紅鰭東方鲀組織蛋白酶B、L的異源表達及粗酶液性質(zhì)研究.pdf

1、消費者在食用魚類時，主要食用部位是肌肉，而肝臟等一般會被丟棄，造成浪費及污染，但是有些魚類，例如河豚，被公認最鮮美的部位恰好是肝臟。紅鰭東方鲀味道鮮美，已從其體內(nèi)發(fā)掘了系列鮮味肽，但其形成機制尚未明確。組織蛋白酶B、L可通過降解肌原纖維蛋白及肌鈣蛋白發(fā)揮著重要的滋味形成作用。為了探索其對紅鰭東方鲀呈味肽的形成機制，本文以紅鰭東方鲀?yōu)檠芯繉ο螅梅肿由飳W技術(shù)，成功得到組織蛋白酶B和L粗酶液，為今后研究紅鰭東方鲀蛋白質(zhì)的降解機制奠定基礎(chǔ)

2、，具體研究內(nèi)容和結(jié)果如下：
　?。?）通過查找NCBI數(shù)據(jù)庫分析序列得到全長分別為1482 bp與1336 bp的紅鰭東方鲀組織蛋白酶B、L的序列，從組織蛋白酶B、L的序列中設(shè)計引物，同時從紅鰭東方鲀肌肉中提取RNA并轉(zhuǎn)錄為cDNA作為模板克隆，通過驗證得到與目的基因大小相一致的條帶。同時通過測序證明所克隆得到的是源自紅鰭東方鲀組織蛋白酶B、L的序列。
　?。?）選擇pET-28a(+)作為表達載體分別構(gòu)建組織蛋白酶B、L的

3、表達系統(tǒng)，以E.coli BL21作為重組工程菌進行表達，成功得到大小約為36KDa的重組組織蛋白酶B、L，驗證了其可在大腸桿菌表達系統(tǒng)中成功克隆表達。本文為進一步研究紅鰭東方鲀組織蛋白酶B與組織蛋白酶L的酶學特性及其對滋味形成奠定了基礎(chǔ)。
　?。?）通過比較不同的蛋白酶純化方式，將得到的重組組織蛋白酶B、L粗酶液進行純化，可知硫酸銨沉淀法可以初步去除雜蛋白。然后分別用Z-Arg-Arg-AMC、Z-Phe-Arg-AMC作為組織