金雞菊（Coreopsis drummondii）和小白菊（Parthenium hysterophorus）抗煙草花葉病毒活性研究.pdf

1、本研究采用半葉枯斑法和葉盤法對(duì)56科108種植物的乙醇提取物的抗煙草花葉病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)活性進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明：提取物濃度為10mg/mL時(shí)，約2/3的植物乙醇提取物對(duì)TMV的侵染有一定的抑制作用，抑制率達(dá)50％以上的占48.1％，而對(duì)TMV增殖具有抑制作用的植物提取物卻很少，108種植物中僅6種植物的乙醇提取物對(duì)TMV增殖有明顯的抑制作用；乙醇提取物經(jīng)氯仿和正丁醇萃取后，對(duì)TMV侵染具有抑制作

2、用的成分大多數(shù)分布在正丁醇萃取層中。 1.采用活性跟蹤法對(duì)金雞菊(Coreopsis drummondii)和小白菊(Partheniumhysterophorus)2種植物中的抗病毒活性成分進(jìn)行了提取、分離及結(jié)構(gòu)鑒定。從金雞菊根中分離出A<,1>、A<,2>、A<,3>、A<,4>和A<,5> 5種化合物，從小白菊中分離出B<,1>和B<,2> 2種化合物，其中A<,1>為首次從金雞菊中分離獲得。結(jié)構(gòu)測(cè)定結(jié)果表明，A<,1>為

3、1-苯基-1，3,5-三庚炔(1-phenyl-1，3，5-triheptalkyne)，A<,2>為(7E，8Z)-1，2，4-trihydroxy-1-(3-hydroxy-1-butenyl)-2,6,6-trimethycyclohexene，A<,3>為β-豆甾醇(β-stigmasterol)，A<,4>為豆甾醇(Stigmaster01)，A<,5>為β-谷甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖甙(β-sitosterob3-O

4、-β-D-glucopyranoside)，B<,1>為小白菊內(nèi)酯(Parthenolide)， B<,2>為Vomifoliol；生物活性測(cè)定結(jié)果表明，A<,1>、B<,1>不僅對(duì)TMV侵染具有抑制作用，而且還可以明顯抑制TMV的增殖，濃度在0.2 mg/mL下，化合物A<,1>、B<,1>對(duì)TMV侵染引起的枯斑抑制率分別為81.3％和72.1％，對(duì)煙草葉圓盤中的TMV增殖的抑制率分別可達(dá)84.3％和72.3％。 2.對(duì)兩種活

5、性物質(zhì)的抗病毒機(jī)制進(jìn)行了探討。電鏡觀察、透析處理和間接酶聯(lián)免疫檢測(cè)(ELISA)等試驗(yàn)結(jié)果表明，化合物A<,1>、B<,1>對(duì)TMV粒體的外部形態(tài)結(jié)構(gòu)和外殼蛋白的抗原位點(diǎn)均無(wú)明顯的破壞作用，但可明顯影響病毒外殼蛋白的體外聚合過(guò)程，且對(duì)TMV核酸的侵染力也表現(xiàn)出較高的體外抑制活性；實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)結(jié)果表明，兩種化合物均可明顯抑制煙草葉片中TMV的復(fù)制酶基因(TMV-RdRp)和外殼蛋白基因(TMV-CP)的表達(dá)，在0.2 mg/mL

6、下，A<,1>處理的煙草中TMV的復(fù)制酶基因(TMV-RdRp)和外殼蛋白基因(TMV-CP)的表達(dá)水平分別約是對(duì)照的25.7％和20.2％，B<,1>處理的煙草中TMV的復(fù)制酶基因(TMV-RdRp)和外殼蛋白基因(TMV-CP)的表達(dá)水平分別約是對(duì)照37.3％和23.1％。 3.選擇對(duì)TMV的侵染或增殖具有良好抑制效果的3種植物提取物，分別以對(duì)TMV侵染和增殖的抑制效果為考察指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)研究了3種植物提取物混配的最佳配

7、比，結(jié)果表明，對(duì)TMV侵染抑制作用效果最好的配比為：鴉膽子提取物1.0 mg/mL、金雞菊提取物0.8 mg/mL和淫羊藿1.2 mg/mL，3種提取物按該配比進(jìn)行混配的混合物對(duì)TMV的侵染具有強(qiáng)烈的抑制作用，其抑制率可達(dá)99.6％；對(duì)TMV增殖抑制作用效果最好的配比為：鴉膽子提取物1.0 mg/mL、金雞菊提取物0.5mg/mL和淫羊藿0.8mg/mL，按該配比進(jìn)行混配的混合物能顯著抑制煙草葉圓盤中TMV的增殖，其抑制率為89.6％。

8、此外，還對(duì)混配提取物微乳劑(ME)的加工進(jìn)行了初步研究，確定了10％混配提取物微乳劑的配方(質(zhì)量百分比)為：混配提取物lO％，DBS-Ca 5％，農(nóng)乳60315％，甲醇25％，水45％。接種TMV的煙草于接種病毒前、后分別噴施混配提取物，其接種葉內(nèi)TMV的濃度明顯低于不噴藥物的對(duì)照煙草；盆栽防治結(jié)果表明，噴施100倍的10％混配提取物微乳劑對(duì)煙草花葉病的相對(duì)防效為45.6％；本研究還測(cè)定了普通煙草噴施混配提取物后，其葉片內(nèi)一些與抗性相關(guān)