凝血分析前變異

1、凝血分析前變異,SYSMEX市場部李強,,凝血檢查結果的影響因素,,采血樣本處理,,溶解處理,,狀態(tài)機械維護保養(yǎng),樣本,試劑,分析儀,,病人,狀態(tài),,實驗室誤差分析,Plebani和 Carraro分析了40,490份為期3個月的帕多瓦大學醫(yī)院的實驗室的結果 - 189 個誤差 (0.47%)13% - 分析中18% - 分析后68% - 分析前189個有誤差的結果中有四分

2、之一導致了不必要的檢查和不恰當?shù)闹委熀妥o理。.Mario Plebania and Paolo Carraro. Mistakes in a stat laboratory: Types and frequency. Clinical Chemistry. 1997;43:1348-1351.,,,病人- 相關變異因素,飲食,肥胖,年齡,月經(jīng),藥物,酒精,血型,吸煙,性別,,,,,,,,,,“O’ 型血的 vWF 和 FVI

3、II 比非“O”.型血活性低,阿司匹林，華發(fā)林，肝素等影響凝血和血小板功能,酒精能夠抑制血小板的功能,富含維生素K對華發(fā)林有反作用 (INR 下降).,妊娠,絕經(jīng),女性出血時間更長,不同的狀態(tài)凝血功能不一樣,促凝因子增加 纖溶功能減弱 AT和 PC 活性升高,與心血管疾病有關. FVII抗原和活性升高,許多凝血因子隨著年齡的增加而升高,Altered, Coagulation Lysis Or Thrombosis:

4、The Clotting Times, volume 4, Issue 1, April 2004,樣本的質量最為重要，因此控制好樣本的采集程序非常必要,采血方法抗凝劑 (類型和用量)樣本量,分析前變異,,,樣本處理 準備 儲存 復溶和穩(wěn)定性,樣本采集,分析前變異,?　

5、靜脈穿刺正確：CLSI 推薦采用含有抗凝劑的真空采血裝置如果使用注射器，需要使用小容量的注射器 (≤20 mL)，材質使用塑料或硅化的玻璃錯誤止血帶壓迫時間延長導致組織液滲出和溶血，理想的情況應該是止血帶使用時間不超過1分鐘使用注射器/針頭會增加溶血和凝血的風險 抽血不順利會影響結果,分析前變異,?　靜脈穿刺正確應該根據(jù)采血量、病人的年齡、靜脈的大小決定合適規(guī)格的針頭 如果使用靜脈留置管采樣，首先吸取5mL血液潤洗

6、管道，減少肝素的污染。錯誤避免創(chuàng)傷引起溶血。小的針頭會引起血小板的破壞和溶血,分析前變異,?　推薦的采血順序 凝血樣本應該放在第二或第三管 血培養(yǎng)管 普通血清玻璃管 凝血樣本枸櫞酸鈉抗凝管 凝膠血清分離管/普通血清塑料管 肝素管

7、 EDTA血常規(guī)管 葡萄糖管,,,? 樣本管的混勻 正確血液進入試管后，輕輕的顛倒混勻3到4次 錯誤不要使用試管搖床 混勻次數(shù)用力過猛或次數(shù)過多，容易引起溶血和血小板激活,,分析前變異,= 1 inversion,分析前變異,? 抗凝劑類型正確推薦枸櫞酸鈉濃度 105 to 109 mmol/L, 3.13% to 3.2% 錯誤其他濃

8、度(3.8%)和其他抗凝劑(例如：草酸鈣，肝素，EDTA),分析前變異,? 血液/抗凝劑比率正確9：1錯誤充盈不足，血液/抗凝劑比例下降，導致結果假性延長充盈過度，血液/抗凝劑比例升高，引起結果錯誤或標本凝固,分析前變異,? 抗凝劑濃度調整當壓積大于55%，需要調整抗凝劑比例對壓積低于20%的血液，暫時沒有推薦的調整比例.,計算公式：X = (100 - PCV)/(595 - PCV)X為每毫升抗凝標本所用抗凝

9、劑的量PCV為紅細胞壓積，單位為%,Pre-Analytical Variables,? 離心 正確為獲得乏血小板血漿(PLT < 10,000/mL)：常溫狀態(tài)下，離心力 1500 g 至少離心 15分鐘。 新鮮樣本，PLT大于200,000/mL，PT/INR, APTT 和 TT不受影響。 Carroll WE, Wollitzer AO, Harris L et al. The sign

10、ificance of platelet count in coagulation studies. J Med.2001;32;83-96水平式轉子離心機，不能使用剎車,分析前變異,? 離心錯誤血小板濃度高會引起LA假陰性血小板的存在是對肝素治療的監(jiān)測產(chǎn)生干擾 Þ Platelet factor 4 (PF4) 中和肝素導致APTT不延長,分析前變異,? 運輸和儲存錯誤試管不閉蓋 = CO2丟失=

11、pH升高 = PT 和 APTT延長,分析前變異,? 運輸和儲存錯誤溫度過高 = FV 和 FVIII 降解 = PT 和 APTT延長.溫度過低 (2- 4oC) = 冷激活 FVII = PT 縮短，尤其是沒有硅化處理的枸櫞酸鈉試管,分析前變異,? 檢測時間和保存溫度.,TT、PC、因子V、因子VIII等自血液樣本采集之時起，4小時內必須完成離心和檢測,分析前變異,? 運輸和保存 如果不能在規(guī)定的時間內運輸?shù)?/p>

12、達目的地，必須離心分離血漿并且冰凍保存-20oC 2 周以上-70oC 6 月以上 不要使用無霜冰箱冰凍血漿許 37oC 快速復溶，立即檢測.樣本檢測前在 4oC 最多放 2 小時,其他分析誤差來源,試劑相關的問題分析儀器,,溶解處理,,狀態(tài)機械維護保養(yǎng),試劑,分析儀器,嚴格按照說明書要求做,試劑相關問題,,有效期? 儲存條件穩(wěn)定性,,,,,,水的質量溶解程序有效期?,,,,,溶解,處理,,試劑相關

13、問題,? 水質 I 級水：用于檢測試劑，要求干擾最小 II 級水：用于常規(guī)檢測方法 III級水：用于沖洗玻璃器皿,NS: 沒有特別要求.,活性炭或蒸餾或反滲透,Type I,Type II,Type III,10,1000,NS,NS,NS,5.0–8.0,10 (inline),1.0,0.1,0.05,0.1,1.0,0.22-μm filter,NS,NS,NS,NS,最大微生物量 (CFU/mL),pH,最小電阻 (M

14、W/cm),最大硅酸鹽濃度 (mg/L),顆粒物質,有機污染物,,,,,,,,,,,NCCLS Document C3-A3. 1997,? 水質NCCLS 指南推薦I級水用于凝血試驗.試劑要求使用雙蒸水.使用商業(yè)化的水，無需檢查電阻，微生物數(shù)量等.高pH會凝固試驗時間延長.混濁的水表示有污染或存在鈣離子.,試劑相關問題,試劑相關問題,? 溶解程序 不正確的溶解比例或量污染常常是誤差的來源 1)

15、移液管，加樣槍頭等 2) 被污染的水 Þ 水里含有防腐劑或微生物或抗生素等. 3) 使用不干凈的容器或攪拌棒 4) 殘留的清潔液,試劑相關問題,? 溶解后的儲存注意試劑和質控的有效期，在效期內使用. 參考說明書 溶解后的穩(wěn)定性和保存溫度不用的時候閉蓋2-8°C保存。,嚴格按照說明書操作儀器.,,分析儀器誤差,,吸樣和分配 混

16、勻 溫度光路,,,,日常維護其他維護,,,機械方面,Maintenance,分析儀器誤差,? 吸樣和分配樣本和試劑量不準確不精密 1) 針或管路有氣泡 2) 針外壁臟 3) 堵針 4) 樣本或試劑的注射器單元故障 5) 針的未知錯誤,,重復性差 凝固時間延長 不凝固,分析儀器誤差,? 儀器故障儀器故障或檢測程序錯誤 1) 混勻功能減弱

17、 2) 孵育時間激活時間不正確 3) 溫度異常 4) 試劑飛濺污染 5) 電磁干擾,重復性差 結果不準確,,分析儀器誤差,找到問題修理故障，采用備用的儀器或方法確認檢查測試程序 (test protocol)重新分析手工分析或其他方法 獲得準確的結果每天執(zhí)行維護保養(yǎng)，尤其是采用廠家推薦的清潔液洗針 每天執(zhí)行質控,結論,分析前的因素是誤差的主要來源應建立標準操作程序和教育機制，控制好