2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、層析法:層析法:利用混合樣品中,不同物質(zhì)在固定相和流動(dòng)相中的分布程度不同而進(jìn)行分離的方法稱其為層析法(或色譜法)。特點(diǎn):應(yīng)用范圍廣;可對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量、定性和純度鑒定;柱層析(columnchromatography)將固定相裝于柱內(nèi),使樣品在層析柱中進(jìn)行分離。紙層析(paperchromatography)用濾紙作液體的載體(擔(dān)體suppt),點(diǎn)樣后,用流動(dòng)相展開,以達(dá)到分離鑒定的目的。薄層層析(thinlayerchromatogra

2、phy)將適當(dāng)粒度的吸附劑在玻璃板上鋪成薄層,以紙層析類似的方法進(jìn)行物質(zhì)的分離和鑒定分配定律:分配定律:分配系數(shù)K=試樣在固定相中的濃度試樣在移動(dòng)相中的濃度=CASCAM(1)在定溫、定壓下,在一定的溶劑系統(tǒng)中,一定的物質(zhì)其K值保持不變,不同的物質(zhì)其K值不同(2)當(dāng)溫度、壓力或溶劑系統(tǒng)改變時(shí),對(duì)于一定的物質(zhì)來說,其K值也隨之改變(3)K值大于1,物質(zhì)在S相中的濃度大于其在M相中的濃度,反之則小分配比率(容量因子)k’=化合物在固定相中的

3、量化合物在移動(dòng)相中的量=pqK=(pVs)(qVm)(G=k’)=KVsVm容量因子與溶劑系統(tǒng)的組成、體系的溫度、壓力有關(guān),還與兩相的體積比值有關(guān)理論塔板數(shù)N及理論塔板高度HETP=L(柱長(zhǎng))N影響因素HETP=Cmd2uDmCm溶質(zhì)分子的濃度;d固定相顆粒直徑;u流速;Dm溶質(zhì)分子的擴(kuò)散系數(shù)高流速可以高樣品輸出性和高產(chǎn)量;低流速可提高分辨率影響分離的因素:①洗脫曲線的參數(shù)②分離度Rs③分離系數(shù)α(代表了兩個(gè)物質(zhì)在相同的色譜條件下的分離

4、選擇性樣品區(qū)帶擴(kuò)散的因素:柱內(nèi)擴(kuò)散(渦流擴(kuò)散、縱向擴(kuò)散、傳質(zhì)速率)、柱外擴(kuò)散(樣品、層析介質(zhì)、裝柱、層析條件、死體積)塔板理論塔板理論:分配系數(shù)大的組分,每次達(dá)到平衡的時(shí)間長(zhǎng),從層析柱中后流出。一個(gè)層析柱的塔板數(shù)越多,分離次數(shù)越多,柱效越高理論塔板高度理論塔板高度HETP=Cmd2uDmCm溶質(zhì)分子的濃度溶質(zhì)分子的濃度d固定相顆粒直徑固定相顆粒直徑u流速流速Dm溶質(zhì)分子的擴(kuò)散系數(shù)溶質(zhì)分子的擴(kuò)散系數(shù)聚焦層析聚焦層析(chromatofoc

5、using)它是根據(jù)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)的差異與蛋白質(zhì)的離子交換作用進(jìn)行分離純化的。適用于分離某些蛋白質(zhì)分子量和極性方面的性質(zhì)十分接近,而等電點(diǎn)有區(qū)別的物質(zhì)特點(diǎn):特點(diǎn):①離容量大(能分離幾百毫克蛋白質(zhì)樣品)②辨率很高(有洗脫峰被聚焦效應(yīng)濃縮,峰寬度可達(dá)0.040.05pH單位);③作簡(jiǎn)單(不需特殊的操作裝置)從分離的蛋白質(zhì)中去除多緩沖劑的方法:沉淀法。凝膠過濾法、親和層析法、疏水層析法。親和層析親和層析AC(AffinityChromatog

6、raphy):根據(jù)生物分子間親和吸附和解吸的原理建立起來①?gòu)?qiáng)酸型:SM磺甲基;SE磺乙基強(qiáng)酸性,用于極低pH;SP磺丙基;P磷酸低pH②弱酸型:CM羧甲基pH4以上陰離子交換劑(堿性):陰離子交換劑中的可解離基團(tuán)是:伯胺:NH3;仲胺:NH2CH3叔胺:NH(CH3)2;季胺:N(CH3)3(弱→強(qiáng))①?gòu)?qiáng)堿型:Q三甲基氨基甲基;TEAE三乙基氨基乙基3QAE二乙基(α羥丙基)氨基乙基②弱堿型:DEAE二乙基氨基乙基pH8.6以下支持物:

7、樹脂;纖維素;凝膠(葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠)離子交換劑的理化性質(zhì)離子交換劑的理化性質(zhì):酸堿性,交換容量,顆粒直徑,網(wǎng)孔大小,使用的pH范圍,使用的溫度范圍,耐受的溶劑系統(tǒng),顏色,耐壓程度,氣味,比重,吸水膨脹率。離子交換平衡的選擇性系數(shù)離子交換平衡的選擇性系數(shù):K磺酸型離子交換樹脂對(duì)陽(yáng)離子的親和規(guī)律:在稀的水溶液中,同價(jià)離子:原子序數(shù)↑,離子半徑↑水化半徑↓,親和力↑;不同價(jià)離子:價(jià)數(shù)↑,親和力↑。LiSO22C2O42INO2CrO4

8、2BrscnClHCOOOHFCH3COO離子交換動(dòng)力學(xué):膜擴(kuò)散離子交換動(dòng)力學(xué):膜擴(kuò)散→粒子擴(kuò)散粒子擴(kuò)散→交換反應(yīng)交換反應(yīng)→粒子擴(kuò)散粒子擴(kuò)散→膜擴(kuò)散膜擴(kuò)散吸附狀態(tài)吸附狀態(tài):牢固吸附、有限吸附平衡、完全解吸。轉(zhuǎn)變條件轉(zhuǎn)變條件:pH,離子強(qiáng)度離子交換柱層析的洗脫方式洗脫方式:①恒溶劑洗脫:采用固定pH及離子強(qiáng)度的洗脫方法;②梯度洗脫:采用連續(xù)改變pH、離子強(qiáng)度的洗脫方法(梯度類型包括pH、離子強(qiáng)度、pH與離子強(qiáng)度)③階段洗脫:采用相繼改變p

9、H、離子強(qiáng)度的洗脫方法陰離子pH從高到低e.g.陽(yáng)離子B吸附在柱上,洗脫可采用不同的緩沖液,開始時(shí)采用氫離子濃度較低的緩沖液,然后在該緩沖液中逐漸增加氫離子濃度以取代吸附在柱上的B離子;或在同一種pH值的緩沖液中增加離子強(qiáng)度;或在相同pH值和離子強(qiáng)度的緩沖液中加入一種比離子交換層析介質(zhì)親和力更強(qiáng)的陽(yáng)離子來取代吸附在柱上的B離子。對(duì)于具有兼性離子的生物大分子,要對(duì)溶液的pH值,生物大分子的等電點(diǎn)和離子交換層析介質(zhì)三種情況同時(shí)進(jìn)行考慮。介質(zhì)

10、選擇:緩沖液的pH值高于樣品等電點(diǎn),選擇陰離子交換介質(zhì),蛋白質(zhì)向陽(yáng)極跑反向?qū)游龇聪驅(qū)游鯮PC:是利用被分離樣品中不同生物分子表面的極性差別,而將其分離純化的一種層析技術(shù)。反相層析的固定相是非極性的,流動(dòng)相繼續(xù)大,非極性樣品親和力大用有機(jī)溶劑,極性小,則非極性樣品親和力小,先出來特點(diǎn)特點(diǎn):高效,一般用于分離小分子極性大的物質(zhì)金屬螯合層析金屬螯合層析MCC或IMAC金屬螯合層析是利用不同蛋白質(zhì)分子表面所含組氨酸的差別而將其分離純化的一種層析

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