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文檔簡介
1、游離漆酶不穩(wěn)定,對周圍環(huán)境較為敏感,難以重復(fù)利用,酶的固定化技術(shù)是近些年來解決以上問題的有效手段。本課題使用具有良好生物兼容性的330弱堿性環(huán)氧系陰離子交換樹脂(簡稱330樹脂)為載體,采用戊二醛作為交聯(lián)劑固定化漆酶,研究了載體對漆酶的固定化效果。通過單因素實驗確定漆酶的最佳單因素固定化條件:交聯(lián)劑戊二醛濃度為1%、交聯(lián)時間為8h、交聯(lián)溫度為30℃、固定化pH為3.0、酶稀釋倍數(shù)為100、給酶量體積為10 ml、PBS離子濃度為0.1
2、mol/L、固定化時間為5 h,固定溫度為25℃。
將響應(yīng)面法(RSM)應(yīng)用到漆酶固定化條件優(yōu)化體系中,考察固定化過程中多因素間的交互影響,結(jié)果表明:酶稀釋倍數(shù)是影響固定化酶活的首要因素,并且與其他2個主要影響因素交互作用明顯。優(yōu)化條件下驗證實驗結(jié)果為:固定化酶活平均結(jié)果為11.26U/g,與模型的理論值11.99 U/g的差值僅為0.73 U/g,該模型可以較好地反映出利用330樹脂固定化漆酶條件。
以AB
3、TS作為底物對固定化漆酶與游離漆酶酶學(xué)性質(zhì)進行了比較:固定化漆酶在pH=3-5的環(huán)境中保存1h,相對酶活仍然保持初始酶活的80%以上,而游離漆酶則相降至70%左右;固定化漆酶在25℃-45℃下進行固定化漆酶的熱穩(wěn)定性測試,隨著時間延長,固定化漆酶的活性下降速率明顯減緩;循環(huán)使用10批次的固定化漆酶的酶活回收達到45%以上。
固定化漆酶對剛果紅的降解最適pH值為6.0,向偏中性方向移動;剛果紅濃度為10 mg/L時,脫色效果
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