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文檔簡介
1、以防風不同組織為外植體,通過誘導愈傷組織及其分化建立了再生體系,獲得如下結果:
1.外植體:以種子、根、莖段、子葉和葉片為外植體均能誘導出愈傷組織,但在出愈率和愈傷生長方面差異較大,其中莖段愈傷組織效果較好,是比較理想的外植體。
2.培養(yǎng)基和激素配比:不同激素組合對愈傷組織的形成影響很大,其中生長素2,4-D是愈傷組織形成的關鍵因素。最佳誘導培養(yǎng)基為MS+2,4-D1.5mg.L-1+6-BA1.0mg.L-
2、1+KT0.5mg.L-1,最高誘導率可達96.7%。不同激素組合下愈傷組織均可增殖,在MS+6-BA1.0mg.L-1+NAA1.0mg.L-1培養(yǎng)基上,愈傷組織生長迅速,呈黃綠色,質地緊密,愈傷增殖倍數(shù)達5.2。這種繼代培養(yǎng)的愈傷組織在后期的分化過程中分化程度較高,是最佳繼代培養(yǎng)基。
3.愈傷組織再分化:將生長較好的愈傷組織轉接到分化培養(yǎng)基上,愈傷組織逐漸變綠,并形成很多突起,進而形成多芽體。篩選出最佳分化培養(yǎng)基為MS
3、+6-BA1.0mg.L-1+NAA0.5mg.L-1,分化率高達75.0%。
4.再生苗生根培養(yǎng):再生苗接種到生根培養(yǎng)基上15d后開始生根,最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.5mg.L-1+6-BA0.2mg.L-1,生根率達65.0%,平均根數(shù)為16.3條。
5.煉苗移栽:將生根苗在自然光下閉瓶煉苗2-3d,然后逐漸打開瓶蓋煉苗1-2d,讓小苗逐漸適應外界條件后進行移栽。移栽前基質用0.1%多菌靈溶液
4、消毒。移栽最佳基質為腐質土:蛭石:河沙(1:1:1),移栽成活率達到92.0%。
6.試管苗的RAPD分析:對由同一莖段愈傷組織分化培養(yǎng)出的15株生長良好的試管苗和對照進行RAPD分析,200個隨機引物中有一個引物(S4)在植株6中擴增出一個大小為640bp左右的穩(wěn)定多態(tài)性片段。結果說明組織培養(yǎng)可以很好的保持防風的遺傳特性,但同時也可能導致DNA分子的改變,產生了遺傳變異。
7.培養(yǎng)條件與玻璃化:外源激素、瓊
5、脂濃度和光強對其組織培養(yǎng)過程中的玻璃化苗產生的影響明顯。細胞分裂素6-BA的濃度過高、瓊脂濃度過低、弱光照強度極易導致防風試管苗玻璃化。
8.玻璃苗與正常苗過氧化物酶同工酶:結果表明玻璃苗與正常苗相比少了活性較高的Rf0.150、Rf0.179、Rf0.300三條帶,但多了活性較高的Rf0.140、Rf0.147、Rf0.156、Rf0.182四條帶及兩條次生帶。究其原因:一是可能某結構基因山多啟動子調控,玻璃化導致了結構
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