高效液相色譜思考題與練習題

1、思考題與練習題1.高效液相色譜是如何實現(xiàn)高效、快速、靈敏的？解：氣相色譜理論和技術上的成就為液相色譜的發(fā)展創(chuàng)造條件，從它的高效、高速和高靈敏度得到啟發(fā)，采用510μm微粒固定相以提高柱效，采用高壓泵加快液體流動相的流速；設計高靈敏度、死體積小的紫外、熒光等檢測器，提高檢測靈敏度，克服經(jīng)典液相色譜的缺點，從而達到高效、快速、靈敏。2.簡述液相色譜中引起色譜峰擴展的主要因素，如何減少譜帶擴張，提高柱效？解：液相色譜中引起色譜峰擴展的主要因素

2、為渦流擴散、流動相傳質(zhì)、停留流動相傳質(zhì)及柱外效應。在液相色譜中要減少譜帶擴張，提高柱效，要減少填料顆粒直徑，減小填料孔穴深度，提高裝填的均勻性，采用低黏度溶劑作流動相，流速盡可能低，同時要盡可能采用死體積較小的進樣器、檢測器、接頭和傳輸管線等。3.色譜柱A柱長為15cm，載體粒度為5μm。另一B柱長為30cm，載體粒度為10μm。兩柱的柱效相等嗎？解：∵l=Ldp∴l(xiāng)A=150.0005=30000lB=300.0010=30000A柱

3、的折合柱長為30000，B柱的折合柱長也為30000，表明組分在兩根柱內(nèi)從柱入口到出口都經(jīng)過30000個載體顆粒，兩柱的柱效相等。4.流動相為什么要脫氣？常用的脫氣方法有拿幾種？解：流動相中溶解氣體存在以下幾個方面的害處（1）氣泡進入檢測器，引起光吸收或電信號的變化，基線突然跳動，干擾檢測；（2）溶解在溶劑中的氣體進入色譜柱時，可能與流動相或固定相發(fā)生化學反應；（3）溶解氣體還會引起某些樣品的氧化降解，對分離和分析結(jié)果帶來誤差。因此，因

4、為組分的分配系數(shù)為K=CsCmCs與Cm分別為組分在固定相和流動相中的濃度當分子直徑大于孔徑時此時Cm=0∴K=0.當分子直徑小于固定相孔徑時組分向空隙內(nèi)流動相擴散達到平衡時一半組分在空隙內(nèi)一半組分在空隙外此時K=1.0若分子直徑介于以上兩種極限情況之間K一定介于0與1之間可見體積排阻色譜中任何祖父呢的分配系數(shù)為0≤K≤1如果K1說明此時的分離方式已不是純粹的體積排阻色譜其分離過程受到其他作用力(如吸附)的支配.9.為了測定鄰氨基苯酚中

5、微量雜質(zhì)苯胺現(xiàn)有下列固定相:硅膠ODS鍵合相流動相有:水甲醇異丙醚己烷應選用哪種固定相流動相為什么解：鄰氨基苯酚中微量雜質(zhì)苯胺測定為了良好分離應讓苯胺先出峰由于苯胺的極性小于鄰氨基苯酚因此應采用正相色譜法選用硅膠為固定相異丙醚己烷為流動相.10.在ODS鍵合相固定相甲醇水為流動相時試判斷四種苯并二氮雜苯的出現(xiàn)峰順序.為什么1.2.3.4.解：色譜條件為反相鍵合相色譜體系在反相色譜體系中極性大的組分k小首先出峰按四種苯并二氮雜苯的結(jié)構出峰