實(shí)驗(yàn)三血型測(cè)定

1、實(shí)驗(yàn)三,人類ABO血型檢測(cè)及人血涂片的制備和觀察,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解人類血型的遺傳特性及其遺傳方式；掌握人體血型（ABO型）的檢驗(yàn)方法。同時(shí)了解自己的血型。 觀察紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，掌握ABO血型鑒定的原理。掌握血涂片的制備方法；認(rèn)識(shí)紅細(xì)胞及各種白細(xì)胞的典型形態(tài)；,實(shí)驗(yàn)原理,血型是指紅細(xì)胞的血型，是根據(jù)紅細(xì)胞膜外表面存在的特異性抗原（鑲嵌于紅細(xì)胞膜上的糖蛋白和糖脂）來(lái)確定的，這種抗原或凝集原是由遺傳決定的?？贵w或凝集素存在于血清中，它與紅

2、細(xì)胞的不同抗原起反應(yīng)，產(chǎn)生凝集，最后溶解，由于這種現(xiàn)象，臨床上在輸血前必須注意鑒定血型，以確保安全輸血。通常輸血反應(yīng)中大多數(shù)注意ABO血型系統(tǒng)。,最早的輸血試驗(yàn)是英國(guó)人羅維爾在1665年進(jìn)行的。他把一條失血過多瀕于死亡的狗的靜脈與另一條健康狗的靜脈用鵝毛管連接起來(lái)。失血的狗逐漸從瀕死狀態(tài)恢復(fù)過來(lái)。 1667年，法國(guó)國(guó)王的御醫(yī)丹尼斯首先進(jìn)行了動(dòng)物血液輸人人體的試驗(yàn)。他將400毫升羊血注入一個(gè)失血多病的青年人的靜脈，這個(gè)青年人竟奇跡

3、般地活了下來(lái)。此后他又進(jìn)行了多次輸血試驗(yàn)，也安然無(wú)恙。但他在1668年的一次試驗(yàn)中，卻以失敗而告終。他給一名患者輸動(dòng)物血，第一次輸血后病人病情有所好轉(zhuǎn)；第二次輸血后，病人出現(xiàn)發(fā)熱、腹痛、大汗、血尿等癥狀，第三次輸血后病人死亡。死者妻子告丹尼斯犯有殺人罪，為此，法國(guó)議會(huì)特別制定法律：不許再進(jìn)行輸血。 1825年，英國(guó)的布倫德爾醫(yī)生從一個(gè)人直接輸血給另一個(gè)人首次成功，但是這一成功具有很大的偶然性。據(jù)醫(yī)書記載：19世紀(jì)末葉有346人接

4、受過輸血治療，另有129人被試圖輸人動(dòng)物的血液。當(dāng)時(shí)人們還沒有認(rèn)識(shí)到血型的不同，因輸血發(fā)生的事故時(shí)有發(fā)生，因此，輸血是要冒極大風(fēng)險(xiǎn)的。,輸血的變遷,蘭德斯坦納 （K.Landsteiner),1868年生于奧地利首都維也納。維也納大學(xué)醫(yī)學(xué)院畢業(yè)后，繼續(xù)留校，學(xué)習(xí)化學(xué)。1900年發(fā)現(xiàn)A、B、O3種血型。1919年在荷蘭巴庫(kù)的一所醫(yī)院工作。1922年赴美，受聘于洛克菲勒研究所。1930年獲諾貝爾生理學(xué)醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。1943年逝世。,蘭德斯

5、坦納的貢獻(xiàn),卡爾·蘭德斯坦納是奧地利著名醫(yī)學(xué)家，他因發(fā)現(xiàn)了Ａ、Ｂ、Ｏ血型而于１９３０年獲得諾貝爾醫(yī)學(xué)及生理學(xué)獎(jiǎng)。    １９００年，蘭德斯坦納在維也納病理研究所工作時(shí)，發(fā)現(xiàn)一個(gè)人的血清有時(shí)會(huì)與另一個(gè)人的紅細(xì)胞發(fā)生凝集。隨后，蘭德斯坦納進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)人的血液按紅細(xì)胞與血清中的不同抗原和抗體，可分為不同類型，他以Ａ、Ｂ、Ｏ三個(gè)字母來(lái)代表他發(fā)現(xiàn)的三種不同類型的血液。不同血型的血液混合在一起，就會(huì)發(fā)生凝

6、血、溶血現(xiàn)象。    １９０２年，蘭德斯坦納的兩名學(xué)生把實(shí)驗(yàn)范圍擴(kuò)大到１５５人，又發(fā)現(xiàn)了較為稀少的ＡＢ型血。１９２７年，國(guó)際上正式采納了蘭德斯坦納原定的字母命名，確定血型有Ａ、Ｂ、Ｏ、ＡＢ四種類型。至此，現(xiàn)代血型系統(tǒng)正式確立。    蘭德斯坦納在認(rèn)識(shí)人類血型方面的杰出研究成果，不僅為安全輸血和治療新生兒溶血癥提供了科學(xué)的理論基礎(chǔ)，而且對(duì)免疫學(xué)、遺傳學(xué)、法醫(yī)學(xué)的發(fā)展都

7、帶來(lái)了深遠(yuǎn)影響。,紅細(xì)胞血型血型（blood group）：人類血液由遺傳控制的個(gè)體性狀之一，是血液的遺傳標(biāo)記(genetic marker) 紅細(xì)胞血型：指紅細(xì)胞表面抗原由遺傳所決定的個(gè)體差異廣義的血型概念：指包括血液、體液、分泌液、排泄物及組織細(xì)胞上，由遺傳所控制的個(gè)體性狀,,血型鑒定,紅細(xì)胞上不含有Ａ、Ｂ抗原，而血清中含有抗Ａ和抗Ｂ抗體稱為Ｏ型。,紅細(xì)胞上含有Ａ抗原，而血清中含有抗Ｂ抗體的稱為Ａ型,紅細(xì)胞上含有Ｂ抗原

8、，而血清中含有抗Ａ抗體的稱為Ｂ型,紅細(xì)胞上含有Ａ和Ｂ抗原，而血清中無(wú)抗Ａ、抗Ｂ抗體的稱為ＡＢ型,父母的血型與子女的血型關(guān)系,人類血型有數(shù)十億種之多。人類除同卵雙生子女外，再也找不到兩個(gè)血型完全相同的人。,Rh血型,Rh是恒河猴（Rhesus Macacus）外文名稱的頭兩個(gè)字母。蘭德斯坦納等科學(xué)家在1940年做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)恒河猴和多數(shù)人體內(nèi)的紅細(xì)胞上存在Rh血型的抗原物質(zhì)，故而命名的。凡是人體血液紅細(xì)胞上有Rh抗原（又稱D抗

9、原）的，稱為Rh陰性。這樣就使已發(fā)現(xiàn)的紅細(xì)胞A、B、O及AB四種主要血型的人，又都分別一分為二地被劃分為Rh陽(yáng)性和陰性兩種。,隨著對(duì)Rh血型的不斷研究，認(rèn)為Rh血型系統(tǒng)可能是紅細(xì)胞血型中最為復(fù)雜的一個(gè)血型系。Rh血型的發(fā)現(xiàn)，對(duì)更加科學(xué)地指導(dǎo)輸血工作和進(jìn)一步提高新生兒溶血病的實(shí)驗(yàn)診斷和維護(hù)母嬰健康，都有非常重要的作用。根據(jù)有關(guān)資料介紹，Rh陽(yáng)性血型在我國(guó)漢族及大多數(shù)民族人中約占99.7%，個(gè)別少數(shù)民族約為90%。在國(guó)外的一些民族中，Rh陽(yáng)

10、性血型的人約為85%，其中在歐美白種人鐘，Rh陰性血型人約占15%。,實(shí)驗(yàn)材料及試劑,顯微鏡、載玻片、刺血針、消毒牙簽、A型和B型標(biāo)準(zhǔn)血清、生理鹽水、酒精棉球。 受檢者血液75%乙醇、瑞氏染液、磷酸鹽緩沖液,1．取一塊清潔玻片，用蠟筆劃上記號(hào)，左上角寫A字，右上角寫B(tài)字。2．用小滴管吸A型標(biāo)準(zhǔn)血清（抗B）一滴加入左側(cè)，用另一小滴管吸B型標(biāo)準(zhǔn)血清（抗A）一滴加入右側(cè)。3．穿刺手指取血，玻片的每側(cè)各放入一小滴血，用牙簽攪拌，使每側(cè)

11、抗血清和血液混和。每邊用一支牙簽，切勿混用。,【方法與步驟】,組長(zhǎng)領(lǐng)取實(shí)驗(yàn)用品：每?jī)山M一盒血型檢測(cè)試劑每?jī)扇艘恢徊裳P每人三片載玻片、一個(gè)采血針,①,②,抗A,抗B,采血前用75％酒精棉球消毒受試者的無(wú)名指指腹,采血,第一、第二滴血滴加于ABO血型檢測(cè)試劑液滴中，用牙簽將血液和試劑混合第三滴血滴加于一干凈的載玻片一端,抗A,抗B,血液與試劑混合后，靜置5-15分鐘后觀察結(jié)果,推片：擠出第三滴血置于載玻片的右側(cè),再取另一張邊緣光滑

12、的載玻片，斜置于血滴的前緣，先向后稍移動(dòng)輕輕觸及血滴，使血液沿玻片端展開成線狀。,,,,30~45°,兩玻片的角度以30-45°為宜，輕輕將推片向前快速而均勻地推進(jìn)，形成頭尾明顯的舌形血膜。靜置使其干燥。,染色,待涂片在空氣中完全干燥后，滴加3-4滴瑞氏染液蓋滿血膜為止，染色30秒。然后滴加等量磷酸鹽緩沖液，使其與染液均勻混合靜置10～15 min用蒸餾水沖去染液，吸水紙吸干，室溫下干燥后顯微鏡觀察。,觀察有無(wú)凝

13、集，并按下表判定結(jié)果,呈現(xiàn)均勻的淡紅色時(shí)，表明不凝集，用“一”號(hào)表示。 在試劑里凝結(jié)成絮團(tuán)狀，形成鮮明的對(duì)比，表明凝集，用“十”號(hào)表示。,血涂片鏡檢結(jié)果-紅細(xì)胞,中性粒細(xì)胞,細(xì)胞核形態(tài)多樣，呈臘腸、分葉、桿狀等胞質(zhì)呈粉紅色，含淡紫色或淡紅色顆粒,淋巴細(xì)胞,小、中、大淋巴細(xì)胞細(xì)胞核圓形，著色深，占細(xì)胞大部分胞質(zhì)少，嗜堿性，被染成蔚藍(lán)色，含少量嗜天青顆粒,單核細(xì)胞,白細(xì)胞中體積最大的細(xì)胞細(xì)胞呈圓形或橢圓形細(xì)胞核形態(tài)多樣，呈卵圓形