NDV免疫雞IFN-γ、IL-2和IL-6細(xì)胞因子表達(dá)的動(dòng)態(tài)變化研究.pdf

1、新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)引起的一種禽類(lèi)急性、高度接觸性傳染病.ND主要特征是呼吸困難、下痢、神經(jīng)機(jī)能紊亂、粘膜和漿膜出血.ND的病原屬于副粘病毒科副粘病毒亞科腮腺炎病毒屬,它的宿主范圍廣泛,可以感染禽類(lèi)50個(gè)目中的27個(gè).近幾年,非典型ND發(fā)生的比率升高,并有不斷加重的趨勢(shì),該病發(fā)病急、致死率高,對(duì)養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展構(gòu)成嚴(yán)重威脅.該研究根據(jù)已發(fā)表

2、的雞IFN-γ、IL-2、IL-6、β-actin基因序列用Oligo 6.1和Primer5.0軟件設(shè)計(jì)了7對(duì)引物,采用RT-PCR的方法從脾臟和外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)提取的總RNA中分別擴(kuò)增了雞細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2、IL-6的部分序列,通過(guò)序列測(cè)定進(jìn)行驗(yàn)證后,對(duì)上述細(xì)胞因子的mRNA進(jìn)行了定量檢測(cè),建立了雞細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2、IL-6 mRNA表達(dá)量的RT-PCR檢測(cè)方法.應(yīng)用我們所建立的方法在NDV病毒多肽

3、疫苗和不同結(jié)構(gòu)CpG與新城疫疫苗聯(lián)合免疫雞后,對(duì)IFN-γ、IL-2、IL-6的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行監(jiān)測(cè).NDV免疫試驗(yàn)結(jié)果表明,與空白對(duì)照組相比,接種V4全病毒與LaSota P5段純化多肽的實(shí)驗(yàn)組IFN-γ mRNA的表達(dá)量變化不大(P>0.05),其它各實(shí)驗(yàn)組IFN-γ mRNA的表達(dá)量都有大幅下降.CpG與NDV聯(lián)合免疫試驗(yàn)結(jié)果表明,與NDV對(duì)照組相比,直鏈CpG實(shí)驗(yàn)組的NDV特異性細(xì)胞因子表達(dá)水平最高,免疫增強(qiáng)效果最明顯(P<0.05

4、);而莖環(huán)CpG實(shí)驗(yàn)組的NDV特異性細(xì)胞因子表達(dá)水平?jīng)]有明顯升高,免疫增強(qiáng)效果不明顯(P>0.05).直鏈CpG實(shí)驗(yàn)組IL-6 mRNA表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)的高于其他實(shí)驗(yàn)組,在三種細(xì)胞因子中,IL-6 mRNA表達(dá)量一直處于整個(gè)實(shí)驗(yàn)組的最高水平.總之,該實(shí)驗(yàn)成功地建立了雞細(xì)胞因子mRNA表達(dá)量的RT-PCR檢測(cè)方法,并對(duì)NDV免疫雞外周血單個(gè)核細(xì)胞中細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2、IL-6 mRNA表達(dá)量的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行了研究.同時(shí)作為一個(gè)很好的免疫