雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng),保存和復(fù)蘇

1、雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)凍存與復(fù)蘇雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)凍存與復(fù)蘇雜交瘤細(xì)胞適用于無血清的培養(yǎng)基，無血清培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加物質(zhì)雜交瘤細(xì)胞的無血清培養(yǎng)基通常是在標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加小分子和大分子物質(zhì)，以代替血清的各種功能。不同基礎(chǔ)培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞的無血清培養(yǎng)有一定的影響。不同細(xì)胞系對(duì)基礎(chǔ)培養(yǎng)基也有選擇性。最常用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基有RPMI1640，F(xiàn)12，IMDM，DMEMF12DMEMF12RPMI1640。形成的無血清培養(yǎng)基常能支持雜交瘤細(xì)胞在分批培養(yǎng)中生

2、長(zhǎng)到1106細(xì)胞ml以上，最終的單抗?jié)舛瓤蛇_(dá)10μgml~100μgml?；旧夏阏f的那兩種都有可能，你可以參考以下操作：【轉(zhuǎn)貼】細(xì)胞融合和雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)用試劑的配制①RPMI1640基礎(chǔ)培養(yǎng)液，1000mlRPMI1640粉10.4g丙酮酸鈉0.11g用900ml三蒸水(或無離子水再經(jīng)過雙蒸)，通CO2攪拌溶解。稱取1.8gNaHCO3，用少量三蒸水溶解，邊攪拌邊加入1640液中。補(bǔ)足1000ml，通過0.22μm濾膜正壓過濾除菌(用

3、CO2鋼瓶加壓)，分裝，置30℃，菌檢48小時(shí)4℃存放。效期不超過三個(gè)月。②RPMI1640完全培養(yǎng)液，100ml雙抗(青、鏈霉素)0.1ml3％L谷氨酰胺2.5ml犢牛血清15.0ml1640基礎(chǔ)培養(yǎng)液81.5ml用時(shí)現(xiàn)配，4℃下存放不超過一周，用于細(xì)胞融合和克隆化培養(yǎng)的全培養(yǎng)液，可將小牛血清增至20％。③200mmolL(3％)L谷氨酰胺溶液L谷氨酰胺5.846g三蒸水200ml加熱至50℃使全溶，0.22μm膜濾除菌，按每管4ml

4、分裝，20℃保存。④雙抗溶液青霉素(鈉鹽)100萬iu鏈霉素(硫酸鹽)1g溶于100ml滅菌三蒸水中，小量分裝，20℃凍存。雜交瘤細(xì)胞的保存雜交瘤細(xì)胞的保存當(dāng)獲得產(chǎn)生所需的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞后，必須將一部分雜交瘤細(xì)胞保存，否則在連續(xù)傳代的過程中，可能產(chǎn)生突變或染色體的漂移以至喪失固有特性或丟失產(chǎn)生抗體的特性。另外在長(zhǎng)期的培養(yǎng)過程中，難免不發(fā)生污染以至于毀滅。所以必須冷藏保存一部分。保存方法如下：1材料(1)細(xì)胞：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞。

5、(2)10％二甲基亞砜保護(hù)液（二甲基亞砜能損壞濾器，而又被高壓所破壞，所以不能過濾或高壓消毒。其本身就是毒品，無菌）：含10％二甲基亞砜、20％滅活胎牛血清，70％RPMI—1640液。(3)20％FCS—1640培養(yǎng)液：含青霉素100Uml，鏈霉素100μgml。(4)滅菌的2ml安瓶等2操作方法(1)去掉細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的舊的培養(yǎng)液，加入10％FCS—1640液，使細(xì)胞懸浮。(3)1000rmin離心10min，去上清。細(xì)胞沉淀用10％

6、二甲基亞砜保護(hù)液制成懸液，使成1.0107細(xì)胞／ml。(3)取樣，臺(tái)盼蘭染色，計(jì)數(shù)活細(xì)胞，應(yīng)在95％以上。(4)用注射器將細(xì)胞分裝安瓶，每瓶0.5ml～1.0ml，熔封安瓶。(5)放4℃2h。(6)放液氮罐氣態(tài)部分（70℃）15h。(7)轉(zhuǎn)入液氮部分。雜交瘤細(xì)胞的復(fù)蘇雜交瘤細(xì)胞的復(fù)蘇1從液氮罐中取出安瓶立即放37℃水浴中速溶。2無菌操作打開安瓶，取出細(xì)胞懸液，轉(zhuǎn)入組織培養(yǎng)瓶。3逐滴緩慢加入20％FCS－1640培養(yǎng)液3.5ml，這個(gè)過程