靈芝多糖的結構特征研究

1、靈芝多糖的結構特性分析靈芝多糖的結構特性分析何晉浙邵平孟祥河孫培龍?（浙江工業(yè)大學生物與環(huán)境工程學院食品系，杭州310032）摘要摘要采用沸水回流法從靈芝子實體中提取多糖，經Sevage法除蛋白，乙醇沉淀，離心、透析、膜分離濃縮、凍干后得靈芝多糖。經高碘酸氧化、Smith降解及甲基化反應，并利用多糖及剛果紅混合液在堿性溶液中的波長的紅移變化，通過UVVIS、IR、GC、GCMS、NMR對靈芝水提多糖的結構特征及三螺旋體結構進行分析研究。

2、結果表明：靈芝多糖含有三螺旋體構型，GCMS分析靈芝多糖的主要單糖組分為葡萄糖和少量的半乳糖、甘露糖、木糖、艾杜糖，IR及1H—NMR分析多糖為β構型高碘酸氧化、Smith降解和甲基化分析說明：多糖主要為(1→3)糖苷鍵連接構型并伴有少量的1→6位支鏈鍵連接的結構，靈芝多糖是由D葡萄糖單元通過β(1→3)糖苷鍵連接葡聚多糖，其主要構型特征為(1→3)βD線性連接的骨架結構，其主要結構為下列構型：關鍵詞關鍵詞靈芝多糖，結構特性，β葡聚糖，

3、三螺旋體1引言靈芝是中國名貴的中藥材，其具有滋補強身、扶正固本、久服有輕身延年之功效，屬多孔菌科類真菌[1]。其水提物的主要活性組分是多糖。近年來越來越多的報告顯示真菌多糖具有強烈的抗腫瘤、抗病毒、抗衰老、抗氧化、降血糖及免疫活性作用[2]。而真菌多糖的生物活性與多糖的結構存在特別重要的構效關系[3]。目前，雖然對靈芝多糖的活性研究報道較多，但對其多糖結構作全面深入的分析研究報道并不是很多。蔣志國等[4]采用HSCCC方法分離純化香菇中

4、的多糖；孫元琳等[5]采用紅外光譜和GC方法分析當歸多糖水解后的單糖組成。本研究主要對赤靈芝多糖結構進行提取、純化、通過膜分離，并經高碘酸氧化、及甲基化反應，通過紫外可見光譜（UVVIS）、紅外光譜（IR）、GCMS、核磁共振（NMR）對靈芝多糖進行三旋螺旋體結構及多糖的結構特性進行了全面的分析研究。以進一步促進靈芝多糖的藥理作用及其構效關系的研究。2實驗部分本文系浙江省科技廳和國家高技術研究發(fā)展計劃863計劃資助項目（No.2008C

5、32030No.2007AA10Z337）醋酸酐，100℃反應1h。再加入少量甲苯，減壓濃縮蒸干，溶于3mL氯仿中，用少量蒸餾水充分振蕩洗滌，如此重復3次。氯仿層以適量無水硫酸鈉過夜干燥后，過濾用氯仿定容至10mL，供GCMS分析。2.2.4多糖高碘酸氧化分別取0、0.5、1.0、1.5、2.0、4.0mL15mmolL高碘酸鈉標準溶液蒸餾水定容至4mL，取0.1mL稀釋250倍后在紫外223nm下測定其光密度進行標準曲線制作。稱取靈芝

6、多糖25mg，少量水溶解后，加入15mmolL1高碘酸鈉溶解，定容至25mL，置于暗處，室溫下進行反應，于0、6、12、18…間隔6小時取樣0.1mL，蒸餾水稀釋250倍后測定直至光密度達穩(wěn)定值加乙二醇終止反應由高碘酸鈉標準曲線，計算高碘酸消耗量同時取2mL反應液測定甲酸耗量。剩余部分進行Smith降解：12KMWCO透析袋流水透析48h，未透出液減壓蒸餾濃縮至約30mL置小燒瓶中加150mg硼氫化鈉避光還原28h然后用醋酸中和反應液至

7、中性，濃縮、蒸干，如此重復3次，獲多聚糖醇。稱取10mg多聚糖醇，再加人2molL三氟乙酸2mL，同上述乙?；椒ㄟM行水解、乙酰化反應，進行GCMS分析。2.2.5三螺旋體結構分析由多糖和剛果紅混合物在NaOH堿性介質下，由可見光譜的最大吸收波長的漂移變化進行分析。2.2.6色譜操作條件檢測器為火焰檢測器(FID)，氣相色譜條件為：柱溫初溫150℃，以10℃min，升至220℃，恒溫30min。進樣口溫度230℃，分流比1：25，檢測器

8、溫度250℃，氫氣35mLmin，空氣350mLmin，尾吹氣35mLmin。氣質色譜條件以2℃min升溫，其他操作條件與GC同。3.結果與討論3.1多糖的紅外光譜（IR）分析多糖分別經10K、30K、50K、100K膜包分離后，以100K以上的膜分離多糖截留組分含量最高，以該組分多糖進行特性分析研究。圖1顯示了靈芝多糖（GLP）的紅外光譜，其特征譜線分別在3419.12926.11623.21400.31078.4894cm1具有明顯