細(xì)胞化學(xué)染色

1、,過碘酸-雪夫反應(yīng) periodic acid-Scheff reaction PAS,原理,過碘酸是氧化劑，能使含有乙二醇基的多糖類物質(zhì)（糖原、黏多糖、黏蛋白、糖蛋白及糖脂等）氧化，形成雙醛基。醛基與雪夫試劑中的無色品紅結(jié)合，使無色品紅變成紫紅色化合物，定位于多糖類的細(xì)胞內(nèi)。,乙二醇基 雙醛基,,過碘酸氧化,,血夫試劑中的無色品紅,紫紅色化合物,粒細(xì)胞系統(tǒng)

2、 分化差的原始粒細(xì)胞陰性，分化好的原始粒細(xì)胞至中性分葉粒細(xì)胞呈陽性，隨著細(xì)胞成熟陽性增強(qiáng)。 嗜酸性粒細(xì)胞顆粒本身不著色，顆粒間胞質(zhì)紅色，是堿性粒細(xì)胞反之。,正常細(xì)胞的染色反應(yīng),紅細(xì)胞系統(tǒng)： 陰性 單核細(xì)胞系統(tǒng)：分化差的原始單核陰性，其它陽性。 淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：大多數(shù)陰性，少數(shù)陽性（陽性率常<20%） 巨核細(xì)胞系統(tǒng)：巨核細(xì)胞和血小板呈陽性，陽性反應(yīng)程度隨成熟增強(qiáng)。 其他細(xì)胞：少數(shù)

3、漿細(xì)胞陽性，巨噬細(xì)胞可呈陽性。,1.紅細(xì)胞系統(tǒng)疾病： 紅血病、紅白血病、骨髓增生異常綜合征中有核紅細(xì)胞呈陽性。 缺鐵性貧血、地中海貧血、巨幼細(xì)胞性貧血、再障有核紅細(xì)胞呈陰性。,臨床意義,2.白細(xì)胞系統(tǒng)疾病： 主要用于輔助鑒別急性白血病的細(xì)胞類型。 急性巨核細(xì)胞白血?。翰糠志藓思?xì)胞呈陽性，呈粗顆粒狀、小塊狀、或彌散分布。 急性粒細(xì)胞白血病:部分原始粒細(xì)胞呈陽性，呈細(xì)顆粒狀或彌散分布,急性淋

4、巴細(xì)胞白血病粗顆粒狀或小塊狀 急性單核細(xì)胞白血病有時胞質(zhì)邊緣顆粒較粗大 慢性淋巴細(xì)胞白血病時淋巴細(xì)胞陽性率增加，呈粗顆粒狀或小塊狀,戈謝細(xì)胞呈陽性，尼曼-皮克細(xì)胞呈陰性。 RS細(xì)胞陰性或弱陽性，骨髓轉(zhuǎn)移性腺癌呈強(qiáng)陽性。,酯酶染色,分為特異性酯酶染色和非特異性酯酶染色,特異性酯酶染色：氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色。非特異性酯酶染色：酸性非特異性酯酶染色（酸性ɑ-醋酸萘酚酯酶染色）、堿性非特異性酯酶染色（ɑ-丁酸萘

5、酚酯酶）和中性非特異性酯酶染色（ɑ-醋酸萘酚酯酶染色、醋酸AS-D萘酚酯酶染色）,氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色naphthol AS-D chloroacetate esteraseNAS-DCE,原理,血細(xì)胞內(nèi)的氯乙酸AS-D萘酚酯酶水解基質(zhì)液中的氯乙酸AS-D萘酚，產(chǎn)生AS-D萘酚，進(jìn)而與基質(zhì)液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細(xì)胞內(nèi)酶所在部位。本實驗常用重氮鹽為堅牢紫醬GBC，形成有色沉淀為紅色。,原理： 氯乙酸A

6、S-D AS-D萘酚 萘酚,,氯乙酸AS-D 萘酚酯酶,監(jiān)牢紫醬GBC,,不溶性 沉淀,正常血細(xì)胞染色粒細(xì)胞系統(tǒng) 分化差的原始粒細(xì)胞陰性，分化好的原始粒細(xì)胞至成熟粒細(xì)胞呈陽性。 嗜酸性粒細(xì)胞呈陰性或弱陽性，嗜堿性粒細(xì)胞呈陽性。,單核細(xì)胞系統(tǒng):絕大多數(shù)為陰性，僅個別單核細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞呈弱陽性。 其他細(xì)胞：如淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、巨核細(xì)胞、有核紅

7、細(xì)胞、血小板等均呈陰性，肥大細(xì)胞陽性。,臨床意義,主要用于輔助鑒別診斷急性白血病細(xì)胞的類型，是急性白血病的常規(guī)細(xì)胞化學(xué)染色。 1.急性粒細(xì)胞白血病時原始粒細(xì)胞呈陰性或陽性，所以染色結(jié)果為陰性者不能排除急粒的可能。,2.急性早幼粒細(xì)胞白血病早幼粒細(xì)胞呈強(qiáng)陽性。 3.急性單核細(xì)胞白血病時原始單核細(xì)胞及幼稚單核細(xì)胞幾乎均呈陰性，個別弱陽性。 4.急性粒-單核細(xì)胞白血病時原始粒細(xì)胞及早幼粒細(xì)胞呈陽性，原始單

8、核細(xì)胞及幼稚單核細(xì)胞呈陰性。,5.急性淋巴細(xì)胞白血病和急性巨核細(xì)胞白血病均呈陰性,應(yīng)用評價,NAS-DCE是粒細(xì)胞的特異酯酶，它是急性白血病形態(tài)分型時常規(guī)做的細(xì)胞化學(xué)染色，尤其有助于POX染色陽性的急粒急單的鑒別。 該實驗敏感性較POX低，如有一定數(shù)量白血病細(xì)胞NAS-DCE染色呈陽性，可以肯定其中粒系成分的存在，陰性則不能排除有粒系成分的可能。,ɑ-醋酸萘酚酯酶染色 ɑ-naphthol acetate esterase

9、 ɑ-NAE,原理,ɑ-醋酸萘酚酯酶存在于單核細(xì)胞、粒系細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中，是一種中性非特異性酯酶。血細(xì)胞內(nèi)的ɑ-NAE在PH中性條件下，水解基質(zhì)中的ɑ-醋酸萘酚釋放出ɑ-萘酚，進(jìn)而與基質(zhì)液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性有色沉淀，定位于細(xì)胞內(nèi)酯酶所在部位。 單核細(xì)胞系統(tǒng)可被氟化鈉抑制，所以做ɑ-NAE時，需要同時做氟化鈉抑制試驗。,ɑ醋酸萘酚 ɑ萘酚,,ɑ醋酸萘酚酯酶

10、,水解,重氮鹽,,不溶性有色沉淀,正常血細(xì)胞染色,單核細(xì)胞系統(tǒng)：分化差的原始單核細(xì)胞呈陽性，分化好的原始單核細(xì)胞呈陽性，幼稚單核及單核細(xì)胞呈陽性，可被氟化鈉抑制。所謂抑制是指氟化鈉實驗的抑制率大于50%。 抑制前陽性率或陽性積分-抑制后陽性率或陽性積分氟化鈉抑制率= 前抑制陽性率或陽性積分,粒細(xì)胞系統(tǒng)：陰

11、性或陽性，但不能被氟化鈉抑制。 淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：多屬陰性，少數(shù)弱陽性，陽性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制。 其他細(xì)胞：巨核細(xì)胞和血小板呈陽性，陽性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制；少數(shù)有核紅細(xì)胞呈弱陽性，陽性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制。,臨床意義,主要用于 輔助鑒別急性白血病的類型： 1.急性單核細(xì)胞白血病中的細(xì)胞大多數(shù)呈陽性且較強(qiáng)，陽性反應(yīng)能被氟化鈉抑制。 2.急性粒細(xì)胞白血病中的原始粒細(xì)胞呈陰性

12、或陽性，陽性反應(yīng)不能被氟化鈉抑制。3.急性早幼粒細(xì)胞白血病中的早幼粒細(xì)胞呈強(qiáng)陽性，陽性反應(yīng)不被氟化鈉抑制。,4.急性淋巴細(xì)胞白血病中的原始淋巴細(xì)胞及幼稚淋巴細(xì)胞呈陰性至陽性，不被氟化鈉抑制。5.急性粒單核細(xì)胞白血病中的原始粒細(xì)胞呈陰性至陽性。反應(yīng)不被氟化鈉抑制；原始單核及幼稚單核細(xì)胞呈陽性且較強(qiáng)，陽性反應(yīng)能被氟化鈉抑制。,應(yīng)用評價,ɑ-NAE染色是急性白血病形態(tài)學(xué)分型時常規(guī)要做的細(xì)胞化學(xué)染色，對單核細(xì)胞白血病與粒細(xì)胞白血病鑒別診斷意

13、義較大。一般來說，ɑ-NAE在急性單核細(xì)胞白血病細(xì)胞中的陽性較強(qiáng)，但M3或M2b也可呈強(qiáng)陽性。,醋酸AS-D萘酚酯酶染色,naphthol AS-D acetate esterase NAS-DAE,原理,NAS-DAE存在于單核細(xì)胞、粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中，是一種中性非特異性酯酶。 血細(xì)胞內(nèi)的 NAS-DAE在pH中性的條件下水解基質(zhì)液中的醋酸AS-D萘酚，釋放出AS-D萘酚，進(jìn)

14、而與基質(zhì)液中的重氮鹽偶聯(lián)成不溶性的有色沉淀定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酶所在的部位。,正常細(xì)胞的染色反應(yīng),粒細(xì)胞系統(tǒng)中，原始粒細(xì)胞陰性或陽性，早幼粒細(xì)胞至成熟粒細(xì)胞均陽性，陽性反應(yīng)不被氟化鈉抑制，其他血細(xì)胞染色基本同ɑ-NAE染色。,臨床意義,基本同ɑ-NAE，用以輔助鑒別急性白血病細(xì)胞類型。,應(yīng)用評價,基本同ɑ-NAE,ɑ-丁酸萘酚酯酶染色,ɑ-naphthol butyrate esterase ɑ-

15、NBE,實驗原理,ɑ-NBE主要存在于單核細(xì)胞中，是一種非特異性酯酶。血細(xì)胞中的ɑ-NBE在PH堿性條件下，水解基質(zhì)內(nèi)的ɑ-丁酸萘酚并釋放出ɑ-萘酚，后者與基質(zhì)液中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性有色沉淀，定位于胞質(zhì)內(nèi)酶所在的位置。,正常細(xì)胞染色反應(yīng),1.粒細(xì)胞系統(tǒng)：各階段粒細(xì)胞皆陰性。2.單核細(xì)胞系統(tǒng)：分化差的原始單核細(xì)胞呈陰性，分化好的原始單核細(xì)胞呈陽性，幼稚單核細(xì)胞及單核細(xì)胞呈陽性，陽性反應(yīng)被氟化鈉抑制。,3.淋巴細(xì)胞系統(tǒng)：T淋巴細(xì)胞、

16、非T非B淋巴細(xì)胞可呈陽性，B淋巴細(xì)胞呈陰性。4.其他細(xì)胞：巨核細(xì)胞、有核紅細(xì)胞、漿細(xì)胞呈陰性或弱陽性，組織細(xì)胞也可呈陽性，但不被氟化鈉抑制。,臨床意義,與ɑ-NAE染色的臨床意義相同： 1.急性單核細(xì)胞白血病中的細(xì)胞大多數(shù)呈陽性，陽性反應(yīng)能被氟化鈉抑制 2.急性粒細(xì)胞白血病中的原始粒細(xì)胞一般呈陰性 3.急性早幼粒細(xì)胞白血病中的早幼粒細(xì)胞常呈陰性,4.急性粒單核細(xì)胞白血病：單核系部分白血病細(xì)胞陽性，粒

17、系部分白血病細(xì)胞陰性。 5.急性淋巴細(xì)胞白血病中的原始淋巴細(xì)胞及幼稚淋巴細(xì)胞一般呈陰性。,酯酶雙染色,在同一張涂片上進(jìn)行兩種酯酶染色的方法稱為酯酶雙染色。一般采用一種特異性酯酶染色加一種非特異性酯酶染色，故常用的有ɑ-醋酸萘酚酯酶與氯乙酸AS-D萘酚酯酶雙染色、ɑ-丁酸萘酚酯酶與氯乙酸AS-D萘酚酯酶雙染色等。,酸性磷酸酶染色,acid phosphatase ACP

18、,實驗原理,酸性磷酸酶（ACP）存在于細(xì)胞的溶酶體顆粒中，有些細(xì)胞中的酸性磷酸酶耐酒石酸，故抗酒石酸酸性磷酸酶染色有助于某些疾病的診斷和鑒別診斷。染色方法有偶氮偶聯(lián)法和Gomori硫化鉛法，前者常用。,偶氮偶聯(lián)法：血細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶在酸性（pH5.0）條件下水解基質(zhì)中的磷酸萘酚AS-BI，釋放出萘酚AS-BI，后者與基質(zhì)中的重氮鹽偶聯(lián)形成不溶性的有色沉淀，定位于細(xì)胞之內(nèi)酶所在的部位。,抗酒石酸酸性磷酸酶染色：用相同的方法制備兩份基質(zhì)液

19、，一份加入適量的L-酒石酸（左旋酒石酸），另一份不加酒石酸。取同一份骨髓標(biāo)本的兩張涂片，分別用這兩種不同的基質(zhì)液做酸性磷酸酶染色。如果血細(xì)胞內(nèi)的酸性磷酸酶耐酒石酸，兩張均呈陽性；如不耐酒石酸，不加L-酒石酸呈陽性反應(yīng)，二甲L-酒石酸呈陰性反應(yīng)。,正常細(xì)胞染色反應(yīng),粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨核細(xì)胞、血小板、漿細(xì)胞、巨噬細(xì)胞呈陽性。,臨床意義,1.多毛細(xì)胞白血病呈陽性（長強(qiáng)陽性），陽性反應(yīng)不被L-酒石酸抑制。慢性淋巴細(xì)胞白血病的淋巴細(xì)胞

20、和惡性淋巴瘤細(xì)胞ACP染色也可呈陽性，但被L-酒石酸抑制。 2、戈謝細(xì)胞陽性，尼曼匹克細(xì)胞陰性。 3、T淋巴細(xì)胞陽性，B淋巴細(xì)胞陰性。,應(yīng)用評價,ACP染色在多毛細(xì)胞白血病中最具特征性，所以主要用于多毛細(xì)胞白血病的診斷，其次是在戈謝病和尼曼匹克病應(yīng)用。這些疾病在臨床上均很少見，故常因為標(biāo)本過少而導(dǎo)致試劑過期。,組織化學(xué)染色小結(jié),在急性髓系白血病骨髓中，以原始和幼稚細(xì)胞增生為主，僅僅根據(jù)瑞氏染色下的細(xì)胞形態(tài)容易做出錯誤判斷