生化技術(shù)原理

1、第一章生命大分子物質(zhì)的制備某一骨骼肌的無(wú)細(xì)胞粗抽提液每毫升含蛋白質(zhì)32mg，在適宜條件下，10／l該抽提液以每分鐘O14umol的速度催化一個(gè)反應(yīng)。用硫酸銨沉淀法分級(jí)分離50ml上述抽提液，將飽和度為20%40%的沉淀物重新溶于10ml溶液中，測(cè)得其蛋白質(zhì)含量為50rngm1’取ioy.i該溶液催化一反應(yīng)，其速度為每分鐘o65弘mol。試計(jì)算純化倍數(shù)和回收率。(2.97，92.8%)第二章沉淀法1兔肌醛縮酶的p常數(shù)與鹽析常數(shù)（在離子強(qiáng)度

2、為摩爾濃度時(shí)）分別為6.30和2.84。試求硫酸銨濃度分別為2molL、3molL時(shí)的溶解度。(4.2mgml，6.03X103mgml)2含25%硫酸銨飽和度的細(xì)胞色素c溶液150ml，需加多少克硫酸銨或多少毫升飽和硫酸銨溶液，才能使其達(dá)55%飽和度(28.95g100ml).10某一蛋白質(zhì)的鹽析范圍為飽和硫酸銨30%60%，試簡(jiǎn)述具體操作（若有500ml鹽析液）。第三章吸附層析7.利用薄層層析如何確定蛋白質(zhì)的純度？第四章疏水層析1疏

3、水作用層析的固定相和流動(dòng)相與普通吸附層析有何區(qū)別？為什么？(P63T1)第五章離子交換層析1離子交換劑由哪幾部分組成？何為陽(yáng)離子和陰離子交換劑？2弱酸性和弱堿性的纖維素離子交換劑分別適宜在哪些pH范圍內(nèi)應(yīng)用？為什么？7影響離子交換劑膨脹度的因子有哪些？其中哪個(gè)為關(guān)鍵因子？為什么？8在層析柱中污染雜質(zhì)后應(yīng)如何處理？為什么某些親水性離子交換劑在含乙醇的乙酸鹽溶液中可以防止微生物污染？9試設(shè)計(jì)利用離子交換劑分離一種含等電點(diǎn)分別為40、6.0、

4、7.5和9.0的蛋白質(zhì)合液的方案，并簡(jiǎn)述理由。并繪制洗脫曲線。10梯度溶液的變化速率、交換劑的膨脹程度、裝柱的均勻度等因子，對(duì)樣品的分辨率有何影響？11梯度溶液的變化速率是受哪些因素控制的？試舉例說(shuō)明如何借助速率變化來(lái)提高分離效果？13用離子交換劑測(cè)定蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)時(shí)，為什么一定要用強(qiáng)性離子交換劑？定相之間相互作用的疏水力差異性大小，進(jìn)而設(shè)法將有效成分分離出來(lái)。但是，在反相層析中，所用的載體結(jié)合的配體密度大、疏水性強(qiáng)，對(duì)蛋白質(zhì)類物質(zhì)具有

5、較大的吸附力，欲將吸附物解析下來(lái)，需用含有機(jī)溶劑（降低極性）的流動(dòng)相洗脫，才能以償。由于析中的載體結(jié)合的配體密度小，疏水位期，刷阻H一礦，，，一，一‘洗脫液的極性降低，常常會(huì)引起大分子活性物質(zhì)變性，，因此反相層析一般較適合分離純化小分子質(zhì)量的肽類和輔基等物質(zhì)。疏水層析所用載體的性能與反相層析不同，即疏水層析中的載體結(jié)合的配體密度小，疏水性弱，對(duì)蛋白質(zhì)及其復(fù)合物僅產(chǎn)生溫和的吸附作用，吸附物容易被解析下來(lái)。因此，這類方法較適合分離純化鹽析后

6、或高鹽撫脫下來(lái)的物質(zhì)。這不僅使有效成分的純度得到提高，而且還保持了其原來(lái)的結(jié)構(gòu)和生物活性。第十八章電泳為什么不連續(xù)系統(tǒng)或連續(xù)系統(tǒng)的聚丙烯酰胺凝膠電泳比瓊脂電泳分辨率高？1影響帶電顆粒在電場(chǎng)中泳動(dòng)速度的因子有哪些？6簡(jiǎn)述凝膠電泳法測(cè)定蛋白質(zhì)分子質(zhì)量的原理及操作步驟。7凝膠等電點(diǎn)聚焦的原理是什么？凝膠的濃度和純度、凝膠中兩性電解質(zhì)的濃度，以及聚焦時(shí)間對(duì)分辨率有何影響？為什么？8凝膠等電點(diǎn)聚焦和一般凝膠電泳在操作上有哪些不同的地方？9凝膠電泳

7、有哪些用途？用它怎樣鑒定樣品純度？10.印跡法有何印跡法有何`特點(diǎn)？為什么蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)特點(diǎn)？為什么蛋白質(zhì)經(jīng)過(guò)SDS電泳后仍具有抗原性電泳后仍具有抗原性4哪些因子影響聚丙烯酰胺凝膠的化學(xué)聚合速度？預(yù)電泳的目的是什么？預(yù)電泳時(shí)應(yīng)注意哪些問(wèn)題？3配15%聚丙烯酰胺凝膠溶液10ml，需丙烯酰胺和雙丙烯酰胺各多少克？（如a：b=19:1時(shí)，a＝1.425gb=0.075g）第十九章免疫分析7單克隆抗體和多克隆抗體在性質(zhì)上有何差異？單克隆抗體有何應(yīng)用