B→O血型改造動物實驗研究.pdf

1、該課題組采用RT-PCR方法,從中國海南Catimor咖啡豆中克隆了α-半乳糖苷酶cDNA,全長1.1Kb,構(gòu)建了其表達(dá)載體,電穿孔法導(dǎo)入畢赤酵母GS115細(xì)胞,篩選出重組α-半乳糖苷酶菌株.離子交換層析純化出α-半乳糖苷酶,酶比活性從15U/mg提高到28.14U/mg.進(jìn)一步鑒定了酶的生物化學(xué)性質(zhì),其Km=0.275mmol/L,Vmax=0.014mmol/L/min.該研究在此基礎(chǔ)上,嘗試了基因重組α-半乳糖苷酶菌株在5L發(fā)酵罐

2、中的表達(dá)擴(kuò)增以及從發(fā)酵液中純化α-半乳糖苷酶的研究.并在pH=5.5-5.6、每mL紅細(xì)胞使用100U的基因重組α-半乳糖苷酶、26℃、2 h條件下,成功地清除了人B型紅細(xì)胞表面B抗原.該研究著重開展了人B→O血型改造的動物實驗研究,首先分別用吸收放散法和常規(guī)血型檢測法篩選出合適的獼猴(rhesus monkey)和長臂猿(gibbon),用批量制備的基因重組α-半乳糖苷酶對類人B型獼猴紅細(xì)胞(rhesus monkey red blo

3、od cells,rRBC)和B型長臂猿紅細(xì)胞(gibbon red blood cells,gRBC)表面抗原進(jìn)行酶解,觀察B抗原清除情況以及酶解對紅細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能是否有影響;經(jīng)酶解后的B型紅細(xì)胞再回輸給類人A型獼猴和A型長臂猿,檢測經(jīng)α-半乳糖苷酶酶解后,供體紅細(xì)胞在受體動物體內(nèi)24h存活率和半衰期,觀察其能否正常存活;對受血動物的輸血安全性進(jìn)行評價,分析回輸后急性、慢性輸血反應(yīng);以及檢測受體動物體內(nèi)有無因α-半乳糖苷酶引起的α-半