⅡ液氯化鈉0.5g三氯醋酸2.0g冰醋酸4.0ml甲醛（40％）20.0ml蒸

12、餾水30.0ml使用時(shí)取等量的Ⅰ液和Ⅱ液混合后，將組織塊投入，固定24小時(shí)。(2)Helly干液：重鉻酸鉀2.5g氯化汞5.0g硫酸鈉1.0g蒸餾水100.0ml使用之前加入40％甲醛5.0ml。(3) 10％甲醛：40%甲醛10.0ml蒸餾水90.0ml(4)Bouin液：苦味酸飽和水溶液75.0ml40%甲醛25.0ml冰醋酸5.0ml(5)Carnoy液：無水酒精6份氯仿3份冰醋酸1份,脫水、透明、浸蠟、包埋,幾個(gè)步驟

13、是為了將組織包埋在較硬的物質(zhì)即石蠟中，以便制備較薄的石蠟切片。1.    脫水：普通固定液大多是水溶液，必須先脫去組織內(nèi)的水分，為浸蠟創(chuàng)造條件。脫水劑通常使用酒精。脫水的步驟是逐步升高酒精溶液的濃度，以去凈組織塊內(nèi)的水分，最后完全由純酒取代。Susa液固定的組織塊，須先入含碘的95％酒精，脫水并脫去組織內(nèi)的汞沉淀，然后入無水酒精。10％甲醛液固定后的組織塊，脫水時(shí)應(yīng)依次經(jīng)過70％、80％、90％、9

14、5％酒精和無水酒精。2.    透明：因石蠟不溶于酒精而溶于二甲苯，因而組織塊經(jīng)脫水后須再用二甲苯置換出酒精。組織塊浸入二甲苯后逐漸變得透明，故此步驟稱為透明。透明時(shí)間根據(jù)組織塊的大小及性質(zhì)而定。3.    浸蠟：將透明好的組織塊置入已在溫箱（58～60℃）內(nèi)熔化的石蠟內(nèi)，放置適當(dāng)時(shí)間，使石蠟浸入組織并替換出二甲苯。4.    包埋：在

15、包埋器的內(nèi)壁涂一層甘油，傾入熔化的石蠟，將浸透蠟的組織塊放入包埋器，擺好間距和方位，俟蠟液表面凝固后，將包埋器投入冷水浴中，使石蠟冷卻凝固。包埋后的組織蠟塊，經(jīng)過修整即可用于切片。,切 片,以LEICA RM2135型切片機(jī)為例介紹切片機(jī)的一般結(jié)構(gòu)： 標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)本固定夾、標(biāo)本修剪器水平調(diào)節(jié)裝置、E型持刀架、持刀架前后移動調(diào)節(jié)輪、持刀架左右移動手柄、持刀器角度設(shè)定和清除鎖定裝置、刀鋒夾桿隨意調(diào)節(jié)裝置、切片刀防護(hù)桿、粗標(biāo)本推進(jìn)手輪、切片厚度調(diào)

16、節(jié)旋鈕、切片厚度指示、細(xì)標(biāo)本推進(jìn)手輪、手輪鎖定裝置、手臂托、切片機(jī)底座等部件。 圖1-1 LEICA-RM2135型切片機(jī)的結(jié)構(gòu) ①標(biāo)本固定夾 ②持刀器角度設(shè)定和清除鎖定裝置 ③粗標(biāo)本推進(jìn)手輪 ④切片厚度調(diào)節(jié)旋鈕 ⑤切片厚度指示 ⑥細(xì)標(biāo)本推進(jìn)手輪,染色、封固,染色的目的是使組織內(nèi)的不同結(jié)構(gòu)染上不同顏色以便于在顯微鏡下觀察。 染色的方法很多，可根據(jù)研究目的選用。組織學(xué)和病理學(xué)教學(xué)標(biāo)本的基本染色方法是蘇木精-伊紅染色。該