細(xì)胞培養(yǎng) - 生命經(jīng)緯－關(guān)注生命科學(xué)及醫(yī)學(xué)研究

1、細(xì)胞培養(yǎng),司徒鎮(zhèn)強(qiáng) 2003- 4,細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn),1.活細(xì)胞：能長時(shí)間、直接觀察、研究 活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng),2.可控制：可控制-選擇對(duì)象：均一性、重復(fù)性 哪一種：類型：上皮？間質(zhì)？-- 性質(zhì)：正常？腫瘤？-- 階段：可控制-調(diào)節(jié)條件：

2、各種因素 物理、化學(xué)、生物等因素,可控制-利用方法： 采用各種研究技術(shù)、記錄方法： 研究：倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、 電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦 顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、 同位素標(biāo)記-- 記錄：攝影照片、縮時(shí)電影、電視--,優(yōu)點(diǎn)3.應(yīng)用廣： 學(xué)科多

3、： 對(duì)象廣： 各種動(dòng)物：低等動(dòng)物--高等動(dòng)物--人類 一種動(dòng)物：不同年齡-- 不同組織-- 正常或異常（腫瘤--）,4.較經(jīng)濟(jì)：可提供大量、同時(shí)、重復(fù)性好的、 生物學(xué)性狀相似的實(shí)驗(yàn)對(duì)象,細(xì)胞培養(yǎng)的缺點(diǎn),現(xiàn)人工模擬體內(nèi)環(huán)境的技術(shù)已經(jīng)很高, 但, 人工所模擬的條件與體內(nèi)實(shí)際情況 仍不完全相同. 當(dāng)細(xì)胞被置于體外培養(yǎng)后, 生活在缺乏動(dòng)態(tài)平衡的環(huán)境中

4、, 久了，必然發(fā)生變化.,1.與體內(nèi)主要不同 相對(duì)孤立、相對(duì)單一 缺乏體內(nèi)的系統(tǒng)作用、失去神經(jīng)體液的調(diào)節(jié) 和細(xì)胞相互間的影響,2.主要表現(xiàn) 失去原有組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài) 分化減弱或不顯 細(xì)胞趨向單一化； 3.提示 要正確認(rèn)識(shí)體外培養(yǎng)細(xì)胞 是一種特定條件下生長的細(xì)胞群體。,生長類型,體外細(xì)胞培養(yǎng)物的生長類型,按生長方式:2型 粘附型細(xì)胞:附著在某一固相支持物

5、表面才 能生長的細(xì)胞。 懸浮型細(xì)胞:不必附著于固相支持物表面，而 在懸浮狀態(tài)下即可生長的細(xì)胞。 絕大多數(shù)有機(jī)體細(xì)胞屬粘附型細(xì)胞， 只有少數(shù)細(xì)胞類型如某些腫瘤細(xì)胞和白細(xì)胞 可在懸浮狀態(tài)下生長,貼附(粘附)型細(xì)胞,粘附:是大多數(shù)有機(jī)體細(xì)胞在體內(nèi) 生存和生長發(fā)育的基本存在方式含義 兩方面結(jié)果 基于粘附特性，使細(xì)胞與細(xì)胞之間相互結(jié)合形成組織，

6、 有機(jī)體的絕大多數(shù)細(xì)胞必須 粘附于一固相表面 才能生存和生長。,培養(yǎng)時(shí)：這些細(xì)胞被放到體外環(huán)境中以后,同樣需要粘附于某一固相表面才能生存和生長，因而屬于粘附型細(xì)胞。粘附(錨定或錨著)依賴型(性)細(xì)胞：唯有粘附于固相表面才能生存的細(xì)胞,類型 細(xì)胞在體內(nèi)、外的粘附方式：存在差異 體內(nèi)：粘附是全方位 外形具有復(fù)雜的立體特征 體外：多數(shù)情況，細(xì)胞

7、只有一個(gè)附著平面 外形一般與體內(nèi)時(shí)明顯不同 按照培養(yǎng)細(xì)胞的主要形態(tài)，可分為幾大類型,分類 根據(jù)形態(tài)大致的不同，主要2類： 上皮樣 成纖維細(xì)胞樣 其它，不定型,上皮樣細(xì)胞型,名稱：僅形態(tài)上似體內(nèi)，實(shí)際上不完全等于--來源：來源于外胚層，內(nèi)胚層細(xì)胞 如：皮膚及其衍生物 消化道，乳腺，

8、肺泡 上皮性腫瘤形態(tài)：類似體內(nèi)的上皮細(xì)胞 扁平，不規(guī)則多角形，中有圓形核,生長特點(diǎn) 易相連成片 相靠—緊密相連—成薄層—鋪石狀 生長時(shí)呈膜狀移動(dòng) 很少脫離細(xì)胞群而單個(gè)活動(dòng),成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞,名稱：凡在培養(yǎng)中形態(tài)與成纖維細(xì)胞類似的來源：由中胚層間充質(zhì)組織起源的組織 如：真正的成纖維細(xì)胞

9、 心肌，平滑肌，成骨細(xì)胞，血管內(nèi)皮形態(tài)：似體內(nèi)成纖維細(xì)胞的形態(tài) 胞體梭形或不規(guī)則三角形 胞質(zhì)向外伸出2—3個(gè)長短不等的突起 中有卵圓形核,生長特點(diǎn) 排列成放射狀，漩渦狀 并不緊靠連成片， 細(xì)胞—細(xì)胞接觸易斷開而 單獨(dú)行動(dòng) 游離的單獨(dú)的成纖維樣細(xì)胞， 常有幾個(gè)伸長

10、的細(xì)胞突起,貼附生長型--類型,1. 與體內(nèi)同名的細(xì)胞不完全相同 如：形態(tài)相似的成纖維細(xì)胞，可不同來源 自同一動(dòng)物不同組織的成纖維樣細(xì)胞相似但 發(fā)展趨向不同2. 培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)不穩(wěn)定 條件改變，細(xì)胞形態(tài)可有變化,培養(yǎng)細(xì)胞形態(tài)不穩(wěn)定血清 Hela 高血清 低血清

11、 成纖維細(xì)胞樣 上皮樣細(xì)胞 pH Hela 太酸或太堿 標(biāo)準(zhǔn)pH 成纖維細(xì)胞樣 上皮樣細(xì)胞 細(xì)胞密度 3T3 低密度 高密度 成纖維細(xì)胞樣 上皮樣細(xì)胞 生長狀態(tài)改變 懸浮或貼附 懸浮

12、 貼附 圓形 成纖維或上皮樣 轉(zhuǎn)化與否 未轉(zhuǎn)化 轉(zhuǎn)化后 成纖維樣 可成上皮樣,懸浮生長型,概念 培養(yǎng)時(shí)不貼附于底物而呈懸浮狀態(tài)生長 或以機(jī)械方法使保持懸浮狀態(tài)下生